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胶体金实验酶标法对人类免疫缺陷病毒抗体检测的准确性分析

2024-09-06 7 上传者：管理员

摘要：目的探究胶体金实验与酶标法在人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）抗体检测中的应用价值。方法选取2021年1月—2023年12月在资溪县疾病预防控制中心进行HIV抗体检测的2 000例患者，对初筛阳性的25例患者血清标本分别进行胶体金实验与酶标法检测，初筛阳性标本送市疾控确诊。将免疫印迹（western blot,WB）诊断结果作为金标准，分析上述2种检测方法诊断效能，对阳性样本带型分布情况进行统计分析。结果在初筛阳性的25例患者中，WB诊断显示阳性14例、阴性11例；酶标法与WB有着良好一致性，酶标法诊断灵敏度、准确率、阴性预测值高于胶体金实验（P<0.05）；在酶标法诊断的HIV阳性患者中，g P120、g P160出现率最高，P55出现率最低。结论在HIV抗体检测中，酶标法有着比胶体金实验更高的诊断效能，能为阳性样本带型分布提供指导。

关键词：
人类免疫缺陷病毒
抗体检测
胶体金实验
艾滋病
酶标法
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获得性免疫缺陷综合征即艾滋病，因感染HIV所致。HIV主要作用于机体靶细胞和效应细胞。随着HIV感染时间延长，患者免疫功能会遭到严重破坏，最终可出现多种感染性疾病而死亡[1]。目前，临床尚缺乏治愈艾滋病的有效手段，但如果能尽早发现病情并展开抗逆转录病毒治疗，可延缓病情进展，减少病毒传播。想要尽早确诊病情，临床需要做出及时、准确的诊断。WB试验操作简单且灵敏度较高，被认为是HIV抗体初筛后的首选补充试验，但需要花费较长的检测时间且价格较高，很难大范围推广[2]。胶体金实验操作简单，可迅速得到检验结果，但容易受到外界因素影响且特异度较低。近年来，价格低廉且诊断准确率高的酶标法被应用于HIV抗体检测中[3]。本研究将2 000例接受HIV抗体检测的人员作为研究对象，就胶体金实验与酶标法的诊断价值进行对比分析，报告如下。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年1月—2023年12月在资溪县疾病预防控制中心进行HIV抗体检测的2 000例患者，其中男性1 249例，女性751例；年龄20～75岁，平均（41.28±7.54）岁；文化程度，小学/初中1 124例、高中/中专748例、大专及以上128例。本研究经资溪县疾病预防控制中心批准。

纳入标准：临床资料完整；年龄≥18岁，具备生活自理能力；认知正常，可配合完成研究；签署知情同意书。

排除标准：存在免疫系统疾病，正接受免疫治疗者；妊娠期或哺乳期女性；存在精神系统疾病者；合并血液系统疾病者。

1.2 方法

标本采集：严格依照临床技术要求采集患者5 m L空腹静脉血，急诊或特殊情况也可随机采集。使用离心机以3 000 r/min离心处理15 min，分离血清后备用，尽快按照要求完成检测。无法在24 h内完成检测的样本，在2～8℃的冰箱内保存。

筛查试验：（1）如果HIV筛查试验结果无反应，则报告为阴性。（2）在筛查试验有反应后，不直接报告为阳性，需依据实验室规定进行复检试验。2次检查结果均无反应，报告为HIV阴性；至少1次结果为有反应，报告为待确定。

对初筛阳性患者分别进行胶体金实验与酶标法检测。利用胶体金实验试剂盒以双抗原夹心法测定样本中是否存在HIV抗体，观察有无红色反应线产生，在检测区与指控区均出现红色反应线为阳性。使用酶标仪，应用HIV抗体诊断试剂盒进行酶标法检测，依据抗原-抗体-酶标抗原复合物在酶标仪上显示出的吸光度（optical density,OD）值判断有无HIV抗体存在。

WB诊断：未出现特异性条带，诊断为阴性；有特异性条带，同时出现2条及以上的env带或出现1条及以上的env带及1条及以上的gag带或pol带，诊断为阳性。对于出现特异性条带但不具备判定阳性条件的人员，2～4周后随访，进行综合判断分析，得出结论。

1.3 观察指标

(1）诊断效能。依据WB结果，对胶体金实验与酶标法的诊断一致性进行分析，计算胶体金实验与酶标法的诊断灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值与阴性预测值。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%。特异度=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%。准确率=（真阳性+真阴性）/总人数×100%。阳性预测值=真阳性/（真阳性+假阳性）×100%。阴性预测值=真阴性/（真阴性+假阴性）×100%。（2）阳性样本带型分布情况。统计酶标法中不同HIV阳性样本的带型分布情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件处理数据，计数资料以百分比表示，行χ2检验，一致性进行Kappa检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 诊断效能

25例初筛阳性样本中，WB诊断显示阳性14例、阴性11例，见表1。酶标法诊断一致性Kappa值=0.754,P<0.05。胶体金实验诊断一致性Kappa值=0.116,P=0.561。酶标法诊断灵敏度、准确率、阴性预测值高于胶体金实验（P<0.05），见表2。

表1 胶体金实验与酶标法诊断结果

表2 胶体金实验与酶标法诊断效能

2.2 阳性样本带型分布情况

在酶标法诊断为真阳性的13例患者血清样本中，g P120、g P160出现率最高，P55出现率最低，见表3。

表3 酶标法检测HIV抗体阳性样本带型分布情况

3、讨论

艾滋病是由HIV感染引起的传染性极强的免疫缺陷性疾病。近年来艾滋病发生率持续上升是非常严重的公共卫生问题之一。HIV属于反转录科慢病毒属，进入机体后会通过逆转录形式形成双链DNA并进入到细胞核中。人体在感染HIV后的1～2周，HIV大量复制，此时血液出现高滴度的病毒载量，还会出现相应的高浓度抗原。免疫系统识别HIV后，机体会启动体液免疫与细胞免疫，HIV抗体水平会逐渐升高，能在感染后几周内被检测出来[4]。随着抗原与抗体的结合，HIV抗原浓度逐渐下降，机体病毒滴度也会恢复至稳定水平。在无任何治疗情况下，HIV抗体会持续处于较高水平，同时由于CD4+T淋巴细胞水平处于正常范围内，患者可能无任何症状表现。一旦CD4+T淋巴细胞水平不足200个/μL时，病毒载量会持续增加，此时会进入到艾滋病期，患者会因免疫下降而感染疾病。HIV会不断破坏机体免疫系统中的辅助T淋巴细胞，导致患者对外界环境失去抵抗能力，从而感染多种疾病，患者最终可因同时感染多种疾病而死[5]。HIV有着较多的传播渠道，存在隐匿的窗口期，目前无法治愈，但通过早期治疗能帮助患者恢复免疫功能，还能有效阻止病毒传播。因此，如何做好疾病的早期诊断成为临床关注的重点问题之一。实验室诊断是识别与监测HIV感染的重要方法。通过获取患者血液或体液进行检测，可及早发现个体是否患病，从而展开针对性治疗，控制病情进展，预防病毒传播。

现阶段，我国HIV实验室检测依据样本情况选择合适的初筛试剂，对于有反应的样本进行复检试验，根据2次试验结果决定是否要展开确认试验。如果确认试验结果为阴性，但由于存在流行病学史或确认试验结果不准确，需要在后续进行随访，再次进行检验；如果确认试验结果为阳性，则判断患者存在HIV感染[6]。随着临床对HIV认识的加深，实验室诊断方法也在改进。WB检测HIV抗体的试剂盒在20世纪80年代面世。WB检测有着较高的灵敏度与特异度，目前被用于HIV抗体的确认试验中。WB检测有统一的标准，是我国最常用的抗体确认试验。WB有较长的检测窗口期，不利于发现早期HIV感染，不作为临床初筛方法[7]。胶体金实验是以胶体金为追踪标志物进行检验的免疫层析方法，当待检测样本中存在HIV或HIV抗原时，样本垫的包被区就会出现显色符合物线条。胶体金实验在质控区显色情况下才有意义，灵敏度与特异度都相对较低，更多被用于大数量、时间紧迫的检查中。酶标法通过将待检血清加入到固体承载物中并与吸附的抗体或抗原反应，酶标记的抗体会出现显色变化，能帮助临床判断HIV是否存在，而且颜色的深浅程度还能为临床定量分析提供指导[8]。在20世纪80年代，临床出现了第1代可用于HIV抗体检测的酶标法试剂，通过夹心法原理可在患者感染6～8周实现对抗体的检测，但由于纯度不高且夹杂抗原，诊断准确率较低。20世纪90年代后，临床出现了第2代酶标法试剂，对包被蛋白进行改良后可更好检测到HIV抗体，不仅提高了特异度与灵敏度，也可有效缩短检测时间。1994年临床出现了第3代酶标法试剂，利用“三明治”原理进一步缩短了获得结果的时间，还进一步提高了试剂灵敏度。第4代酶标法试剂检测方法采用双抗原夹心与双抗体夹心，能实现对抗原、抗体的一同检测，但无法区分两者的阳性结果。这就导致酶标法检测虽然缩短了检测时间，丰富了检测信息，但由于抗体、抗原之间可能互相干扰出现多种假阳性情况。故临床建议使用2种试剂进行联合检验，从而减少漏检情况的出现。目前，临床已经基于化学发光技术开发出了第5代酶标法试剂，在充分利用多重流式免疫分析技术上，通过对总抗体与核心抗原进行检测，可有效完成对抗体和抗原的区分，能为临床提供更加明确的诊断信息，缩短了确诊时间，患者也能尽早接受抗逆转录病毒治疗[9]。

本研究结果显示，在WB结果作为金标准情况下，酶标法诊断一致性Kappa值=0.836,P<0.05，提示酶标法检测有着良好的一致性；酶标法诊断灵敏度、准确率、阴性预测值高于胶体金实验（P<0.05），表明酶标法有着较高的诊断效能，可减少漏诊误诊情况。与胶体金实验相比，酶标法有着较高稳定性，在检测过程中不会受到样本中溶血及脂血等异常情况的影响，通过酶标仪来获得数据，能减少认为因素对检验结果的影响，提升诊断准确率[10]。本研究结果还显示，酶标法诊断为真阳性的13例样本中，g P120、g P160出现率最高，P55出现率最低，提示该方法能帮助临床了解抗体类型，完成对疾病传播风险的评估，为后续个体化治疗方案的制定提供指导。

综上所述，在HIV抗体检测中，酶标法有着比胶体金实验更高的诊断效能，能显示阳性样本带型分布情况，为患者后续治疗提供精准、全面的指导。需要注意的是，酶标法在检测中依旧会受到人为、环境、类风湿因子等干扰，可能导致假阳性、假阴性的出现。在检测过程中应当加强质控，结合受检人员流行病史、HIV感染不同进程，选择合适的方法检测，对反应性筛选实验进行确认，以减少误诊、漏诊情况。

参考文献:

[1]闵振彪,陈丽萍,金善英.胶体金试验､酶标法对HIV抗体检测的准确性分析[J].现代诊断与治疗,2023,34(14):2157-2159.

[2]石武,杨文娟,魏垠昊,等.HIV区分抗原抗体检测试剂指导下的HIV确证流程优化[J].四川医学,2023,44(6):585-592.

[3]柏建芸,赵芳凝,候金余,等.2005—2021年天津市医疗机构HIV/AIDS检测发现情况分析[J].预防医学,2023,35(6):475-479.

[4]林婉珍.艾滋病初筛实验室中酶联免疫吸附试验检测HIV抗体影响因素研究[J].中国医药指南,2022,20(33):121-124.

[5]孙琦,曲新艺,徐莉.免疫印迹法HIV-1抗体检测结果不确定者的转归分析[J].检验医学,2022,37(8):741-744.

[6]罗西,覃世龙,明方钊,等.武汉市MSM人群HIV抗体重复检测的影响因素分析[J].预防医学,2022,34(8):831-835.

[7]杨帆,马晓军,杨文勇,等.HIV抗原/抗体检测的电化学发光法在献血者血液筛查中的应用评估[J].中国输血杂志,2022,35(6):605-607.

[8]尹帆,高倩,赖小玲,等.HIV抗体检测不确定样本免疫印迹及核酸检测结果分析[J].中国皮肤性病学杂志,2022,36(5):564-567.

[9]夏冬艳,刘国武,李佳,等.2017—2020年北京市互联网+尿液HIV抗体检测数据分析[J].中国艾滋病性病,2022,28(1):74-77.

[10]叶晓芳,林小菊,黄妹,等.胶体层析法与酶联免疫吸附试验在HIV抗体检测中的应用价值分析[J].牡丹江医学院学报,2021,42(6):79-81.

文章来源:徐丽.胶体金实验酶标法对人类免疫缺陷病毒抗体检测的准确性分析[J].基层医学论坛,2024,28(25):52-54.