首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 妇产科论文 > 妇科并发病论文 > miR-29和miR-375在妊娠期糖尿病患者外周血中的表达及早期诊断价值研究

miR-29和miR-375在妊娠期糖尿病患者外周血中的表达及早期诊断价值研究

2020-09-16 296 上传者：管理员

摘要：目的：研究miR-29和miR-375在妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)患者外周血中表达及早期诊断价值。方法：选取2018年8月至2019年8月在甘肃省平凉市人民医院接受治疗的40例GDM患者作为观察组，另选取同期糖耐量正常孕妇40例为对照组。检测两组孕妇血糖水平及外周血miR-29和miR-375基因表达量，分析miR-29和miR-375基因表达量与观察组血糖指标的相关性。结果：①观察组FINS水平低于对照组，FPG、2hPG及HbAlc水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；②观察组外周血miR-29表达量低于对照组，miR-375表达量高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；③相关性分析显示，miR-29表达与FINS呈正相关，与FPG、2hPG及HbAlc呈负相关；miR-375表达与FINS呈负相关，与FPG、2hPG及HbAlc呈正相关。结论：GDM患者外周血中miR-29和miR-375表达异常提示GDM易感性，具有一定的临床价值。

关键词：
miR-29
miR-375
妇产科
妊娠期糖尿病
加入收藏

妊娠期糖尿病是我国孕产妇常见的并发症之一，增加产妇妊娠风险，对母婴健康及生命安全造成严重威胁[1]。近年来，GDM发病率在全球呈现上升趋势，糖尿病病情严重程度及血糖控制水平与其对母婴的影响息息相关[2]。该病发病机制尚无定论，临床诊断主要依据产妇在孕中期的血糖水平，目前对于如何在孕早期有效、准确地预测或诊断GDM仍较为滞后。微小RNA(miR）是一类小的非编码RNA，主要参与mRNA转录后的调控，以往对于miRNA的研究多集中于肝肾疾病、冠心病、宫颈恶性肿瘤等领域，对于miRNA与GDM之间的联系研究甚少[3]。本次对miR-29及miR-375在GDM患者外周血中表达及早期诊断价值展开相关研究，具体如下。

资料与方法

一、临床资料

选取2018年8月至2019年8月在甘肃省平凉市人民医院诊治的40例GDM患者作为观察组，另选取同期糖耐量正常孕妇40例为对照组。GDM诊断标准：孕期两次空腹血糖≥7.0mmol/L，或随机血糖≥11.1mmol/L，或行75g葡萄糖耐量试验时空腹以及服用葡萄糖后1、2、3h血糖值中至少两项达到5.3mmol/L、10.0mmol/L、8.6mmol/L及7.8mmol/L[4]。纳入标准：(1)符合上述GDM诊断标准；(2)妊娠前3个月在平凉市人民医院就诊；(3)既往无糖尿病等内分泌病史；(4)患者对本次研究知情同意，并可以进行随访研究。排除标准：(1)年龄<18周岁；(2)多胎妊娠；(3)合并妊娠期高血压或其他内科疾病；(4)脐带或胎盘异常；(5)难以配合本次研究者。本研究得到平凉市人民医院伦理委员会批准，所有标本的获取均得到研究对象同意，并签署知情同意书。

二、方法

1.仪器及试剂：PCR扩增仪（美国PE公司）、AM1560RNA抽提试剂盒（美国Ambion公司）、TaqMan反转录试剂盒（美国APPS公司）、电化学发光法胰岛素检测仪及全自动生化分析仪（美国Beckman公司）。引物序列见表1。

2.检查方法：取两组孕妇空腹静脉血8ml，分装于两支试管中，一支采取EDTA抗凝保存，用于提取血清RNA；另一支试管用于检测孕妇空腹胰岛素（FINS）、空腹血糖（FPG）和糖化血红蛋白（HbAlc)[5]。两组孕妇采血后口服葡萄糖液，2h后检测2hPG水平。miR-29及miR-375的检测则按照试剂盒说明进行操作，抽提RNA，收集miRNA，测定浓度后-80℃保存。在16℃、42℃、85℃及4℃环境下各逆转30min、30min、5min、5min，在95℃环境下行RT-PCR反应10min,45个循环的95℃反应15s,60℃反应60s。miR-29及miR-375的表达水平采用2-△△Ct方法进行计算[6]。

表1引物序列

三、统计学处理

结果采用SPSS18.0统计学软件进行处理并进行统计学分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、两组一般资料结果比较

两组孕妇在年龄、孕周、孕前BMI、分娩前BMI及是否初次妊娠等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）。观察组FINS水平低于对照组，FPG、2hPG及HbAlc水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2两组一般资料结果比较

二、两组外周血基因表达量比较

观察组外周血miR-29表达量低于对照组，miR-375表达量高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

三、外周血基因表达与观察组血糖指标相关性分析

表3两组外周血基因表达量比较

相关性分析显示，miR-29表达与观察组FINS呈正相关，与FPG、2hPG及HbAlc呈负相关；miR-375表达与FINS呈负相关，与FPG、2hPG及HbAlc呈正相关。

讨论

临床上对于GDM有多种预防手段，但预防效果并不满意，疾病发现时往往已是妊娠中晚期。对孕妇及胎儿的影响就越大。因此，早期诊断GDM，并尽早采取有效干预措施，对于改善母婴预后极其重要。GDM发病机制除了遗传、免疫等因素外，基因调控的异常作用不可忽视。

miRNA是一类由21-25个核苷酸组成的非编码RNA，广泛存在于动物、植物及病毒等有机体内，主要参与生命过程中的一系列重要进程，包括早期胚胎发育、细胞增殖、细胞凋亡等。miRNA的表达具有高度保守性、组织特异性及发育阶段特异性等特点，其在血液中的样本检测与人体恶性环境的变化具有一定的相关性，临床上多作为一些疾病的诊断标记物[7]。目前临床上包括肝肾疾病、2型糖尿病、恶性肿瘤等发生发展过程中均证实有miRNA的参与，有研究指出，miRNA与特异的靶mRNA结合，通过调控其降解或抑制翻译等方法，降低靶基因蛋白质的表达，高糖及高脂的环境因素通过影响miRNA的表达，导致糖尿病的发生与发展[8]。胰岛是胰腺内高度血管化的微器官，通过释放胰岛素及胰高血糖素来调节机体血糖水平，以维持机体正常血糖浓度。胰岛β细胞通过释放胰岛素来平衡血糖，但是对于糖尿病易感个体胰岛β细胞发生功能障碍或减少，导致胰岛素分泌不足，出现持续性高血糖并最终发展为糖尿病。大量研究表明，miRNA参与胰腺组织细胞的分化、增殖及凋亡过程，并且以其特有的方式调控胰岛β细胞的功能，包括胰岛素的分泌、处理等[9]。

在胰岛β细胞中首次发现两个新表达的miRNA，即miR-29及miR-375。miR-29在血糖刺激的胰岛素分泌及胰岛素抵抗中发挥重要作用，在自发性糖尿病的大鼠模型中miR-29表达水平较正常大鼠明显升高，在自发性糖尿病大鼠脂肪组织中检测到过表达的miR-29[10]，高水平的miR-29导致细胞对胰岛素失敏，类似于高血糖及高胰岛素引发的胰岛素失敏。miR-375则在β细胞生理学功能上发挥重要作用，其在胰岛β细胞中高表达，负性调节胰岛素分泌。过量表达的miR-375通过降低肌侵蛋白的表达、抑制β细胞增殖，减少β细胞数量及其分泌水平，进而影响机体葡萄糖浓度。同时，miR-375能够降低三磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1）表达水平，降低葡萄糖对胰岛素基因表达及DNA合成刺激的作用，导致糖尿病发生。

本次研究表明GDM与β细胞功能下降导致的胰岛素分泌减少相关，miR-29的低表达通过抑制胰岛β细胞的分化及成熟进而破坏胰岛素的分泌，miR-375的高表达则可以导致胰岛β细胞凋亡，在两者共同作用下，孕妇体内胰岛β细胞数量明显减少，β细胞功能严重下降，进而导致GDM的发生。

参考文献：

[1]孙天虹,余江.miR-29与miR-375在妊娠期糖尿病中的表达水平及临床意义研究[J].中国妇幼保健,2015,30(30):5144-5145.

[2]田晓蕾,于易.miR-29a在妊娠期糖尿病中的表达及与血糖水平的相关性研究[J].中国现代医药杂志,2016,18(11):54-55.

[3]邢智伟,苏秀兰.微小RNA和肿瘤治疗的研究进展[J].中国医药导报,2017,14(3):27-30.

[4]邱淑芬,姜云.妊娠期糖尿病流行病学特征及危险因素和预防措施分析[J].中国预防医学杂志,2019,20(5):451-454.

[5]王丹.妊娠期糖尿病患者的治疗现状及进展[J].中国继续医学教育,2019,11(8):101-104.

[6]陈鑫,陈曦,韩霜,等.血清标本检测miR-29a实时荧光定量PCR方法的建立及临床初步应用[J].临床和实验医学杂志,2016,15(1):16-19.

[7]刘洪璐,王熙才.外周血miRNA应用于肿瘤早期诊断的研究进展[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2018,25(2):109-117.

[8]熊思,彭辉勇,柳迎昭.MicroRNAs在糖尿病肾病中的研究进展[J].中国现代医学杂志,2019,29(1):60-66.

[9]张东子,李鸿燕.miR-29b和IGF-1在2型糖尿病合并抑郁症患者中的表达及意义[J].中国医师杂志,2019,21(7):1015-1019.

[10]张永州,刘瑜新,宋晓勇,等.姜黄素对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及血清microRNA的影响[J].中国医院药学杂志,2017,37(6):502-505.