![](/static/index/images/icon-home.png)
摘要:目的 研究1型糖尿病儿童中自然杀伤细胞(NK细胞)、辅助性T细胞17(Th17细胞)的表达及临床意义。方法 选取2021年1月—2022年1月湖州市中心医院收治的1型糖尿病患儿46例作为研究组,健康体检的健康儿童50例作为对照组。获得所有研究对象外周血样本,测定并比较NK细胞、Th17细胞比例及细胞因子水平。分析NK细胞、Th17细胞在1型糖尿病儿童中的表达及相关性,研究对儿童1型糖尿病的预测价值。结果 研究组NK细胞比例、NK细胞因子NKp46、perfprin水平均低于对照组[NK细胞比例:(5.12±0.94)%vs.(15.43±1.32)%;NKp46:(0.70±0.11)vs.(1.32±0.39);perfprin:(0.65±0.08)vs.(1.26±0.21)],差异均有统计学意义(t=43.740、10.400、18.500,均P<0.05)。研究组Th17细胞比例、Th17细胞因子白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-23(IL-23)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平均高于对照组[Th17细胞比例:(2.34±0.32)%vs.(1.12±0.10)%;IL-17A:(6.88±1.12)pg/ml vs.(3.85±0.93)pg/ml; IL-23:(28.32±3.42)pg/ml vs.(17.85±2.11)pg/ml; IL-1β:(9.13±1.72)pg/ml vs.(7.65±1.00)pg/ml],差异均有统计学意义(t=25.640、14.460、22.640、5.204,均P<0.05)。相关性分析发现:NK细胞与Th17细胞呈负相关(r=-0.785,P<0.05)。logistic回归分析结果显示:糖化血红蛋白,空腹血糖,GAD-Ab, NK细胞,NK细胞因子NKp46、perfprin, Th17细胞,Th17细胞因子IL-17A、IL-23、IL-1β均为影响儿童1型糖尿病发生的因素(均P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示:与单项检测相比,多项联合检测的预测效能最优,曲线下面积为0.949(95%CI:0.877~1.021,P<0.05),灵敏度为88.90%,特异度为80.51%。结论 1型糖尿病患儿NK细胞比例及细胞因子水平降低,Th17细胞比例及细胞因子水平升高,可用于疾病预测。
1型糖尿病约占儿童糖尿病的80%~90%,年龄较小的患儿更易发生酮症酸中毒,早期使用敏感指标诊断具有重要意义[1,2]。目前认为1型糖尿病发生、进展过程中涉及多种固有免疫细胞间的相互调控,胰岛β细胞减少或损伤与免疫细胞的攻击作用有关[3,4]。本研究选取46例1型糖尿病患儿,分析NK细胞、Th17细胞及其细胞因子在外周血中的表达及临床意义,为临床研究提供参考。
1、对象与方法
1.1 研究对象
选取2021年1月—2022年1月湖州市中心医院收治的1型糖尿病患儿46例作为研究组,健康体检的健康儿童50例作为对照组。研究组中,男22例,女24例;年龄6~15岁,平均(10.34±2.12)岁;体质量指数(18.46±2.56)kg/m2。对照组中,男24例,女26例;年龄7~15岁,平均(10.78±2.34)岁; 体质量指数(18.54±2.41)kg/m2。两组资料具有可比性(均P>0.05)。所有研究对象家属均知情本次研究,且经过医学伦理委员会批准。纳入标准:①研究组患儿符合相关指南[5]中1型糖尿病的诊断标准,初次确诊,未治疗;②对照组无血糖升高表现,且无糖尿病家族史,身体健康;③两组均自愿参与研究。排除标准:①存在未纠正的酮症酸中毒;②有重要脏器损害;③非1型糖尿病;④有先天性疾病,如先天性心脏病、先天性免疫缺陷;⑤有癫痫、精神异常者。
1.2 方法
1.2.1 样本采集
取所有入组儿童次日清晨空腹静脉血3支,1支2 ml保存于EDTA-K2抗凝管中,用于测定NK细胞、Th17细胞。1支2 ml分离出外周血单个核细胞,提取总RNA,用于NK细胞因子NKp46、perfprin表达量。1支4 ml放置于真空管内,离心10 min(离心速度3 000 r/min, 离心半径10 cm)后保存于-80 ℃冰箱中,用于Th17细胞因子白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-23(IL-23)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平检测。检测入组儿童的血糖、血脂指标。
1.2.2 NK细胞、Th17细胞检测
取保存于EDTA-K2抗凝管中的样本,使用贝克曼库尔特流式细胞仪测定NK细胞、Th17细胞比例。
1.2.3 NK细胞因子检测
使用实时荧光定量PCR法测定NK细胞因子NKp46、perfprin表达量,取获得的RNA进行逆转录操作,逆转录条件:70 ℃ 10 min, 42 ℃ 60 min、95 ℃ 5 min。由上海吉玛公司合成NKp46、perfprin基因及内参基因GAPDH引物序列,NKp46上游引物序列:5'-GCAGCAGACTCTCCCAAAAC-3',下游引物序列:5'-CCTGGCAACACATGGTCACTT-3';perfprin上游引物序列:5'-GACTGCCTGACTGTCGAGG-3',下游引物序列:5'-TCCCGGTAGGTTTGGTGGAA-3';GAPDH上游引物序列:5'-TGCGTGAGATTAAGGAGAAG-3',下游引物序列:5'-GCTCGTAGCTCTTCATCCA-3'。预变性(95 ℃ 30 s)、变性(95 ℃ 5 s)、60 ℃退火,延伸31 s, 45个循环,目的基因表达量采用2-ΔΔCt法计算。
1.2.4 Th17细胞因子检测
取离心的血清,使用酶标仪(南京德铁实验设备有限公司)测定Th17细胞因子IL-17A、IL-23、IL-1β水平。
1.3 统计学分析
数据均采用SPSS 22.0软件进行统计学分析,满足正态分布或近似正态分布的计量资料用
表示,组间比较用两独立样本t检验;计数资料用[例(%)]表示,组间比较用χ2检验;衡量两个变量的相关性采用Pearson相关性分析;使用logistic法进行多因素回归分析;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析预测效能。P<0.05表示差异有统计学意义。
2、结 果
2.1 两组实验室指标比较
两组糖化血红蛋白、空腹血糖水平及谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)阳性率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。
表1 两组实验室指标比较
2.2 两组NK细胞、Th17细胞比例及细胞因子水平比较
研究组NK细胞比例及NK细胞因子水平均低于对照组,Th17细胞比例及Th17细胞因子水平均高于对照组(均P<0.05)。见表2。
2.3 NK细胞、Th17细胞与1型糖尿病患儿糖化血红蛋白、空腹血糖、GAD-Ab的关系
NK细胞及NK细胞因子与1型糖尿病患儿糖化血红蛋白、空腹血糖、GAD-Ab均呈负相关,Th17细胞及Th17细胞因子与1型糖尿病患儿糖化血红蛋白、空腹血糖、GAD-Ab均呈正相关(均P<0.05)。见表3。
表2 两组NK细胞、Th17细胞比例及细胞因子水平比较
表3 NK细胞、Th17细胞与1型糖尿病患儿糖化血红蛋白、空腹血糖、GAD-Ab的关系(r值)
2.4 NK细胞与Th17细胞的相关性
相关性分析发现:NK细胞与Th17细胞呈负相关(r=-0.785,P<0.05)。见图1。
2.5 儿童1型糖尿病发生的影响因素分析
以儿童1型糖尿病为因变量(发生=1,未发生=0),以糖化血红蛋白,空腹血糖,GAD-Ab, NK细胞,NK细胞因子NKp46、perfprin, Th17细胞,Th17细胞因子IL-17A、IL-23、IL-1β为自变量,进行logistic回归分析,结果显示:糖化血红蛋白,空腹血糖,GAD-Ab, NK细胞,NK细胞因子NKp46、perfprin, Th17细胞,Th17细胞因子IL-17A、IL-23、IL-1β均为影响儿童1型糖尿病发生的因素(均P<0.05)。见表4。
2.6 Th17细胞、NK细胞及其细胞因子对儿童1型糖尿病的预测价值
ROC曲线显示:与NK细胞、Th17细胞及其细胞因子单项检测相比,多项联合检测的预测效能最优,曲线下面积为0.949(95%CI:0.877~1.021,P<0.05),灵敏度为88.90%,特异度为80.51%。见图2。
图1 NK细胞与Th17细胞的相关性
表4 儿童1型糖尿病发生的logistic回归分析
图2 Th17细胞、NK细胞及其细胞因子预测儿童1型糖尿病的ROC曲线
3、讨 论
近年来,有关1型糖尿病发生的免疫学研究已经成为广泛关注的热点,部分研究[6,7]显示Th细胞各亚群表达失衡是导致1型糖尿病发生的重要因素,另外NK细胞、B细胞、巨噬细胞等抗原提呈细胞也直接参与疾病的发生。在上述背景下,本研究为分析儿童1型糖尿病发生的免疫机制,将1型糖尿病儿童作为研究对象,为降低患儿疾病相关不良事件和疾病研究提供参考。
部分研究[8,9,10]显示:NK细胞作为重要的诱导因子和调节因子,其含量在1型糖尿病患者中降低。NK细胞在糖尿病患者中不仅具有保护作用,而且具有破坏作用[11,12]。一项报道[13]发现在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛中分离的NK细胞可产生更多的干扰素-γ,说明存在于糖尿病小鼠胰岛中的NK细胞具有较强的毒性。NK细胞表面分布着抑制性和激活性受体,其中NKp46及perfprin可反映NK细胞活性状态,NOD小鼠实验发现NKp46具有识别胰岛β细胞配体的作用[14,15]。上述研究结论均提示1型糖尿病发生过程中NK细胞及其细胞因子发挥着重要作用。本研究结果显示:NK细胞及其细胞因子NKp46、perfprin水平均降低,提示NK细胞功能异常,导致免疫障碍,最终引起儿童1型糖尿病的发生。
CD4+T细胞和CD8+T细胞介导的β细胞破坏参与1型糖尿病的发生,最近发现Th17与1型糖尿病病理学有关,报道称Th17细胞扩增在1型糖尿病条件下不受约束,某些Treg细胞在1型糖尿病中存在缺陷并失去对Th17扩增的控制[16,17]。此外,抗原提呈细胞的功能改变和在1型糖尿病中自发分泌IL-1β和IL-6的单核细胞亚群也决定了Th17的异常扩增[18]。致病性Th17细胞可导致效应T细胞和调节性T细胞之间的不平衡,从Th17到Th1表型的转换和Th17刺激的细胞毒性T细胞反应也可能在1型糖尿病中发挥辅助作用[19]。报道[20]称,Th17细胞在1型糖尿病中表达升高,且其细胞因子IL-17A含量随之增加,两者可通过促进IL-1β等促炎因子的表达而诱导β细胞凋亡。另有文章指出IL-23受体不存在于初始T细胞中,因此IL-23不参与Th17细胞分化,但Th17细胞功能的稳定性受IL-23表达的影响[21,22]。在1型糖尿病患者中,IL-23含量增加,可引起CD4+T细胞向Th17细胞分化,进而促进Th17细胞相关因子合成分泌,如IL-17A[23]。本研究发现:在1型糖尿病患儿外周血中,Th17细胞及其细胞因子均为高表达,原因可能为Th17细胞异常扩增而导致β细胞凋亡损伤。
本研究显示:NK细胞、Th17细胞呈负相关,提示NK细胞、Th17细胞可能在儿童1型糖尿病的发生、进展中存在一定关联,但本研究仅证实了两者的关系,并未深入分析两者作用的具体机制,还需后续研究在此方面深入探讨,以明确两者之间的关系。
综上,1型糖尿病患儿NK细胞比例及细胞因子水平降低,Th17细胞比例及细胞因子水平升高,可用于疾病预测。
参考文献:
[2]焦丽华,厉红,刘建丽.血浆促肾上腺皮质激素、皮质醇水平与1型糖尿病患儿糖化血红蛋白水平的相关性研究[J].中国儿童保健杂志,2021,29(4):377-380.
[3]祁颜艳,杨涛,顾愹.免疫学标志物在1型糖尿病诊断及预测中的应用[J].中国医师杂志,2022,24(2):190-195.
[4]宋青芳.1型糖尿病免疫损伤机制及脐血治疗新进展[J].国际儿科学杂志,2021,48(2):117-121.
[5]中华医学会儿科学分会内分泌遗传代谢学组,中华儿科杂志编辑委员会.中国儿童1型糖尿病标准化诊断与治疗专家共识(2020版)[J].中华儿科杂志,2020,58(6):447-454.
[6]陈国军,杨中汉,冯娟.1型糖尿病的免疫机制研究进展[J].中国医药导报,2017,14(32):39-42.
[7]于莹莹,张小莉,宋超杰,等.肠道菌群对1型糖尿病肠道通透性及免疫作用机制研究进展[J].微生物学杂志,2019,39(4):115-121.
[8]薛君力,李兰芳,李琳芸,等.NKp44+ NK细胞在1型糖尿病患者外周血中的表达[J].中国现代医学杂志,2019,29(1):40-44.
[9]杨明兰,章晓芳,王莉,等.新诊断1型糖尿病患者外周血自然杀伤细胞的变化特点[J].中华内分泌代谢杂志,2012,28(6):455-459.
[16]王国凤,闫永鑫,尹冬,等.新诊断1型糖尿病患者外周血miR-146a与辅助性T细胞17的相关性研究[J].中国糖尿病杂志,2020,28(8):576-580.
[17]王玉洁,宋海燕.IL-17/Th17细胞在1型糖尿病中的潜在致病作用[J].中国糖尿病杂志,2019,27(1):77-80.
[18]李大伟,陈金妮,曹晓琳,等.糖尿病患者外周血Th17/Treg细胞及相关细胞因子的表达变化[J].现代生物医学进展,2016,16(30):5987-5989,5960.
文章来源:沈思思,姚建平,薛芳.NK细胞和Th17细胞在1型糖尿病儿童中的表达及临床意义[J].中国妇幼保健,2024,39(14):2705-2708.
分享:
衰弱是一种与增龄相关的老年综合征,以生理储备功能减弱、多系统失调、对应激事件的易感性增加和保持内环境稳定的能力下降为特点,常见于高龄和共病的老年人。研究表明,糖尿病病人发生衰弱的风险是非糖尿病病人的1.6倍。合并衰弱的老年糖尿病病人不仅发生并发症的风险增加,而且会出现更高的致残率、再入院率以及病死率等。
2024-09-06DR的发病机制尚不完全清楚,治疗效果也不理想。目前,DR的治疗策略主要关注于微血管并发症,近些年出现的治疗方法,如眼内注射类固醇和抗血管内皮生长因子药物,为DR治疗带来革命性改变,但是有限的作用时间和反复眼内注射,以及预后的不确定性给患者带来诸多痛苦[2]。
2024-08-28糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的慢性并发症之一,可导致终末期肾病。DN的主要病理变化是肾小管间质和系膜中细胞外基质的沉淀,肾小球和肾小管基底膜增厚,最终导致肾小球硬化、肾小管间质纤维化。尽管DN治疗取得了一些进展,但DN的发病机制仍有待进一步探索,以发现新的生物标志物和治疗靶点。
2024-08-26已确诊2型糖尿病病人体重增加不仅与血糖控制效果不佳密切相关,还可能导致糖尿病相关并发症发生[2]。研究发现,超重会增加糖尿病病人肾损伤风险,从而影响糖尿病肾病发展进程,而缺乏运动是超重糖尿病前期男性病人肾损伤进展的高风险因素[3]。
2024-08-26糖尿病肾病(DKD)是以尿频、尿量增多、夜尿频繁为表现的慢性微血管并发症,随着疾病的发展,会给患者带来高血压、蛋白尿及肾功能不全等严重后果。西医治疗DKD主要通过降糖、降压药物来控制患者血糖水平,减缓肾脏损伤进展,但疗效有限,长期使用容易出现咳嗽、血钾升高等问题。
2024-08-15近年来,糖尿病足溃疡(DFU)外科辅助用药成为重要研究方向,尤其在干细胞(Stem cell,SC)及其相关衍生生物制品治疗DFU临床应用方面成果显著。SC具有可增殖、多重分化及分泌大量细胞因子、外泌体等生物学特征。研究表明,外周血干细胞移植与血管内皮细胞联合可促进新生血管形成,细胞移植显著改善了缺血肢体的毛细血管密度[3-4]。
2024-08-14国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation,IDF)公布的数据显示,我国≥65岁的糖尿病患者约有3550万,是患病人数最多的国家,占全球老年糖尿病患者的1/4[4]。老年糖尿病患者年龄大,病程长,认知功能减退,对疾病知识的认知不足,自我血糖监测依从性和自我管理能力差[5-6]。
2024-08-09糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一种由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引起的慢性代谢疾病,根据其发病机理分为1型糖尿病(Type 1diabetes mellitus,T1DM)和2型糖尿病(Type 2diabetes mellitus,T2DM)。其中T1DM是一种由T淋巴细胞介导的自身免疫疾病,通常在青少年时期发作,10~14岁是高发年龄,主要表现为胰岛素缺乏和高血糖。
2024-08-07糖尿病肾病是由于长期糖脂代谢紊乱而导致的慢性肾脏病,占糖尿病患病总人数的40%,是糖尿病最严重的微血管并发症之一,也是导致终末期肾脏病的主要原因[1-2]。肾纤维化是糖尿病肾病发生、发展的重要环节,也是各种慢性肾脏病进展为终末期肾脏病的共同病理特征。
2024-08-07糖尿病肾脏疾病(Diabetes kidney disease, DKD)是糖尿病的主要微血管并发症之一,是导致终末期肾病的首要病因,目前认为其发病机制与糖脂代谢异常、氧化应激、免疫炎症、肾脏血流动力学改变等有关。DKD早期经积极治疗尚可逆转,一旦进入临床蛋白尿期则难以阻止其病情进展,最终将发展为尿毒症,目前现代医学尚无针对此期的突破性治疗方案。
2024-08-07人气:19613
人气:17521
人气:14989
人气:14183
人气:14037
我要评论
期刊名称:糖尿病天地
期刊人气:6077
主管单位:中国科学技术协会
主办单位:中华中医药学会
出版地方:北京
专业分类:医学
国际刊号:1672-7851
国内刊号:11-5210/R
创刊时间:2008年
发行周期:月刊
期刊开本:大16开
见刊时间:7-9个月
影响因子:0.000
影响因子:0.000
影响因子:0.000
影响因子:0.000
影响因子:0.000
400-069-1609
您的论文已提交,我们会尽快联系您,请耐心等待!
你的密码已发送到您的邮箱,请查看!