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多发性骨髓瘤细胞表达miR-383-5p的研究及临床意义

2024-12-02 25 上传者：管理员

摘要：目的：探讨miR-383-5p在初治多发性骨髓瘤（MM）中的表达及其与临床特征及预后的相关性。方法：回顾性收集2013年1月至2017年1月蚌埠医科大学第一附属医院血液科确诊及治疗的初治MM患者及非肿瘤对照者各115例，收集患者临床特征、病理资料及治疗反应，通过RT-q PCR检测miR-383-5p在MM患者及非肿瘤对照者中的表达情况，进一步分析miR-383-5p表达量与MM患者临床特征及预后的关系。结果：RT-q PCR结果显示，115例非肿瘤对照者骨髓组织与115例MM患者骨髓组织中miR-383-5p相对表达量分别为1.89±0.11与1.48±0.13，比较差异有统计学意义（P<0.05）。卡方检验结果提示，miR-383-5p表达与骨损伤、β2-微球蛋白和球蛋白相关（均P<0.001），但与其他因素包括年龄、性别、血红蛋白和轻链不相关。单变量与多变量Cox回归分析表明，低表达miR-383-5p是MM患者OS不良的独立危险因素（P<0.001）。结论：miR-383-5p在MM患者中表达下调，且低表达miR-383-5p是预后不良的危险因素，可作为新的预后生物标志物。

关键词：
miR-383-5p
M蛋白增多
多发性骨髓瘤
浆细胞克隆性增殖
骨破坏
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多发性骨髓瘤（MM）是一种以浆细胞克隆性增殖为特征的血液系统恶性肿瘤，约占所有血液系统恶性肿瘤的10%，表现为单克隆浆细胞过度增殖，导致M蛋白增多、骨破坏和正常造血功能障碍。MM的发生、发展与遗传变异密切相关，包括染色体易位、基因突变和细胞遗传学异常等。目前，由于MM仍无法治愈，研究MM预后影响因素显得尤为重要[1]。

mi RNA在很大程度上具有调控肿瘤生物学进程的功能，这一特性引起了众多研究者的广泛关注。mi RNA是细胞功能的重要调节因子，包括影响细胞增殖、分化和凋亡[2-3]。研究表明，mi R-383-5p在乳腺癌、结直肠癌、恶性黑素细胞瘤以及胃癌等的发生和进展中具有关键作用[4]。mi R-383-5p在肿瘤进展中发挥抑癌因子功能。Zhao等[5]研究发现，mi R-383-5p在肺腺癌中表达降低，过表达mi R-383-5p通过阻滞G1期细胞周期抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。在肝细胞癌中，mi R-383-5p通过靶向AKR1B10和LDHA来调节肝细胞癌的发生和进展[6]。mi R-383-5p还能通过调节LDHA抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和有氧糖酵解[7]。Jiang等[8]研究报道，过表达mi R-383-5p能够通过调节TRIM27抑制卵巢癌细胞增殖并增强细胞的化学敏感性。然而，mi R-383-5p在MM中的表达情况尚无相关文献报道。因此，本研究探讨了mi R-383-5p在MM患者中的表达，分析其与临床指标及预后的关系，现报道如下。

1、资料与方法

研究对象

以2013年1月至2017年1月在蚌埠医科大学第一附属医院确诊的115例初发MM患者及115例非肿瘤对照者（包括缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、白细胞减少患者）作为研究对象，通过骨髓穿刺留取骨髓液标本，取材时均征得患者同意并签署知情同意书，本研究所有实验流程及实验操作均通过蚌埠医科大学第一附属医院伦理委员会批准。MM诊断依据国际骨髓瘤工作组（IMWG）的标准，所留取的骨髓液通过CD138分选骨髓瘤细胞。采集资料包括年龄、性别、血常规、血生化、免疫球蛋白水平、β2-微球蛋白（β2-MG）、游离轻链类型、骨损伤。患者根据NCCN指南诊断后开始一线诱导治疗，治疗方案以蛋白酶体抑制剂或免疫调节剂为基础，治疗4个周期后评价近期疗效。治疗反应≥部分缓解的患者接受持续化疗方案后维持治疗，耐药患者（无疗效或治疗反应<部分缓解）更改为二线化疗。所有患者经治疗出院后随访5年，每隔3个月进行一次电话随访及门诊检查，询问患者生存状况及疾病控制情况。总生存期（OS）定义为从疾病确诊至任何原因引起的死亡或者随访终点的时间。

RNA提取、反转录

采用TRIzol试剂提取MM患者及对照组总RNA当作模板，应用Mir-X mi RNA First-Strand Synthesis进行反转录合成c DNA，扩增反应体系共10μl:3.75μl RNA(1μg）、5μl m RQ缓冲液以及1.25μl m RQ酶，扩增反应条件：37℃60 min,85℃5 min,4℃30min。最后在合成的c DNA中加入90μl去离子水至总体积100μl，放置于-80℃冰箱中保存。

RT-qPCR检测miR-383-5p相对表达量

取c DNA当作模板，应用TB Green®Premix Ex Taq™II在PRISM 7000型RT-q PCR仪上进行定量反应。反应体系共50μl，包括2μl c DNA、0.5μl m RQ通用引物、0.5μl mi R-383-5p特殊引物、0.5μl ROX染料、12.5μl TB Green Premix以及34μl去离子水。扩增反应条件：95℃10 s预变性，95℃5 s变性，60℃20 s退火与延伸，共40个循环。熔解曲线条件：95℃60 s、55℃30 s以及95℃30 s。表1为基因引物，均由上海生工生物工程公司设计、合成。以U6标准化处理，采用2-ΔΔCt方法计算mi R-383-5p相对表达量。

Table 1.The primers of q PCR

统计学分析

使用SPSS 25.0软件对数据进行统计学分析，所有实验重复3次。计量资料以±SD表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用例（%）表示，组间比较采用卡方检验。mi R-383-5p表达与MM患者预后的关系分析采用Cox回归和Kaplan-Meier法。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

miR-383-5p在MM中的表达

GEO在线分析结果显示，GSE125363芯片中mi R-383-5p在非肿瘤骨髓组织与MM骨髓组织中的相对表达量分别为1.0±0.13与0.43±0.05，比较差异有统计学意义（P<0.05）（图1A）。本研究RT-q PCR结果显示，115例非肿瘤对照者骨髓组织与115例MM患者骨髓组织中的mi R-383-5p相对表达量分别为1.89±0.11与1.48±0.13，比较差异亦有统计学意义（P<0.05）（图1B）。

高、低mi R-383-5p表达MM患者临床病理特征的比较

以MM患者骨髓组织中mi R-383-5p表达量的中位数值作为临界值，将115例MM患者分为mi R-383-5p高表达组（58例）和mi R-383-5p低表达组（57例）。对两组患者的临床病例特征进行比较，结果显示，两组患者的骨损伤、β2-MG和球蛋白3项有显著差异（均P<0.001），而其他因素包括年龄、性别、血红蛋白、M蛋白和轻链无显著差异（P>0.05）（表2）。

miR-383-5p表达与MM患者预后的关系

Kaplan-Meier分析结果显示，与mi R-383-5p低表达组患者相比，mi R-383-5p高表达组患者的5年OS率较高（P<0.05）（图2A）；在年龄≥60岁的MM患者中，与mi R-383-5p低表达患者相比，mi R-383-5p高表达患者的5年OS率较高（P<0.05）（图2B）；在年龄<60岁的MM患者中，mi R-383-5p高表达和低表达患者的5年OS率比较无显著统计学差异（P>0.05）（图2C）。此外，单变量与多变量Cox回归分析表明，低表达mi R-383-5p是MM患者OS不良的独立危险因素（表3）。

3、讨论

研究发现，表达失调的mi RNA与MM进展、分子亚型、临床分期、预后和药物反应有关[9-10]。mi R-1305在缺氧诱导MM细胞中表达升高，并可作为MM预后的生物标志物[11]。文献报道，许多重要的促癌mi RNA（如mi R-125b、mi R-221、mi R-532以及mi R-765）和抑癌mi RNA（如mi R-19a-3p、mi R-210、mi R-497以及mi R-637）能够调节重要的基因和途径，如p53和Wnt/beta-catenin信号传导，形成复杂的调控回路，在MM恶性转化和进展中发挥重要作用[12-19]。大量研究显示，临床中mi RNA的转化价值越来越高，能够作为MM新的生物标志物和治疗靶点[20-21]。

作为多种癌症中重要的抑癌mi RNA之一，mi R-383-5p参与肿瘤发生的不同生物学过程，包括细胞增殖、凋亡、侵袭性等。Huang等[22]研究发现，干扰mi R-383-5p能增加前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，降低细胞凋亡，并在小鼠异种移植模型体内促进肿瘤生长。Li等[23]研究报道，mi R-383-5p在肝细胞癌组织中低表达，超表达mi R-383-5p通过抑制细胞增殖并增加细胞凋亡而妨碍肝细胞癌进展。

本研究在GSE125363芯片中发现mi R-383-5p在MM骨髓组织中低表达，因此推测，mi R-383-5p可能与MM进展有关。在115例MM患者骨髓组织中也发现mi R-383-5p表达下调，并与骨损伤、β2-MG和球蛋白相关。进一步研究结果显示，mi R-383-5p高表达组患者5年OS率高于mi R-383-5p低表达组患者，而在年龄<60岁的MM患者中，mi R-383-5p高表达和低表达患者的5年OS率无显著统计学差异，这可能与该组患者对化疗耐受性高、治疗强度大及治疗依从性高有关。此外，单变量与多变量Cox回归分析表明，低表达mi R-383-5p是MM患者OS不良的独立危险因素。该结果与mi R-383-5p在其他肿瘤中的预后关系相似[24-26]，表明mi R-383-5p对于MM进展至关重要。

综上所述，mi R-383-5p在MM中低表达，与骨损伤、β2-MG和球蛋白相关。低表达mi R-383-5p是MM患者OS不良的独立危险因素。本研究结果表明，mi R-383-5p在MM进展中发挥抑癌因子作用，可作为一种新的MM预后生物标志物。需要注意的是，本研究也存在一定的不足，如MM患者缺乏细胞遗传学危险分层，所收集的患者均未行自体干细胞移植，可能存在样本偏倚，需要收集更完善的病历资料，以进一步证实低表达mi R-383-5p与MM不良预后的关系。

参考文献:

1马柯娃,孙超,李建勇,等.多发性骨髓瘤预后因素的研究进展.中国实验血液学杂志,2021,29(4):1346-1350.

基金资助:蚌埠医学院自然科学重点项目(2022byzd048);

文章来源:刘林,杨艳丽,张凤,等.多发性骨髓瘤细胞表达miR-383-5p的研究及临床意义[J].中国实验血液学杂志,2024,32(06):1771-1775.