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注射用伏立康唑在中国健康受试者中的生物等效性研究

2024-07-19 7 上传者：管理员

摘要：目的评价2种注射用伏立康唑在中国健康受试者体内的生物等效性及安全性，并探索辅料磺丁基-β-环糊精的安全性。方法本试验按照单中心、单剂量、随机、开放、两制剂、两周期、双交叉给药的试验设计。在空腹条件下，共纳入18例健康受试者，随机交叉单次静脉滴注伏立康唑受试制剂和参比制剂4 mg·kg-1,用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定血浆中伏立康唑和尿液中磺丁基-β-环糊精的浓度，用Phoenix WinNonlin 8.2软件计算血浆中伏立康唑的药代动力学（PK）参数，用SAS（9.4版本）软件计算尿液中磺丁基-β-环糊精的PK参数，并进行生物等效性评价。结果 18例健康受试者空腹单次静脉滴注伏立康唑受试制剂和参比制剂后，血浆中伏立康唑主要PK参数：Cmax分别为（2 177.00±399.10）和（2 265.00±378.70） ng·mL-1,AUC0-t分别为（14 612.07±8 182.95）和（15 144.69±7 814.02） ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为（16 217.48±10 862.78）和（16 863.18±10 695.75） ng·h·mL-1,tmax分别为2.00和1.98 h。2种制剂的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的几何均值比的90%置信区间均在等效范围80.00%～125.00%内。结论 2种注射用伏立康唑在中国健康受试者空腹静脉滴注给药条件下具有生物等效性，且安全性良好。

关键词：
安全性
注射用伏立康唑
生物等效性
磺丁基-β-环糊精
药代动力学
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伏立康唑(voriconazole)是一种广谱、活性强的第二代三唑类抗真菌药，竞争性抑制真菌羊毛甾醇14α-去甲基化，从而抑制麦角甾醇的生物合成而发挥抗真菌作用，适用于治疗成人和2岁及2岁以上儿童患者的多种真菌感染[1,2]。磺丁基-β-环糊精是对多种难溶性药物都有较好的增溶作用的新型辅料，国内外在制备注射用伏立康唑时，多用其作为增溶剂，但目前比较不同来源的磺丁基-β-环糊精的安全性是否存在差异的研究较少[3,4]。本研究旨在研究空腹状态下静脉滴注伏立康唑受试制剂(test, T)和参比制剂(reference, R)在健康受试者体内的药代动力学特征和生物等效性，并评价辅料磺丁基-β-环糊精的安全性。

一、材料、对象与方法

1 材料

药品与试剂注射用伏立康唑(T),规格：每瓶200 mg; 批号：SD191001,武汉启瑞药业有限公司生产；注射用伏立康唑(R,商品名：威凡®),规格：每瓶200 mg; 批号：Z608201,美国Pfizer Limited公司生产。伏立康唑标准品：纯度：99.8%,批号：100862-201903,中国食品药品检定研究院提供；内标：伏立康唑-[13C2,2H3],纯度：99%13C,98%2H,批号：ES-ALS-13-073-P1,法国ALSA CHIM生产；磺丁基-β-环糊精钠标准品：纯度99.4%,批号：C021-1906001F,武汉中有药业有限公司生产；内标：羧甲基-β-环糊精：纯度：99.4%,批号：BKU843,上海毕得医药公司生产。

仪器LC-20AD/LC-30AD高效液相色谱仪，日本岛津公司产品；AB SCIEX API 4000质谱仪，美国Applied Biosystem公司产品。

2 受试者选择

本研究经中南大学湘雅三医院伦理委员会的审查和批准(伦理批号：20184;临床试验备案号：CTR20202640)。所有受试者均签署知情同意书。试验共入组18例受试者，均接受了两周期给药。受试者年龄(25.17±7.73)岁，身高(172.08±5.47) cm, 体质量(65.09±6.60) kg, 体质量指数(body mass index, BMI)(21.95±1.49) kg·m-2。

入选标准①年龄≥18周岁，男女均可；②男性体质量≥50.0 kg, 女性体质量≥45.0 kg, BMI在19～26 kg·m-2(含临界值)等。

排除标准①已知对伏立康唑或任意辅料组分过敏者；②近30 d内服用影响肝代谢药物者；③妊娠及哺乳期女性；④生命体征、体格检查、心电图、实验室检查有异常且有临床意义者等。

3 分组、给药与样本采集

本研究采用单中心、单剂量、随机、开放、两制剂、两周期交叉给药的试验设计。

入组18例健康受试者，按1∶1的比例随机分配至(T-R)组或(R-T)组，每组9例。受试者于试验当天早上空腹测量体质量后单次滴注受试制剂或参比制剂4 mg·kg-1,将所需剂量的药品浓度稀释至5 mg·mL-1以下，滴注时间维持(120±5) min。在给药0 h(给药前60 min内),开始给药后20、40、60、90、110 min, 给药结束即刻，给药结束后10 min和0.5、1.0、2.0、4.0、7.0、10.0、22.0、34.0 h(共16个采血点)采集前臂静脉血4 mL用于血药浓度检测。在给药前，给药后0～2、2～4、4～6、6～8、8～10、10～12 h收集尿液用于尿液中磺丁基-β-环糊精的浓度检测。两周期间清洗期为7 d。

所采全血样品置于肝素钠抗凝的采血管中，轻柔地上下翻转以混匀，于1 h内在4 ℃下，以3 200 r·min-1离心10 min后，将血浆样品分为2份，置于冻存管中。离心完成后1 h内转运至-20 ℃冰箱，72 h内进入-60～-90 ℃以下冰箱储存。

每个时间段尿液收集完成后，将尿液混匀，分别取3 mL已完全混匀的尿液于2支冻存管内，作为检测管和备份管。收集完尿液的冻存管2 h内转运至-20 ℃冰箱，72 h内进入(-70±10)℃以下冰箱储存。

4 测定条件与样本处理

色谱条件色谱柱：资生堂CAPCELL PAK C18 MGⅡ (2.0 mm×50.0 mm, 5 μm);流动相：A相为甲酸：超纯水(1∶1 000,v/v),B相为甲醇；流速：0.40 mL·min-1,柱温：40 ℃;自动进样器温度：10 ℃,进样量：5 μL。梯度洗脱程序：0.01～0.50 min, 50%→95% B;0.51～2.30 min, 95% B;2.30～2.31 min, 95%→50% B;2.31～3.50 min, 50% B。

质谱条件电喷雾离子化源，选择正离子条件检测，多反应监测扫描模式，离子喷射电压为4 kV,气帘气：137.9 kPa, 碰撞气：55.16 kPa, 温度：500 ℃。伏立康唑和伏立康唑-[13C2,2H3]监测的离子对分别为 m/z 350.30→127.20 和 m/z 355.30→128.10,碰撞能量分别为 44和53 eV。

血浆样本处理用蛋白沉淀法进行生物样品的前处理。取配制好的含药血浆100 μL加入96孔板中，加入内标工作溶液50 μL,涡旋1 min, 精密加入沉淀剂250 μL,涡旋5 min, 置离心机中，在4 ℃下，以4 000 r·min-1离心10 min, 取上清液100 μL转移至另一96孔板中，加入稀释溶剂300 μL,涡旋2 min。

尿液样本处理取尿液样品160 μL,加入超纯水640 μL,精密加入内标工作溶液40 μL,涡旋振荡1 min; 加入约0.2 mL(0.1～0.3 mL)活性炭颗粒于样品中，涡旋振荡5 min; 置离心机中，在4 ℃下，以4 000 r·min-1离心10 min; 取上清液500 μL于0.2 μm PVDF过滤板中，收集过滤液，进样5 μL。

5 方法学考察与评价

专属性6个不同来源的空白基质、混合基质对待测物的干扰均在20.00%以内，对内标的干扰在5%以内(伏立康唑用血浆、磺丁基-β-环糊精用尿液),伏立康唑和内标的保留时间均为0.75 min, 磺丁基-β-环糊精及内标的保留时间分别为6.53和6.54 min, 待测物与内标之间的干扰均符合要求，见图1。

标准曲线与最低定量下限取伏立康唑对照品适量，用空白基质制备标准曲线样品，得到质量浓度为5.00、10.00、100.00、800.00、4 000.00、6 400.00、8 000.00 ng·mL-1的血浆样本，按“血浆样本处理”进行处理并进样分析，将待测物和内标峰面积作为原始数据导入Watson LIMS 7.5sp1,完成标准曲线的回归、血药浓度的计算。得到回归方程为y=4.62×10-4x+3.54×10-4(R2=0.991 7),其在5.00～8 000.00 ng·mL-1线性关系良好，最低定量下限为5.00 ng·mL-1。

用空白人尿液制备7个质量浓度水平(0.10、0.20、1.00、4.00、7.50、12.00、15.00 mg·mL-1)的标准曲线样本，以磺丁基-β-环糊精尿药浓度为横坐标，待测物与内标峰面积的比值为纵坐标，用线性回归的方法，以1/C2为权重，得标准曲线方程为y=5.52x+0.04(R2=0.998 6),其在0.10～15.00 mg·mL-1内线性关系良好，最低定量下限为0.10 mg·mL-1。

图1 伏立康唑(Ⅰ)、伏立康唑-[13C2,2H3](Ⅱ)和磺丁基-β-环糊精(Ⅲ)、羧甲基-β-环糊精(Ⅳ)的典型色谱图

精密度与回收率配制定量下限、低、中及高4个质量浓度(5.00、15.00、3 200.00、6 000.00 ng·mL-1)的质控样品各6份，连续测定3个批次，考察各质控样品批内和批间精密度及准确度偏差。伏立康唑和磺丁基-β-环糊精的批内、批间精密度均小于15.00%,定量下限样品准确度均在80.00%～120.00%,其他质控样品准确度均在85.00%～115.00%。低、中、高3个质量浓度的伏立康唑提取回收率分别为113.20%、107.06%、108.08%,变异系数均小于5%,内标提取回收率为108.11%,见表1。

基质效应用6个不同来源的中国健康人空白血浆或的空白尿样。分别考察含有基质的峰面积和不含基质(溶液)的峰面积，分别计算待测物和内标基质效应因子和内标归一化的基质效应，不同来源基质的内标归一化基质效应因子的变异系数不超过15.00%。

稳定性伏立康唑储备液及工作溶液室温光照及避光放置17 h, -30～-10 ℃放置47 d; 含药血浆室温光照放置20 h, 在-30～-10 ℃ 和-80～-60 ℃放置46 d, 反复冻融4次；处理后样本初次进样在自动进样器放置70 h; 含药全血室温光照放置2 h后低温离心等条件下样本均稳定。磺丁基-β-环糊精储备液及工作液室温白光放置20 h, 2～8 ℃放置25 d; 含辅料尿液室温白光放置42 h, -30～-10 ℃和-80～-60 ℃放置26和41 d、反复冻融4次；处理后样本初次进样在自动进样器放置136 h等条件下样本均稳定。

表1 用高效液相色谱-串联质谱法检测伏立康唑在血浆中的精密度和回收率

6 统计学处理

用Phoenix WinNonlin 8.2软件对血浆中伏立康唑进行非房室模型药代动力学参数的计算和统计分析；用SAS(9.4版本)对尿液中磺丁基-β-环糊精的浓度进行药代动力学参数(Ae、Ae%)的计算及完成人口学、安全性数据统计分析和非参数检验。对tmax、Ae、Ae%用非参数检验方法比较2组间差异。

二、结果

1 试验完成情况及基因表达情况

本试验筛选受试者49例，入组18例，试验过程中(R-T)组受试者FLKZ-Z17因个人原因不能及时入住第二周期，延长清洗期至9 d, 该情况不影响试验结果。所有受试者均纳入全部分析集。

受试者的CYP2C19基因型检测结果显示：FLKZ-Z01、FLKZ-Z02、FLKZ-Z08、FLKZ-Z10、FLKZ-Z14均为慢代谢型(PM,*2/*2、*2/*3、*3/*3)。

2 血药浓度-时间曲线

空腹静脉滴注注射用伏立康唑受试制剂和参比制剂后的血药浓度-时间曲线见图2。

3 药代动力学参数

空腹静脉滴注伏立康唑受试制剂和参比制的药代动力学参数见表2。

4 生物等效性评价

静脉滴注伏立康唑受试制剂和参比制剂后，Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的几何均值比分别为95.80%、95.01%、94.72%,其90%置信区间分别为92.83%～98.85%、90.94%～99.27%、90.41%～99.23%,均落在80.00%～125.00%,表明2种制剂具有人体生物等效性。剔除两周期AUC_%Extrap>20%的2例受试者(FLKZ-Z10、FLKZ-Z14)数据，对AUC0-∞进行敏感性分析，结果为94.18%(90%CI:89.38%～99.24%),等效性结论维持不变。

图2 空腹静脉滴注受试制剂与参比制剂后伏立康唑的平均血药浓度-时间曲线

表2 受试制剂和参比制剂的药代动力学参数

表3 磺丁基-β-环糊精尿累积排泄结果

5 安全性评价

受试制剂组中5例(27.8%)共发生5例次不良事件，参比制剂组中3例(16.70%)共发生4例次不良事件，组间差异无统计学意义(P>0.05),所有不良事件均为 Ⅰ 级不良事件。空腹静脉滴注受试制剂与参比制剂后磺丁基-β-环糊精的Ae%0～12 h分别为(97.66±29.87)%和(88.60±21.14)%,经配对t检验后结果无显著性差异(P>0.05),尿液中累积排泄结果见表3。

三、讨论

5例受试者的CYP2C19基因型为按代谢型，与个体药代动力学参数结果一致，即这5例受试者两周期体内药物暴露量显著增加，受试制剂和参比制剂的AUC0-t分别为其他13例受试者的2.44和2.68倍，t1/2Z分别为2.46和2.52倍。这是由于伏立康唑主要通过CYP2C19代谢，其基因多态性导致个体间药物代谢的差异[5]。因此，在使用伏立康唑时应进行血药浓度监测及基因型检测等个体化的药物监测策略[6]。

磺丁基-β-环糊精钠体内排泄特征的研究结果表明，源于不同供应商的辅料在健康受试者尿液中的累积排泄率并无显著差异。与前期文献[7]报道基本一致，提示磺丁基-β-环糊精钠12 h内几乎完全从尿液中排出，不会在体内蓄积，对人体的安全性有保障。

本研究受试者空腹静脉滴注受试制剂与参比制剂4 mg·kg-1后，血浆中伏立康唑Cmax、AUC0-t、AUC0-∞几何均值比的90%置信区间均在80.00%～125.00%,tmax在统计学上差异无统计学，且与其他文献[8]所报道的体内整体暴露水平趋于一致。尿液中磺丁基-β-环糊精累积排泄量无显著差异。

参考文献:

[1]彭佳,李昕,毛勇,等.注射用伏立康唑在中国健康受试者中单次和多次静脉给药后的耐受性和药代动力学研究[J].中国临床药理学杂志,2023,39(19):2813—2818.

[2]叶丽娟.抗真菌药物——耐药与合理应用[J/OL].国外医药(抗生素分册),2006,(4):e159—e163.2006-07-25 [2023-09-28].

[3]闫智慧,张霁霁,胡拥军,等.磺丁基醚-β-环糊精及羟丙基-β-环糊精对伏立康唑的增溶作用比较[J].中国药师,2017,20(7):1296—1298.

[5]陈金成,许秋霞,庄奕筠,等.基于血药浓度监测和CYP2C19基因检测的伏立康唑疗效及药物不良反应相关性临床研究[J].中国临床药理学杂志,2023,39(13):1827—1830.

[6]陈恳,宋再伟,刘维,等.《中国伏立康唑个体化用药指南》推荐意见的外审[J].药物流行病学杂志,2017,26(2):143—148.

基金资助:湖南省自然科学基金资助项目(2020JJ5852);

文章来源:严新,杨双,阳晓燕,等.注射用伏立康唑在中国健康受试者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(14):2108-2112.