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九味生化颗粒制剂的稳定性试验研究

2024-02-22 32 上传者：管理员

摘要：目的通过对自制纯中药制剂九味生化颗粒的稳定性考察，确定其贮存方法及有效期。方法按照《中华人民共和国药典》（2015年版）四部中通则9001关于制剂的稳定性试验方法要求进行研究，以外观性状、水分、薄层鉴别、含量测定等为考察指标，通过进行高湿、高温、强光照射、加速及长期稳定性试验，对九味生化颗粒制剂进行稳定性考察。结果九味生化颗粒在高湿环境下具有一定的吸湿性，影响因素试验、加速及长期试验均表明本品各项指标均在质量标准范围内，质量稳定。结论中药制剂九味生化颗粒在制备、分装与贮存时要密封保存，并防止受潮；其在常温下，质量稳定。

关键词：
中药制剂
九味生化颗粒
影响因素
稳定性
薄层色谱法鉴别
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九味生化颗粒是酒钢医院根据临床需要而创新研发的纯中药制剂，前期已对其主要成分川芎、益母草、山楂、红花、桃仁、甘草进行了薄层色谱法鉴别，对其主要成分阿魏酸采用高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定。本次研究主要为保证九味生化颗粒成品质量，对本品的吸湿性、高温、强光照射、加速及长期稳定性开展试验研究，考察不同批次的样品外观、性状、鉴别、水分、含量的变化，分析药品稳定性试验数据。

1、仪器与试剂

1.1 仪器

AUW220D型电子分析天平（十万分之一）；ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪；LC-2010AHT型高效液相色谱仪。

1.2 试剂与药品

对照品：阿魏酸，批号：110773-201614；对照药材：川芎、益母草、红花、桃仁、山楂，批号依次为：120918-201612、120912-201209、120907-201713、120953-201407、编号YJ-121626，均购自中国食品药品检定研究院。试剂：乙腈为色谱纯，磷酸，超纯水。3批样品批号分别为：20180325、20180326、20180327。

2、方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 试验色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP，规格：150 mm×4.6 mm、5μm；流动相：0.085%磷酸水溶液-乙腈（83∶17），流速：1.0 mL/min；进样量：10μL；柱温：35℃；检测波长：316 nm。

2.1.2 对照品、供试品、阴性溶液的制备

2.1.2. 1 阿魏酸对照品溶液的制备

精密称取适量阿魏酸对照品，加70%甲醇溶解成8μg/mL的溶液，即得阿魏酸对照品溶液。

2.1.2. 2 供试品溶液的制备

精密称取本品粉末10.0 g（过80目筛），置于锥形瓶（250 mL）中，加入100 mL甲醇溶液，称定重量；水浴回流提取（60 min），放冷至室温；用甲醇补足回流损失，震荡均匀；用0.45μm的微孔滤膜滤过，收集续滤液。

2.1.2. 3 阴性对照品溶液的制备

取阴性对照样品粉末（不含当归）10.0 g，制备方法参考“2.1.2.2”。

图1 川芎的薄层色谱图

图2 益母草的薄层色谱图

图3 山楂的薄层色谱图

2.1.3 线性关系考察

采用高效液相自动进样器分别吸取上述对照品溶液10μL注入液相色谱仪。以峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归，阿魏酸在进样量0.081～1.620μg线性关系良好，回归方程为Y=58 429X-0.2199,r=0.996。

2.1.4 稳定性试验

取同一供试品溶液，每隔1 h进样10μL，测定峰面积并计算阿魏酸的相对标准偏差（RSD）。阿魏酸RSD值为1.48%，供试品溶液12 h内稳定。

2.1.5 回收率试验

称取6份已知含量的样品约10 g，分别精密加入阿魏酸对照品溶液，制备方法参考“2.1.2.2”，计算出回收率平均值为97.9%。

2.2 定性鉴别方法与结果

2.2.1 川芎鉴别

称取样品15 g置于圆底烧瓶，加入40 mL乙醚溶解；回流60 min，滤纸滤过；滤液挥干成残渣，再加入2 mL乙酸乙酯溶解，作供试品溶液。取阴性样品（缺川芎）15 g，取1 g川芎对照药材，同法制成对照溶液（阴性对照、川芎对照）。

照薄层色谱法（TLC）（《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0502）试验，取10μL点样管吸取上述3种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板（GF254），展开剂为正己烷-乙酸乙酯（3∶1）；展开距边缘线1 cm时取出，晾干，置ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪中检视（波长254 nm）。见图1。3批样品与川芎对照药材的色谱位置上，显相同颜色的暗色斑点，而阴性相应位置无斑点[1]。

2.2.2 益母草鉴别

称取样品20 g研磨成粉末后，加入50 mL乙醚，振摇提取10 min，提取液用滤纸滤过；挥干至残渣，再加入1 mL甲醇溶解，作供试品溶液。取益母草对照药材1 g，取阴性样品（缺益母草）20 g，同上法制成对照溶液（阴性对照、益母草对照）。

取5μL点样管吸取上述3种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板上，展开剂为正己烷-乙酸乙酯（4∶1）；展开距边缘线0.5 cm时取出，晾干，置ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪中检视（波长365 nm）。见图2。3批样品与益母草对照药材的色谱位置上，显相同颜色的淡蓝色荧光斑点，而阴性相应位置无斑点[1]。

2.2.3 山楂鉴别

称取样品20 g研磨成粉末后，加入50 mL乙醚，浸泡30 min，超声处理5 min，滤纸滤过；滤液浓缩至残渣，再加入1 mL甲醇溶解。取山楂对照药材1 g，阴性样品（缺山楂）20 g，同上法制成对照溶液（阴性对照、山楂对照）。

取5μL点样管吸取上述3种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10∶2∶0.5）；展开距边缘线1.5 cm时取出，晾干，置ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪中检视（波长365 nm）。见图3。3批样品与山楂对照药材的相同色谱位置上，显相同颜色的淡蓝色荧光斑点，而阴性对照相应位置无斑点[1]。

2.2.4 红花鉴别

称取样品25 g研磨成粉末后，加入50 mL的80%丙酮溶液，振摇提取（10 min）；室温0℃以下（室内温度为零下）放置约20 min，滤纸滤过，收集初滤液作为供试品溶液。取红花对照药材0.5 g，取阴性样品25 g（缺红花），同上法制成对照溶液（阴性对照、红花对照）。

按照TLC《中华人民共和国药典》2015年版一部附录ⅥB试验，取5μL点样管吸取上述3种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板（GF254），展开剂为正己烷-乙酸乙酯（3∶1）；展开距边缘线2 cm时，取出晾干，置于ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪中检视（波长254 nm）。见图4。3批样品与红花对照药材的相同色谱位置上，显相同颜色的暗色斑点，而阴性对照相应位置无斑点[1]。

2.2.5 桃仁鉴别

圆底烧瓶中称取样品10g，加入50 mL石油醚（60～90℃），回流60 min；滤过，留取药渣，再加入25 mL石油醚洗涤；弃去石油醚，药渣挥干后加入30 mL甲醇溶解，水浴加热回流60 min；放冷至室温后滤过，收集滤液作为供试品溶液。另取桃仁对照药材2 g和阴性样品（缺桃仁）20 g，同上法制成作为对照溶液（阴性对照、桃仁对照）。

参照TLC（（《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0502）试验，取5μL点样管吸取上述3种溶液，分别在同一硅胶G薄层板上条带状点样，将三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）配好后置于5～10℃冰箱12 h，待分层后分取下层溶液作为展开剂；展开距边缘线2 cm时取出，立即喷以磷钼酸硫酸溶液（磷钼酸2 g，加水20 mL溶解，再缓缓加入30 mL硫酸，混合均匀），将薄层板放置在105℃的加热板上直至斑点显色清晰。见图5。3批样品与桃仁对照药材在相同色谱位置上，显相同的条状蓝色斑点，而阴性对照相应位置无斑点[1]。

图4 红花的薄层色谱图

图5 桃仁的薄层色谱图

2.3 制剂稳定性考察

2.3.1 颗粒剂检验项目分类

参照制剂通则，颗粒剂检验项目如下：外观性状、薄层鉴别、装量差异、水分（第二法）、粒度、阿魏酸含量测定、溶化性（该中药制剂含药材原粉，不检查溶化性）。

2.3.2 高湿对九味生化颗粒质量稳定性影响

取适量颗粒精称，置于相对湿度为92.5%的容器中（其底部存放适量硝酸钾饱和溶液）。分别在第5天和第10天进行称重。由于在相对湿度92.5%放置时，称重结果表明质量增加大于5%，所以需同法取样，在相对湿度为75%（其底部存放适量氯化钠饱和溶液）的环境下考察，称重结果见表1。吸湿增重数值表明，在高湿环境时，九味生化颗粒因含有大量蔗糖而表现出较强的吸湿性，且易潮解霉变，因此保存需干燥密封[2]。

2.3.3 高温对九味生化颗粒质量稳定性影响

取适量颗粒置于敞口的干燥玻璃器皿中（厚度不超过2 mm），放置于恒温箱中（60℃），分别在第5天和第10天称取适量样品，并肉眼观察外观性状，以及进行TLC、水分测定、含量测定等，考察其稳定性。与第0天数据对比，九味生化颗粒的外观性状没有明显变色、无分化、无结块、无色斑形成等，TLC、水分、含量测定均在合格范围内，说明本品在高温环境下质量较为稳定[3]。见表2。

2.3.4强光照射对九味生化颗粒质量稳定性影响

取适量颗粒置于敞口的干燥玻璃器皿中（厚度不超过2 mm），放置于强光照射试验箱中，控制光照强度为（4500±500) Lx，紫外强度为83～100μW/cm2，温度为室温25℃。分别在第5天和第10天秤取适量颗粒，与第0天数据进行对比。九味生化颗粒的外观性状没有明显变色、无分化、无结块、无色斑形成等，TLC、水分、含量测定均在合格范围内，说明本品在强光照设备环境下质量较为稳定[4]。见表3。

2.3.5 加速试验对九味生化颗粒质量稳定性影响

同时将3批九味生化颗粒选用铝塑复合膜包装后，存放于温度控制在（40±2）℃、相对湿度为（75±5）%的环境中6个月，分别在第1、2、3、6个月底称取适量样品颗粒，与第0天数据进行对比。颗粒的外观性状没有明显变色、无分化、无结块、无色斑形成等，薄层鉴别符合规定，水分和含量略有降低但均未超出标准规定范围[5]。

表1 湿度对九味生化颗粒质量稳定性的影响

表2 九味生化颗粒高温试验结果

表3 九味生化颗粒强光照射试验结果

2.3.6 长期试验对九味生化颗粒质量稳定性影响

同时将3批九味生化颗粒选用铝塑复合膜包装后，存放于温度控制在（25±2）℃、相对湿度为（60±10）%的环境中考察24个月，分别在第0、3、6、12、18、24个月底称取适量样品颗粒，同加速试验检测各项目。3批样品虽然在保留过程中含量均略有降低，但直至保存到24个月时，其含量的保留率仍然保持在80%以上，各项指标均符合标准规定范围，说明本品在常温下质量稳定[6]。

3、讨论

九味生化颗粒为酒钢医院生产的纯中药颗粒剂，优点是便于携带、运输、贮藏及服用。但是中药制剂的成分复杂，大多数为亲水成分，因此稳定性研究是颗粒剂研发与生产中的关键部分。中药制剂颗粒剂如果贮藏不当，会发生吸潮、沉淀、变质等现象，对药物的有效成分及含量造成不良的影响，导致药物极易失效，从而产生毒副作用，影响临床效果[7]。

此次试验设计项目均为考察九味生化颗粒的质量稳定性而定。选定薄层鉴别药物时，由于处方中多种成分相互干扰，如川芎和当归都含有阿魏酸，泽兰和焦山楂都含有熊果酸，炮姜处方比例含量较低不适宜作为指标性成分进行鉴别，桃仁和红花使用《中华人民共和国药典》中收载的药材鉴别方法后，阴性有干扰等，重新摸索出了新的试验方法，选定川芎、益母草、红花、山楂、桃仁作为薄层鉴别的几味药[8]。

铝塑复合膜包装后的九味生化颗粒成品分别经高温、光照强度、6个月的加速试验、24个月的稳定性试验，结果表明，成品包装的九味生化颗粒含量下降不超过80%，其他各项考察指标均在质量标准控制范围内。参照中药制剂相关要求及稳定性试验结果分析，将九味生化颗粒的有效期暂定为24个月[4]。本次高湿试验研究表明，九味生化颗粒在室温（25±2）℃、相对湿度分别为（92.5±5）%和（75±5%）%的条件下存放10 d，出现部分结块及霉变现象，表明其有吸湿性，与本品含有大量蔗糖相关。虽然试验表明，高湿环境对九味生化颗粒的质量稳定性有一定的影响，但由于酒钢医院制剂生产环境所处的地理环境较为干燥，故只需在九味生化颗粒制备、分装与贮存时注意密封保存，环境对其质量稳定性影响不大[9]。

参考文献:

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[8]赵丽萍,毛琳,刘光斌.九味生化颗粒的质量标准研究[J].医药卫生,2020,8(12):388-390,403.

[9]陈土荣,周艳,吴雪茹,等.清热祛湿外洗液的薄层鉴别及稳定性研究[J].新中医,2022,54(15):1-5.

文章来源:赵丽萍,任建花.九味生化颗粒制剂的稳定性试验研究[J].中国中医药现代远程教育,2024,22(06):145-148.