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支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF在菌阴肺结核中应用价值

2024-10-04 66 上传者：管理员

摘要：：目的研究支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）在菌阴肺结核中应用价值。方法选取2023年1月至2023年12月在本院就诊的200例门诊和住院疑似菌阴肺结核患者纳入研究，对所有患者支气管肺泡灌洗液进行收集，分别应用分枝杆菌液体培养和药敏、Xpert MTB/RIF及抗酸染色涂片进行检测，金标准以分枝杆菌液体培养药敏试验和药敏结果为准，比较三种检测方法的特异性、阴性预测价值、敏感性及阳性预测价值，并对检测结果的诊断价值进行分析，评价Xpert MTB/RIF诊断利福平耐药的一致性。结果 200例患者中，菌阴肺结核占比为84.00%，非肺结核占比为16.00%；以分枝杆菌液体培养和药敏检测作为金标准，Xpert MTB/RIF检测阳性率与其相当，无统计学意义（P>0.05），且两种检测方法阳性率均明显高于抗酸染色涂片，差异有统计学意义（P<0.05）;Xpert MTB/RIF检测特异度、敏感度、准确率、阳性预测值及阴性预测值与其基本一致，差异无统计学意义（P>0.05），且两种检测方法的特异度、准确率、阴性预测值、敏感度及阳性预测值明显高于抗酸染色涂片（P<0.05）。结论支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF与分枝杆菌液体培养和药敏检测具有较高一致性，且能将确定利福平是否耐药的时间控制在较短时间（2 h），为诊疗菌阴肺结核提供了思路，具有重要的临床应用价值。

关键词：
Xpert MTB/RIF检测
支气管肺泡灌洗液
涂片抗酸染色
菌阴肺结核
诊断效能
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目前我国仍是世界上结核病大国，其发病率逐年增长的趋势且呈面随着年龄增加逐步提高[1]。一次培养结果呈现阴性或三次痰涂片抗酸杆菌检测结果呈现阴性的肺结核称为菌阴肺结核，由于大部分患者没有特异的临床表现，影像学特征也缺乏特异性、典型性，临床诊断较为困难。目前临床筛查菌阴肺结核的常用检测方法为结核菌素试验（PPD），该方法具有较好的筛查效果，但具有假阳性率和假阴性率较高的不足之处。另一种临床常用的辅助诊断的有效手段为血清学诊断，然而该方法也存在敏感性较低，特异性欠强的缺点[2]。结核分枝杆菌（MTB）培养作为诊断“金标准”却需要4～8周才能得到结果。因此，临床发现一种可有效替代且能弥补上述方法所述缺点的结核诊断方法十分迫切。由美国的Cepheid公司研发的Xpert MTB/RIF技术是一项在MTB核酸扩增技术基础上发展而来的的全自动分子诊断菌阴肺结核的有效方法[3]，由Helbing等[4]首先在结核病中应用于疾病快速诊断，这为实验室检测和临床诊断结核病均提供了新途径、新思路。为进一步探究其在菌阴肺结核中应用价值，故对本院收治的门诊和住院菌阴肺结核患者纳入研究。

1、资料与方法

1.1研究对象

选取本院2023年1月至2023年12月门诊和住院收治的200例疑似菌阴肺结核患者进行研究。所有患者中男139例，女61例；年龄20～79岁，（42.18±2.13）岁；病程7 d～3年，（1.03±0.14）年。所有患者一次痰培养及三次痰涂片阴性，临床诊断为肺结核。纳入标准：①存在胸痛、乏力、发热、盗汗等结核相关症状，且存在空洞性病变、纤维结节病变、肺浸润等异常肺部影像学证据符合活动性肺结核者；②符合《肺结核诊断WS288-2017》[5]中关于菌阴肺结核诊断标准者；③年龄18周岁以上者。排除标准：①标本培养结果显示污染者；②标本难以采集或者采集量不足以进行检测者；③合并自身免疫性疾病或肿瘤者。本研究经患者及其家属知情同意，并经医院医学伦理委员会批准后实施，两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2治疗方法

灌洗前仔细观测患者胸部的影像学资料，并参照影像学资料灌洗患者肺相关段、叶，将常温的灭菌注射用水于病变部位注入，每次注入剂量为20 mL，共注入3次，灌洗结束后送检的灌洗标本采集量应不少于20 mL。

抗酸染色涂片：离心浓缩送检灌洗液，在无菌环境下研磨并取组织标本进行匀浆涂片，紫外线照射30 min后采取萋-尼法对匀浆涂片进行染色制成载玻片，完成载玻片制作后进行干燥处理，最后在油镜下（100×）对制作的载玻片进行观察并得出检测结果。

分枝杆菌液体培养和药敏：叮嘱患者留取一份清晨痰标本培养结核分枝杆菌，培养结果呈现阳性的患者进一步培养菌落，在结核分枝杆菌和菌落培养均结束后行药敏试验，菌液接种量为1%～2%，培养基中利福平的最终溶度为40μg/mL。同时检测菌落行利福平耐药性和耐药基因芯片，严格按照说明书进行操作。

Xpert MTB/RIF：严格按照美国Cepheid公司Xpert MTB/RIF系统的相关操作说明进行操作，充分混合支气管肺泡灌洗液和治疗溶液，比例按照1∶2的标准混合；混合后静置20 min待反应混合物处理和消化，完成后应用取样枪吸取2 mL缓慢放入反映盒中，在检测模块中放入反应盒，并对后续反应进行密切观察：①超声裂解后，形成DNA片段并纯化；②样品自动清洗、过滤；③半巢式实时荧光定量核酸扩增检测；④聚合酶链反应试剂与DNA反应。待测样本结核分枝杆菌复合群检出情况、利福平耐药情况可由系统进行自动判读。

1.3观察指标

结果判定：分枝杆菌液体培养和药敏（金标准）阴性标准：菌落明显见于培养基斜面；阳性标准：肉眼可见菌落分布于培养基斜面；抗酸染色涂片阴性标准以结果为1+、2+、3+、4+为准；Xpert MTB/RIF检测将MTB DNA拷贝高低按照高、中、低、极低、未检出等5个量级标准进行分类，阳性标准：肉眼可见菌落分布于培养基斜面。

1.4统计学方法

应用SPSS 23.0进行统计学分析，计数资料以[n（%）]表示，进行χ2检验，用diagti命令计算Xpert MTB/RIF检测的敏感度、特异度，评价其阴性和阳性预测值，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1基本情况

200例患者中，咯痰、咳嗽142例（71.00%）、发热62例（31.00%）、盗汗57例（28.50%）、胸痛32例（16.00%）、咯痰带血13例（6.50%），无症状或其他14例（7.00%），菌阴肺结核168例（84.00%），非肺结核32例（16.00%）。胸部CT或X线摄影表现为结节及团块状影27例（13.50%）、云絮及斑片状影146例（73.00%），并发胸腔积液8例（4.00%）、并发空洞影19例（9.50%）。

2.2检测结果

以分枝杆菌液体培养和药敏检测作为金标准，Xpert MTB/RIF检测阳性率与其相比无显著差异（P>0.05），且与抗酸染色涂片相比，Xpert MTB/RIF检测分枝杆菌液体培养和药敏检测阳性率均明显于更高，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3诊断效能

以分枝杆菌液体培养和药敏检测作为金标准，Xpert MTB/RIF检测特异度、敏感度、准确率、阳性预测值及阴性预测值与其基本一致，两组比价无显著差异（P>0.05），且与抗酸染色涂片相比，Xpert MTB/RIF检测和分枝杆菌液体培养和药敏检测的准确率、敏感度、特异度、阴性预测值及阳性预测值明显更高，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3、讨论

菌阴肺结核在临床无特异性体征，影像学检查也缺乏典型特点，极易误诊、漏诊，诊断较为困难并易发生延误治疗的情形，容易成为新的传染源[6]。因此，临床急于寻找一种可有效替代且能弥补传统检测方法中各种缺点的结核诊断方法，以期提高诊疗效果，改善预后。Xpert MTB/RIF技术作为一种利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术，应用于检测患者感染结核分枝杆菌情况可针对结核分枝杆菌81bp基因、rpoB基因利福平耐药决定区（RRDR）进行相应的探针、引物，以明确其是否发生突变，病变部位以及病变程度等情形，且能将确定患者是否感染结核分枝杆菌的时间控制在较短时间（2 h），从而进一步诊断具体的感染情况是否对利福平耐药[7]。

表1三种检测方法检测结核分枝杆菌结果比较[n(%)]

表2三种检测方法对菌阴肺结核的诊断价值[n(%)]

近年来，随着电子支气管镜设备和技术的不断进展，其逐渐被广泛应用于临床治疗、检测，特别是经支气管灌洗方法，已经逐渐发展成为主要诊断肺结核的方法，它不仅能较为直观的观察支气管内黏膜病变情形和病变程度，并通过其进行肺泡灌洗液、刷检和活检，还能通过检查支气管肺泡灌洗液结核分子生物学，针对菌阴性肺结核提供更快速、准确、高敏感、高特异性的临床辅助诊断方法，推动其在疾病的早期诊断中得到快速、有效的发展[8]。

本研究通过对可疑菌阴肺结核的呼吸道疾病患者进行支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF检测，根据支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF检测结果、其他检验指标结果，发现200例患者中，绝大部分患者伴随咯痰、咳嗽和发热等症状，胸部CT或X线摄影表现为结节及团块状影、云絮及斑片状影，且存在并发胸腔积液和空洞影的情形。

同时，本研究结果显示，以分枝杆菌液体培养和药敏检测作为金标准，Xpert MTB/RIF检测阳性率、特异度、敏感度、准确率、阳性预测值及阴性预测值与其基本一致，且金标准和Xpert MTB/RIF检测阳性率、敏感度、特异度、阴性预测值、准确率及阳性预测值与抗酸染色涂片相比明显更高，说明Xpert MTB/RIF检测与分枝杆菌液体培养和药敏检测具有较好的一致性，其阳性率、特异度、敏感度、准确率、阳性预测值及阴性预测值明显高于抗酸染色涂片，这可能是因为Xpert Mtb/RIF检测针可有效整合核酸提取、扩增和检测等传统核酸扩增检测所需的3个重要步骤，系统可对处理后放入反应盒的待检样品进行自动核酸提取、被提取核酸扩增和产物检测[9-10]，并在反应结束后自动得出检测结果，操作较传统核酸扩增检测更为简单方便，也不受环境、操作等因素的影响，因此具有更高的阳性率、准确率等。

综上所述，支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF与分枝杆菌液体培养和药敏检测具有较高一致性，且能将确定利福平是否耐药的时间控制在较短时间（2 h），为诊疗菌阴肺结核提供了思路，具有重要的临床应用价值。

参考文献:

1李明琴,罗伟桃,杨建蓉.肺泡灌洗液XpertMTB/RIF､TB-RNA和TB-DNA联合检测对菌阴肺结核诊断效能[J].中国热带医学,2023,23(6):647-651.

2王娟娟,施旭东,吴梅香,等.不同分子检测方法在肺结核诊断中的应用评估[J].临床检验杂志,2022,40(5):368-370.

5苟海梅,薛鳗玲,钟晓武,等.支气管肺泡灌洗液和痰液Xpert MTB/RIF检测对肺结核临床诊断的价值分析[J].检验医学与临床,2022,19(6):745-748,754.

6冷霞,孙晓柯,周晓蕾,等.灌洗液Xpert MTB/RIF检测在涂片阴性及无痰疑似肺结核患者中的应用分析[J].临床肺科杂志,2022,27(2):226-229,255.

8孙金昊,陶磊,贺向红,等. Gene Xpert MTB/RIF系统､MGIT-960 快速培养系统及药敏检测肺结核患者痰标本､支气管肺泡灌洗液标本阳性率比较及耐药分析[J].临床军医杂志,2022,50(12):1275-1277,1281.

9李晓倩,王智慧,池跃朋,等.血清MMP-9测定､肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF检测､INF-γ释放试验单独和联合检测对肺结核的诊断效能[J].检验医学,2022,37(1):11-15.

10李小玉,李科宇. Xpert MTB/RIF技术在诊断新发肺结核中的应用价值分析[J].长春中医药大学学报,2022,38(11):1262-1265.

基金资助:浙江省永嘉县2023年度第四批科技发展计划项目(2022312);

文章来源:王仙敏,徐程哲,陈微微,等.支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF在菌阴肺结核中应用价值[J].浙江创伤外科,2024,29(09):1656-1658.