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浅析在诊断结核病中Xpert MTB/RIF的临床应用价值

2020-03-15 526 上传者：管理员

摘要：目的：探讨Xpert MTB/RIF检测技术在诊断肺结核中的临床应用价值。方法：收集506例疑似结核病患者的样本，通过与结核菌培养，抗酸杆菌显微镜检测，及临床诊断相比较来评价Xpert MTB／RIF试验的诊断效能。结果：79.4%（402/506）的患者被临床诊断为结核病，其中肺结核为315例，肺外结核为87例。Xpert MTB/RIF、结核菌培养、抗酸杆菌显微镜检测及3种方法相结合诊断，在肺结核患者的检出率分别是52.4%（165/315）、49.5%（156/315）、36.8%（116/315）和57.1%（180/315）；在肺外结核患者的检出率分别为13.8%（12/87）、18.4%（16/87）、3.4%（3/87）和25.3%（22/87）；Xpert MTB/RIF试验在诊断肺结核以及肺外结核的特异性均为100%。结论：对于肺结核的诊断，Xpert MTB／RIF与结核诊断金标准分枝杆菌培养有着很高的阳性一致率，且特异性更好，但是对于肺外结核的诊断来说，其敏感性较差，3种方法相结合比单独一种方法能获得更好的敏感度，更有利于临床的诊治。

关键词：
Xpert MTB/RIF
抗酸杆菌
敏感度
结核菌培养
肺结核
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结核病主要是通过呼吸道传播感染结核分枝杆菌的疾病，结核病传染性强，病程长，随着流动人口的增加和人口老龄化，肺结核的患病人数仍呈增加趋势[1]。我院是以结核病为主的专科医院，更快更准确地检测结核病可为临床诊断和治疗提供更好地帮助。基于DNA扩增技术的半巢式全自动实时荧光定量PCR（Xpert MTB/RIF）试验作为一种快速、有效的分子诊断手段，能够打破这些局限，提高结核病快速诊断的敏感性和特异性。该技术针对结核分枝杆菌的rpoB基因81bp的利福平耐药决定区序列设计引物、探针，进而可以检测是否发生突变，从而判断是否患结核以及是否对利福平耐药，标本处理及检测耗时不超过2h，而传统的固体培养法很难达到[2]，本研究的目的是评价Xpert MTB/RIF试验在结核病患者中直接诊断结核分枝杆菌的作用，以了解Xpert MTB/RIF检测技术实际临床应用价值。

1、资料与方法

1.1 一般资料

从2017年5月—2019年2月间到本院门诊及住院疑似结核病患者506例，患者中男性287例，女性219例，年龄16～82岁，平均（55.36±12.98）岁，合并糖尿病17例，合并慢性乙型肝炎5例，合并肾小球肾炎3例。所有患者均有不同程度的咳嗽、咯血、发热、乏力、消瘦、夜间盗汗等临床表现。

1.2 标本

嘱咐患者晨起用清水漱口后，用力咳出肺部的痰液。每位患者采集3份标本，一份采用荧光染色显微镜镜检；一份采用BACTECTMMGITTM960结核杆菌检测系统（BD，NJ，USA）进行细菌培养和药敏检测；一份用于Xpert MTB/RIF检测。所有的检测都在省结核病参比实验室（通过IS015189认可的结核病检测实验室）内进行。

1.3 仪器

Gene Xpert MTB/RIF检测系统、生物安全柜、低温冷冻离心机、涡旋振荡器、恒温培养箱。

1.4 试剂

Xpert MTB/RIF检测仪器及配套试剂（Sample Reagent液和反应盒）由美国Cepheid公司生产。培养前处理消化液（NALC-NaOH混合液），缓冲液，配制参照《结核病诊断实验室检验规程》[1]，罗氏培养基和药敏培养基由珠海贝索生物技术有限公司生产。

1.5 方法

1.5.1 Xpert检测

吸取痰标本1mL加入Sample Reagent痰标本处理液2mL，涡旋振荡10S，直至无可见块状痰标本存在，静置15min后，吸取2mL缓慢加入反应试剂盒内，将反应试剂盒放入Gene Xpert MTB/RIF检测仪内进行检测。

1.5.2 分枝杆菌分离培养

吸取标本2～5mL与消化液1:2震荡混匀后静置15min（不超过20min），加入缓冲液至45mL，3500r/min离心，15min，弃上清液，再加入1mL缓冲液混匀后滴加到罗氏培养基。放入温箱孵育（温箱温度控制35～37℃），接种后第3d和第7d观察培养基情况，此后每周观察1次。

1.5.3 药物敏感性试验

包含有菌种鉴定和利福平等8种药物，采用比例法对培养出来的分枝杆菌进行操作，操作方法按照《结核病诊断实验室检验规程》。

1.6 统计学方法

采用SPSSl6.0统计软件，以临床诊断为金标准计算各类检测方法检测诊断肺内及肺外结核病的敏感性、特异性；以液体药敏结果为金标准，评价Xpert MTB/RIF检出RIF耐药的准确性。计数资料以频数或（%）表示。

2、结果

2.1 3种方法检测结果的比较

79.4%（402/506）的患者被临床诊断为结核病，其中肺结核为315例，肺外结核为87例。在87例疑似肺外结核患者当中，Xpert MTB/RIF试验诊断为阳性有12例（13.79%），MTB培养阳性有16例（18.39%），荧光染色涂片显微镜检查阳性有3例（3.44%）（表1）。

表1 3种方法检测结果的比较（例）

2.2 3种方法诊断肺结核及肺外结核的敏感度比较

Xpert MTB/RIF试验和结核分枝杆菌培养的两者的阳性一致率为94.3%（K＝0.885；95%CI，0.824～0.946）；Xpert MTB/RIF试验和AFB涂片检测两者的一致率为70.3%（K＝0.751；95%CI，0.665～0.838）。以临床诊断为标准，Xpert MTB/RIF、结核分枝杆菌培养、荧光染色涂片显微镜检查及3种方法相结合诊断肺结核的敏感度分别是52.4%（165/315）、49.5%（156/315）、36.8%（116/315）和57.1%（180/315）；Xpert MTB/RIF试验、结核分枝杆菌培养、荧光染色涂片显微镜检查及三者相结合诊断肺外结核的敏感度分别是13.8%（12/87）、18.4%（16/87）、3.4%（3/87）和25.3%（22/87），Xpert MTB/RIF对肺结核和肺外结核的诊断特异性为100%，详见表2。

表2 3种方法诊断肺结核及肺外结核的敏感度比较（%）

3、讨论

肺结核的预后与诊断时间关系密切，及早诊断治疗非常关键[3]。痰涂片检查是诊断肺结核的常用方法，但是涂阴性率较高，可达70%左右，而“金标准”分枝杆菌培养结果回报周期长达4～8周[4]，从而导致延迟诊断、预后不佳。Xpert MTB/RIF是一个特异性检测结核分枝杆菌的半巢式实时荧光定量核酸扩增试验，在两小时之内自动化扩增和检测结核分枝杆菌，同时检测利福平耐药，操作简单，时效性强[5]，同时Xpert MTB/RIF试验的样本检测程序可以避免气溶胶感染，符合生物安全要求，成为WHO推荐检测肺结核和利福平耐药、以及HIV合并结核分枝杆菌感染疑似病例的重要检测方法[6]。我们此次主要评估其对于肺结核病和肺外结核病的诊断效果。不同于大多数先前的研究，本实验采用了以临床诊断活动性结核（结合影像、化验，临床表现，胸片和抗结核治疗的反应）作为评估Xpert MTB/RIF试验的标准。以临床诊断为标准时，Xpert MTB/RIF试验在肺结核诊断中有比较好的敏感性和特异性[7]，本文Xpert MTB/RIF与传统结核分枝杆菌培养相比略好（52.4%vs.49.5%），且结果回报时间大大缩短（平均约38d）[8]，显著优于AFB涂片检测（52.4%vs.36.8%），与周洪经等[9]的报道基本一致（58.09%）。有研究显示[10-12]，Xpert MTB/RIF对于肺外结核的诊断有很高的特异性和敏感性，（以培养为标准）综合敏感中位数为0.83，特异性为0.98[5]，本研究结果示其敏感性较差，可能与肺外结核标本较少有关，需在日后工作中进一步进行大数据统计分析修正完善。总体来说，Xpert MTB/RIF与结核诊断金标准分枝杆菌培养有着很高的阳性一致性，且特异性更好，3种方法相结合比单独一种方法能获得更好的敏感度，更有利于提高临床诊治能力。

参考文献:

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