达泊西汀是一种强选择性5-羟色胺再摄取抑制药(selective serotonin reuptake inhibitor, SSRI),是国内外《早泄诊治指南》首推的一线治疗药物[1-3]。盐酸达泊西汀口服给药可以迅速吸收，60 mg剂量给药后1.3 h左右达到峰浓度，并且可迅速清除，给药后24 h血浆浓度不到峰浓度的5%。本研究旨在以国产的盐酸达泊西汀片作为受试制剂(test, T),以原研的盐酸达泊西汀片(商品名：Priligy®/必利劲®)作为参比制剂(reference, R),用液相色谱-串联质谱法测定人血浆中达泊西汀的质量浓度[4-6],并参考现行生物等效性研究的相关技术指导原则进行人体生物等效性评价[7],以期为药品注册提供支持，为临床用药提供更多选择。

一、材料、对象与方法

1 药品与仪器

T: 盐酸达泊西汀片，规格：每片60 mg, 批号：210506,陕西步长制药有限公司生产；R:盐酸达泊西汀片(商品名：Priligy®/必利劲®),规格：每片60 mg, 批号：08002,注册证号：国药准字 H20150564,德国Menarini-Von Heyden GmbH公司生产；盐酸达泊西汀(标准品),纯度：98.14%,批号：19-09-0304,购自美国SINCO PHARMACHEM;盐酸达泊西汀-d7(内标),纯度：99.2%,批号：1734-066A1,购自加拿大TLC Pharmaceutical Standards公司。空白血浆，均来自本试验纳入的健康受试者。

TRIPLE QUAD 5500串联质谱仪、ExionLC液相系统，均为美国AB SCIEX公司产品。

2 受试者选择

本试验经河南(郑州)中汇心血管病医院医学伦理委员会批准(伦理批号：空腹2021HDECPJ64,餐后2021HDECPJ64,临床试验备案号：202100748-01)。所有受试者均签署知情同意书。空腹组36例男性健康受试者，平均年龄为(28.06±6.44)岁，平均身高为(171.54±5.77)cm, 平均体质量为(67.62±7.38)kg, 平均体质量指数(body mass index, BMI)为(22.96±2.10)kg·m-2。餐后36例男性健康受试者，平均年龄为(25.67±5.36)岁，平均身高为(173.74±4.88)cm, 平均体质量为(68.90±7.79)kg, 平均BMI为(22.82±2.29)kg·m-2。

入选标准①受试者愿意从签署知情同意书至最后一次给药后3个月内无生育计划(包含捐精计划)且自愿采取非药物性避孕措施；②年龄为18周岁以上(包括18周岁)的男性，体质量≥ 50 kg, BMI 19.0～26.0 kg·m-2;③实验室等检查经研究者判断为正常或异常无临床意义者等。

排除标准①既往有心血管疾病、肝疾病、肾疾病、内分泌系统疾病、消化系统疾病、血液系统疾病、呼吸系统疾病等疾病史；②对试验用药物活性成分达泊西汀或辅料有过敏史者；③临床实验室检查有临床意义异常者等。

3 分组、给药方法与血样采集

本方案按单中心、随机、开放、两周期、双交叉、单剂量临床试验设计。

受试者于给药前1 d入住河南(郑州)中汇心血管病医院Ⅰ期试验病房。服药前禁食10 h, 从服药前1 h至服药后1 h不得饮水。用常温开水约240 mL送服受试制剂或参比制剂60 mg。给药前(60 min内)和给药后0.25、0.50、0.75、1.00、1.33、1.67、2.00、2.50、3.00、4.00、5.00、6.00、8.00、12.00、24.00、48.00、72.00 h共计18个时间点进行药代动力学(pharmacokinetic, PK)血样采集，用于分析血浆中的达泊西汀。受试者经7 d清洗期后进行第2周期的试验，试验操作同第1周期。

每次取血约4 mL至含肝素钠的真空采血管中，立即轻柔翻转混匀，然后立即保存在冰浴中。在30 min内，以2 600 r·min-1离心10 min, 分离血浆。将血浆分为2份，并置于(-75±15)℃的冷冻箱进行储存。从离心开始至储存之间的时间不应超过120 min。

4 测定方法

本研究方法学建立和生物样本检测由天津汉一医药科技有限公司完成。

色谱条件色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm×50.0 mm, 1.7 μm),流动相：含0.2%甲酸的水溶液(A)-含0.2%甲酸的乙腈溶液(B),柱温：40 ℃,流速：0.40 mL·min-1,进样量：2.00 μL。梯度洗脱程序：0～0.20 min, 35%B;0.20～0.80 min, 95%B;0.80～1.30 min, 95%B;1.30～1.31 min, 65%B;1.31～1.60 min, 65%B。

质谱条件电喷雾离子源，正离子模式；多反应监测模式；离子喷雾电压：5 500 V,气帘气：241 kPa; 离子源气体1:345 kPa, 离子源气体2: 345 kPa; 离子源温度：500 ℃;达泊西汀和内标用于定量分析的离子对分别为m/z306.1→233.1和m/z313.1→268.1。

标准曲线及质控样品工作溶液配制称量盐酸达泊西汀对照品约10 mg置于聚丙烯管中，用移液器或分液器移取适量50%乙腈水溶液溶解，制得质量浓度为1.00 mg·mL-1的对照品储备液溶液，保存备用。取该储备液适量，用50%乙腈水溶液稀释，得相应质量浓度的标准曲线工作溶液和质控工作溶液。

内标工作溶液取盐酸达泊西汀-d7对照品约1 mg, 移液器移取适量50%乙腈水溶液溶解，转移至聚丙烯管中，加入50%乙腈水溶液配制成终浓度0.20 mg·mL-1的溶液作为内标储备液，保存备用。取该储备液适量，用50%乙腈水溶液稀释，得质量浓度为10.0 ng·mL-1的内控工作溶液。

血浆样品处理将待测血浆样品在室温黄光下融化后，涡旋混匀；取样本50 μL于96孔板或排管中，加入50%乙腈水溶液150 μL于96孔板或排管中，涡旋1 min, 在4 ℃下，以3 700 r·min-1离心15 min。移取上清液100 μL至装有100 μL蒸馏水的96孔板或排管中，置于4 ℃自动进样器待进样分析。

5 方法学考察与评价

专属性在样品测定条件下，将空白人血浆样本、加入标准品的人血浆样本及受试者服药后血浆样本按“血浆样品处理”项下分析，空白血浆中未检测到达泊西汀及其内标的干扰峰，空白血浆中的内源性物质不干扰达泊西汀及其内标的测定。达泊西汀及其内标的保留时间均约为1.05 min, 典型色谱图见图1。

图1血浆中达泊西汀(Ⅰ)和达泊西汀-d7(内标，Ⅱ)的典型色谱图

标准曲线与定量下限按“标准曲线及质控样品工作溶液”项下配制达泊西汀质量浓度分别为2、4、10、20、100、400、800和1 000 ng·mL-1的校正标样，按“血浆样品处理”项下方法处理后，进样测定，记录峰面积。以达泊西汀血药浓度为横坐标(x),以其与内标的峰面积比值为纵坐标(y),用最小二乘法(权重系数为1/x2)进行线性回归，回归方程为y=0.03x+1.31×10-3(r=0.998 6),定量下限为2.00 ng·mL-1,线性范围为2.00～1 000.00 ng·mL-1。

精密度与回收率按“标准曲线及质控样品工作溶液”项下方法配制质量浓度分别为2.00、6.00、60.00、500.00、和750.00 ng·mL-15个质量浓度的质控样品，每一种质量浓度平行6份，在至少2 d内，连续测定3批来评估达泊西汀批内、批间精密度。结果如表1所示，达泊西汀批内相对标准偏差(relative standard deviction, RSD)为1.92%～4.81%;批间RSD为2.87%～8.42%,低、中、高质量浓度下，达泊西汀提取回收率分别为111.50%、112.50%和104.30%,RSD分别为6.4%、1.2%和1.4%,符合回收率考察的要求，见表1。

表1用液相色谱-串联质谱检测达泊西汀在人血浆中的精密度与回收率

基质效应分别考察了6个不同来源的空白血浆样本、1个溶血的空白血浆样本、1个高脂的空白血浆样本对达泊西汀及其内标的干扰，在所得上清液中添加低、中、高质量浓度(6、500和750 ng·mL-1)质控工作液和内标工作液，计算内标归一化基质因子。 结果表明，达泊西汀无明显空白血浆、溶血血浆、高血脂血浆基质效应，不影响分析物的定量分析。

稳定性分别考察了全血样品和血浆样品的稳定性，结果表明全血样品室温放置27 h后样品稳定；血浆样品在-90 ℃条件下冻融5次、室温放置29 h、4 ℃放置7 h、-60 ℃和-90 ℃条件下储存77 d、样品提取后自动进样器(4 ℃)放置48 h后，稳定性均良好。

6 统计学处理

用Phoenix WinNonlin 8.0软件计算达泊西汀非房室模型主要PK参数，用SAS 9.4软件进行生物等效性分析，Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后进行多因素方差分析、双单侧t检验并计算90%置信区间。当盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂血浆中的达泊西汀的PK参数AUC0-t、AUC0-∞和Cmax经调整后的几何均值比的90%置信区间均完全落在80.00%～125.00%,则说明两制剂间具有生物等效性。

二、结果

1 血药浓度-时间曲线

本试验空腹组共筛选74例，入组36例受试者，33例受试者按照试验方案完成两周期给药、样本采集和全部观察，K009(R-T)和K012(R-T)受试者在第一周期给药后1 h内发生呕吐退出试验，K018(R-T)受试者在第一周期结束后自行退出研究。

本试验餐后组共筛选79例，入组36例受试者，35例受试者按照试验方案完成两周期给药、样本采集和全部观察，1例受试者在第一周期给药时药片掉落水杯中，未完成服药，退出试验。

受试者口服受试制剂和参比制剂后达泊西汀的PK参数，包括Cmax、tmax、AUC0-t、AUC0-∞、t1/2。受试者空腹、餐后单次口服受试制剂和参比制剂60 mg后，达泊西汀的平均血药浓度-时间曲线见图2。

2 PK参数

空腹组、餐后组受试者口服盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂60 mg后的主要PK参数，见表2。

图2空腹组(A)和餐后组(B)单次口服受试制剂(T)和参比制剂(R)后平均血药浓度-时间曲线

表2空腹和餐后受试者口服受试制剂和参比制剂后达泊西汀主要药代动力学(PK)参数

3 生物等效性评价

在空腹状态下，口服盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂血浆中达泊西汀PK参数Cmax、AUC0-t和AUC0-∞调整后的几何均值比分别为106.0%、107.9%和107.8%,其90%置信区间分别为99.32%～113.12%、101.64%～114.56%和101.64%～114.24%。

在餐后状态下，口服盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂血浆中达泊西汀PK参数Cmax、AUC0-t和AUC0-∞调整后的几何均值比分别为98.6%、102.6%和102.2%,其90%置信区间分别为92.89%～104.69%、98.55%～106.73%和98.19%～106.37%。

结果表明，在空腹和餐后状态下，盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂之间的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的几何均值比的90%置信区间均落在80.00%～125.00%,说明两制剂具有生物等效性。

4 安全性评价

空腹试验服用受试制剂后，8例受试者(27.78%,8例/36例)发生了10例次不良事件；服用参比制剂后，8例受试者(27.78%,8例/36例)发生了14例次不良事件。

餐后试验服用受试制剂后，8例受试者(27.78%,8例/36例)发生了9例次不良事件；服用参比制剂后，6例受试者(16.67%,6例/36例)发生了9例次不良事件。说明两制剂均具有较好的安全性和耐受性。

三、讨论

本研究用双交叉设计，以达泊西汀PK参数(Cmax、AUC0-t和AUC0-∞)为主要分析指标，按照试验组∶对照组=1∶1,在双单侧5%的显著性水平，总体检验效能为90%,假设个体内变异度为22%,考虑到20%的脱落率的条件下，本研究计划受试者入组例数为空腹试验和餐后试验分别为36例。

由试验结果可以得出，本研究健康受试者在空腹和餐后状态下，达泊西汀t1/2分别在16和20 h左右，tmax分别在1.2和1.5 h左右，空腹Cmax约为440 ng·mL-1这与原研药说明书和文献中描述的达泊西汀tmax为1～2 h及空腹Cmax为498 ng·mL-1基本一致[8-9]。本试验所得达泊西汀餐后Cmax约为650 ng·mL-1,较空腹增加约40%,与原研说明书中描述的“摄入高脂饮食可以适度降低达泊西汀的Cmax(10%)”不完全一致，推测可能与高脂餐或人种以及产品的变异系数有关。

本试验提示：达泊西汀吸收较好，受试制剂为PK参数与原研药基本一致。在空腹和餐后条件下，参比制剂和受试制剂的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞调整后几何均值比的90%置信区间均在法规允许的80.00%～125.00%。这表明两制剂在中国健康受试者体内具有生物等效性。

参考文献:

[1]胡悦,曹宏伟,彭晓辉,等.盐酸达泊西汀对继发性早泄的临床治疗价值[J].中国性科学,2021,30(7):22—24.

[2]钱乐,朱选文,黄晓军,等.盐酸达泊西汀治疗早泄的临床疗效观察[J].中华男科学杂志,2016,22(6):566—568.

[3]北京中医药学会男科疾病专家共识组.早泄中西医融合药物治疗专家共识.中国男科学杂志,2021,5(6):93—96.

[4]胡婷婷,芦春梅,杨璐,等.HPLC-MS/MS法检测抗疲劳类保健品中的达泊西汀[J].中国卫生检验杂志,2015,25(10):1528—1530.

[5]聂微,叶海鸿,李巧玲,等.HPLC法测定盐酸达泊西汀中R-异构体含量[J].中国药师.2022,25 (11):2048—2051.

[6]司天梅,刘薏,苏允爱,等.盐酸达泊西汀在中国男性志愿者中的药动学研究[J].中国新药杂志,2009,8(22):2138—2142.

[7]Ch.P(2020) Vol Ⅳ,中华人民共和国药典2020版[S].四部.2020:460—466.

[8]刘静彦.达泊西汀在健康人群的药动学及5-HTTLPR基因多态性对其治疗早泄人群的疗效和安全性影响[D].甘肃兰州兰州大学,2022.

[9]史复,陆阳,刘元元,等.国产与原研盐酸达泊西汀片治疗早泄的临床研究[J].中国男科学杂志.2022,36 (3):71—79.

基金资助:陕西省重点研发计划一般基金资助项目(2023-YBSF-533);

文章来源:肖功胜,孙宇宏,单娜,等.盐酸达泊西汀片在中国健康受试者的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(21):3153-3157.