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慢性阻塞性肺疾病肺功能与不同时期MIR155HG水平变化的相关性研究

2020-08-29 716 上传者：管理员

摘要：目的研究不同时期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清中长链非编码RNAMIR155HG表达水平，并探讨COPD不同时期MIR155HG与肺功能的相关性。方法选取2017年6月至2019年7月于该院就诊并接受治疗的COPD患者104例作为研究对象，其中急性加重期COPD患者56例(急性加重期组)，稳定期COPD患者48例(稳定期组)。同期选取健康体检者46例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测受试者血清中MIR155HG表达水平，检测各组肺功能指标水平，分析COPD不同时期患者血清MIR155HG水平与肺功能指标相关性。结果急性加重期组血清MIR155HG表达水平显著高于稳定期组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。稳定期组血清MIR155HG表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。急性加重期组第一秒用力呼气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FVC、FEV1/FVC、最大呼气峰流速(PEF)、最大呼气中期流速(MMEF)均显著低于稳定期组和对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。稳定期组FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平显著低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。稳定期和急性加重期COPD患者血清MIR155HG水平与FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平均呈负相关(P<0.05)。结论稳定期和急性加重期COPD患者血清MIR155HG水平变化与肺功能密切相关。血清MIR155HG结合肺功能指标对评价COPD的早期危险性有重要意义。

关键词：
急性加重期
慢性阻塞性肺疾病
稳定期
肺功能
血清
长链非编码RNAMIR155HG
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慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病机制相对较复杂，特点为不完全可逆的气流受限，可发展为终末细支气管远端气腔出现异常、持久扩大，最终导致肺间质纤维化[1]。COPD是临床呼吸系统疾病的重点、难点，其患者例数较多，病死率较高，严重危害我国人民的身体健康，干扰其日常生活、工作[2]。肺功能常规检查被作为COPD的诊断标准，但临床上常受地域、人文环境发展、检查设备等多重因素影响，使该检查结果存在偏差[3]。因此，可寻找相关生物学标准辅助诊断，增加COPD诊断可信性。LncRNA是一类非编码RNA的总称，其长度大于200个核苷酸[4]，广泛参与包括细胞分化、个体发育在内的重要生命过程，其异常表达还与多种人类重大疾病的发生密切相关。LncRNAMIR155HG在霍奇金淋巴瘤、慢性心力衰竭等疾病中均表达上调，且对肺腺癌细胞的增殖、抑制均有重要作用[5,6]。MIR155HG包含miR-155序列，其加工产生的miR-155与肺部疾病密切相关[7]。因此，本研究通过检测稳定期和急性加重期COPD患者血清中MIR155HG表达水平，探讨COPD不同时期MIR155HG与肺功能的相关性，以期对COPD的诊断提供指导价值。

表1qRT-PCR引物序列

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2017年6月至2019年7月于本院就诊并接受治疗的104例COPD患者作为研究对象，其中急性加重期COPD患者56例（急性加重期组），男33例，女23例，年龄32～79岁，平均（53.63±8.61）岁；稳定期COPD患者48例（稳定期组），男29例，女19例，年龄33～81岁，平均（56.63±9.09）岁；同期另选取46例健康体检者作为对照（对照组），男26例，女20例，年龄33～80岁，平均（54.72±8.23）岁。3组性别、年龄比较差异均无统计学意义（P>0.05）。纳入标准：（1）符合COPD诊断标准，稳定期、急性加重期符合评价标准[8];(2）入组前4周无全身糖皮质激素或其他气管扩张药物应用；（3）意识清晰；（4）病理资料齐全。排除标准：（1）有精神系统疾病，无法正常沟通；（2）有药物过敏史；（3）伴有严重心、肝、肾慢性疾病；（4）患其他肺部疾病。本研究经医院临床研究伦理委员会批准，符合伦理学标准，所有受试对象均由专业人员详细告知本人研究内容并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂

RNA提取试剂盒（货号：R1050），购于北京天漠科技开发有限公司；逆转录试剂盒（货号：ALH266-PTO），购于北京百奥莱博科技有限公司；miScriptSYBR?GreenMix（货号：218073），购于上海齐一生物科技有限公司。ABI7500实时荧光定量PCR(qRT-PCR）仪，购于广州市百菱生物科技有限公司；CHESTAC-8900型肺功能仪，购于北京西化仪科技有限公司。

1.2.2研究方法

1.2.2.1样品采集及保存

采集各受试对象清晨空腹静脉血5mL,3000r/min离心15min后收集血清，置于-80℃保存待测。

1.2.2.2qRT-PCR法检测血清中lncRNA

MIR155HG水平采用qRT-PCR法检测各组血清中MIR155HG表达水平。采用RNA提取试剂盒提取血清总RNA，逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用qRT-PCR仪对MIR155HG及其内参GAPDH进行扩增，引物序列见表1。qRT-PCR反应体系共20μL:cDNA(50ng/μL)2μL,miScriptSYBR?GreenMix10μL，上下游引物（10μmol/L）各0.8μL,ddH2O6.4μL，引物由上海生工生物公司合成。反应条件：95℃变性5min;95℃30s,60℃30s,72℃30s;40个循环。每例样品均设3个重复孔，采用2-ΔΔCt法对血清MIR155HG水平进行定量分析。

1.2.2.3肺功能检测

采用肺功能仪检测各组患者的肺通气功能，主要检测指标：第一秒用力呼气量（FEV1）、用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气量占用力肺活量的百分比（FEV1/FVC）、最大呼气峰流速（PEF）、最大呼气中期流速（MMEF）。

1.3统计学处理

采用SPSS23.0统计学软件进行数据处理。计量资料符合正态分布，以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。采用Pearson相关系数分析COPD不同时期患者血清MIR155HG水平与肺功能指标相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1COPD不同时期患者及对照组血清MIR155HG水平比较

急性加重期组患者血清MIR155HG表达水平显著高于稳定期组和对照组，稳定期组血清MIR155HG表达水平显著高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2COPD不同时期患者及对照组血清MIR155HG相对表达量比较

表3COPD不同时期患者及对照组肺功能指标比较

2.2COPD不同时期患者及对照组肺功能指标比较

急性加重期组FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平均显著低于稳定期组和对照组，稳定期组FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平显著低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.3COPD不同时期患者血清MIR155HG水平与肺功能指标相关性

Pearson相关系数分析结果显示，稳定期和急性加重期COPD患者血清MIR155HG水平与FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平均呈负相关（P<0.05）。见表4。

表4COPD不同时期患者血清MIR155HG水平与肺功能指标相关性

3、讨论

COPD是一种可防治的呼吸系统常见病，其以持续气流受限为特征，一般为进行性，对气体及毒性颗粒的过度炎性反应被认为与COPD病因有关[9]。随着近年来环境污染的加重，COPD发病率呈上升趋势，严重影响患者的生活质量，给家庭和社会带来沉重的经济负担[10]。因此，及时诊断及治疗对于降低COPD发病率和病死率有重要意义。

LncRNA是一类不编码蛋白质，但可通过调控基因表达在肿瘤发生、发展中发挥调控作用的RNA[11]。MIR155HG是长1500bp的LncRNA，为miR-155的宿主基因[12]。miR-155作为一种典型的多功能miRNA，在免疫反应、炎症及心血管等方面均有重要作用，可调节靶向miRNAs及介导细胞因子的表达参与肺炎、哮喘、肺结核等肺部疾病的发生、发展[13,14]。唐敏等[15]研究表明，MIR155HG在系统性红斑狼疮患者的免疫炎症机制中发挥重要作用。因此，作者推测MIR155HG在COPD疾病中可能发挥重要作用。本研究结果显示，急性加重期组血清MIR155HG表达水平显著高于稳定期组和对照组，稳定期组血清MIR155HG表达水平显著高于对照组，提示血清MIR155HG水平与COPD的发生及进展有关。推测MIR155HG可能通过产生miR-155，进而促进炎症细胞因子释放，最终导致COPD进入急性加重期。

FEV1、PEF等指标是检测大小气道气流受阻的肺功能常用指标，能反映大气道的阻塞情况[16]。本研究结果中，急性加重期组FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平均显著低于稳定期组和对照组，稳定期组FEV1、FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平显著低于对照组，提示与稳定期COPD患者及健康人群比较，急性加重期COPD患者气道气流受阻严重，大气道阻塞更深，病情也相对更加严重。而本研究中稳定期和急性加重期COPD患者血清MIR155HG水平与FEV1、FVC等肺功能指标水平均呈负相关，进一步提示血清MIR155HG表达水平与COPD的病情有密切联系，临床中可通过检测其水平变化作为COPD的诊断参考指标。

综上所述，稳定期和急性加重期COPD患者血清MIR155HG水平高于健康人群，且急性加重期患者表达水平相对更高。MIR155HG水平与肺功能指标有一定的相关性，可能对预测COPD病情的严重程度有重要指导意义，同时对COPD的治疗可能有重要提示作用。

参考文献：

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[3]沈宁,贺蓓.肺功能检查在慢性阻塞性肺疾病诊断及治疗中的临床意义[J].中华结核和呼吸杂志,2019,42(1):73-76.

[5]韩虎魁,李刚,李其勇,等.血清LncRNAMIR155HG在慢性心力衰竭患者中的表达及临床意义[J].四川医学,2019,40(4):325-329.

[6]孙柏林,杨能学.MIR155HG促进人肺腺癌细胞A549的增殖和迁移侵袭[J].重庆医科大学学报,2017,42(1):27-32.

[8]徐倩,徐丹,李风森.应用德尔菲法建立慢性阻塞性肺疾病发展“快”､“慢”的评价标准[J].重庆医学,2014,43(9):1117-1119.

[10]钱桂影,林云青.健身气功八段锦对老年慢阻肺稳定期患者肺功能及肺外表现的影响[J].光明中医,2019,34(12):1920-1922.

[13]刘希君,沈亚琪,秦虹,等.哮喘中miR-155的表达变化及其对Th细胞分化的影响[J].国际免疫学杂志,2018,41(4):390-394.

[14]李男,李云霞,加慧,等.miR-155与肺部疾病的研究进展[J].国际呼吸杂志,2017,37(8):619-624.

[15]唐敏,张玉高.系统性红斑狼疮患者血清LncRNAMIR155HG的表达及临床意义[J].实用医学杂志,2019,35(2):55-58.

王红军,贾金广.慢性阻塞性肺疾病不同时期MIR155HG水平变化及其与肺功能的相关性[J].现代医药卫生,2020(16):2531-2533+2538.