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兰索拉唑原料中基因毒性杂质二氯亚砜使用GC-MS法测定状况观察

2020-07-20 1666 上传者：管理员

摘要：目的:建立气相质谱法测定兰索拉唑中的基因毒性物质二氯亚砜。方法:采用HP-5 MS UI(30 m×0.25 mm,0.25μm)毛细管柱，起始温度为50℃，载气流速为0.8 ml•min-1，进样口温度为210℃。质谱方法采用选择离子监测(SIM)模式，m/z为79和110。结果:二氯亚砜在0.1～20.0μg•ml-1范围内线性关系良好(r=0.999 5)，加样回收率为97.4%,RSD为4.8%(n=9)，最低检测限为0.1 ng。结论:本方法灵敏度高、专属性好，可用于兰索拉唑中二氯亚砜杂质的监测。

关键词：
二氯亚砜
兰索拉唑
气相色谱-质谱联用法
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兰索拉唑(lansoprazole,LPZ)为质子泵抑制药，广泛用于消化性溃疡、胃食道反流病、慢性胃炎、Zollinger-Ellison综合征等与酸分泌有关的各种消化系统疾病[1,2]。兰索拉唑的合成比较复杂，要求苛刻，工业上常采用二氯亚砜做为催化剂生成兰索拉唑[3]。二氯亚砜(SOCl2)又名氯化亚砜，是一种无色或淡黄色易挥发液体，属于高毒类物质，有刺激性和腐蚀性，其蒸气刺激眼睛和黏膜，液体触及皮肤能引起烧伤;如不慎溅到皮肤或眼睛上，必须迅速用大量清水冲洗，严重时需立即就医。二氯亚砜遇水释放出二氧化硫、氯化氢、氯气等有毒气体，受热分解成有毒硫氧化物和氯化物烟雾。二氯亚砜可与其他化学试剂进行特殊的化学反应，如有机合成的氯化剂、制造酰基氯化物等，有利于反应的完成[4]。常用的检测方法有沸程法[5]、碘量法[6]、碱量法[7]以及气相色谱和质谱法[8,9]。沸程法、碱量法和碘量法均难以消除SO2、SCl2等物质的干扰。目前各国兰索拉唑原料的法定检测标准中，均未收载有关二氯亚砜的质量控制方法。因此，开发兰索拉唑中二氯亚砜的质量控制方法可以更有效的评估兰索拉唑原料的合成工艺，亦能更有效地对兰索拉唑原料进行整体质量控制。

根据欧洲药物管理局发布的《遗传毒性杂质限度指导原则》相关规定，以毒理学关注阈值(TTC)限度1.5μg·d-1作为杂质的可接受限度[10]。兰索拉唑治疗Zollinger-Ellison综合征时，每日最大使用量约180 mg，按此计算，含二氯亚砜不得过8.3μg·g-1。此限度较低，采用常规气相色谱法难以达到灵敏度要求。由于气-质联用(GC/MS)技术具有灵敏度高、抗干扰能力强、可同时对上百种物质进行扫描，广泛的用于农药残留、化工原料和食品添加剂等物质的检测[11,12]。二氯亚砜与甲醇在GC/MS中生成亚硫酸二甲酯(基峰79.1 m/z，母离子110.0 m/z)，通过测定亚硫酸二甲酯计算二氯亚砜的含量。本研究参考上述相关文献，研究建立了GC/MS法检测兰索拉唑中二氯亚砜含量的方法。

1、仪器与试剂

Agilent 7693-5977A气相质谱联用仪(美国Agilent公司)，Agilent 7693自动进样器(美国Agilent公司)，KQ-500E超声波清洗器(昆山舒美超声仪器有限公司)，毛细管色谱柱为HP-5 MS UI(30 m×0.25 mm,0.25μm);XS205-DU型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。

甲醇(色谱纯，美国Tedia公司);对照品:二氯亚砜(西陇化工股份有限公司，批号160106，含量99.9%);兰索拉唑原料(A企业，批号:170501,180203;B企业，批号:1803111、1803114)。

2、方法与结果

2.1溶液的配制

2.1.1对照品溶液

精密称取二氯亚砜10 mg，置200 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀;精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液;再精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，浓度为0.1μg·ml-1。

2.1.2供试品溶液

精密称取兰索拉唑原料约0.1 g，置10ml量瓶中，加甲醇适量，超声(200 W,40 k Hz)使溶解，用甲醇稀释定容，摇匀，作为供试品溶液。

2.2 GC-MS分析条件

2.2.1 GC色谱条件

HP-5 MS UI(30 m×0.25 mm×0.25μm)毛细管柱;载气为氦气，柱流量:1.0 ml·min-1，进样口温度:210℃，初温:50℃，保持3 min，以20℃·min-1升至230℃保持2 min。采用直接进样法。

2.2.2 MS条件

EI离子源，离子源温度:200℃，电子能量:70 e V,SIM模式:m/z为79和110，溶剂延迟2 min。

2.3气质联用分析

精密量取对照品溶液2.0μl，按“2.2”项下分析条件，注入气相质谱联用仪，记录质谱图。结果检测出亚硫酸二甲酯(基峰79.1 m/z，母离子110.0 m/z)的质谱峰，见图1，与标准质谱图比较结果一致。

图1亚硫酸二甲酯对照品的结构式和质谱图

2.4方法学考察

2.4.1专属性考察

取“2.1”项下对照品溶液、供试品溶液和空白溶剂(甲醇溶液)各适量，按“2.2”项下的气相质谱分析条件分别进样，记录质谱图，结果见图2。

2.4.2线性关系考察

精密量取上述对照品贮备液加甲醇稀释制成浓度分别为0.1,0.5,2,5,10,15,20μg·ml-1的标准溶液。分别精密量取上述溶液各2μl注入气相质谱仪，记录质谱图。以待测物质量浓度(X，μg·ml-1)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归分析。结果回归方程为:Y=1 507X-368，相关系数r=0.999 5，说明二氯亚砜在0.1～20μg·ml-1内线性关系良好。

2.4.3检测限与定量限

精密量取上述对照品溶液适量，逐步稀释后进样检测，以信噪比S/N=3计算检测限，以信噪比S/N=10计算定量限。检测限为0.1 ng，定量限为0.2 ng。

图2总离子流图

2.4.4精密度试验

按照“2.1”项下方法配制对照品溶液，直接进样6次，记录质谱图。对照品峰面积的RSD为3.5%(n=6)。

2.4.5重复性试验

精密称取样品约0.1 g，各6份，分别置10 ml量瓶中，精密加入对照品储备液2.0 ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取2μl，按“2.2”项下条件进行测定，记录色谱图。结果测得加标后样品中二氯亚砜的平均含量为98.0%,RSD为4.4%(n=6)。

2.4.6回收率试验

精密称取样品约0.2 g，分别置10 ml量瓶中，分别精密加入对照品储备液1.0,2.0,3.0 ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为低、中、高浓度回收率供试液，每个浓度平行3份。精密量取2μl，按“2.2”项下条件进行测定，记录色谱图，测定含量。结果平均加样回收率为97.4%,RSD为4.8%(n=9)。

2.4.7稳定性试验

取对照品溶液在室温条件下分别放置0,2,6,12 h后测定，结果峰面峰的RSD小于5%(n=4)，表明对照品溶液在12 h内稳定。

2.4.8样品含量测定

取样品，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液，照“2.2”项下条件测定，结果4批兰索拉唑原料中均未检出二氯亚砜，符合二氯亚砜不得过8.3μg·g-1的限度要求。

3、讨论

3.1溶剂的选择

二氯亚砜具有腐蚀性和高挥发性，其溶于苯、氯仿和四氯化碳等有机溶剂后进样将会腐蚀、损害分析仪器，故在检验时应慎用该类有机溶剂处理样品进行二氯亚砜检测。当采用甲醇作为溶剂时，对兰索拉唑的溶解性较好。同时二氯亚砜与甲醇溶液将会发生反应生成CH3OS(O)Cl，在之后的电子轰击源的作用下生成亚硫酸二甲酯，因此使用甲醇作为溶剂不仅可以避免对GC/MS仪器的腐蚀，同时也可以快捷检测出二氯亚砜与甲醇反应的产物[13,14,15]。

3.2稳定性考察

取“2.4.7”稳定性试验对照品溶液继续在室温条件下放置18和24 h后注入气相质谱图，结果对照品溶液在12 h后峰面积逐渐减小，至24 h下降约60%。表明对照品和样品配制后应在12 h内进样为妥。

参考文献：

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[6]苏红维.以碘量法代替蒸馏法测定氯化亚砜含量[J].河北化工,2005,28(1):64

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