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lncRNA SNHG6在鳞状食管癌组织中的表达及其临床意义
摘要：目的 探究lncRNA SNHG6在鳞状食管癌组织中的表达及其临床意义。方法 将符合标准的96例鳞状食管癌患者纳入本研究。分析TCGA数据库中SNHG6在正常食管组织及癌组织中的表达差异。采用qPCR法检测SNHG6在ESCC癌组织及癌旁组织中的mRNA表达水平。并分析SNHG6表达与ESCC患者临床特征的相关性。结果SNHG6在ESCC组织中的表达水平明显高于正常食管组织(t=12.59,P<0.0001)。96例ESCC组织中SNHG6 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(t=17.93,P<0.0001)。ESCC组织中SNHG6表达水平与患者性别、年龄、吸烟史和家族肿瘤史无关(P均>0.05),与TNM分期(χ2=12.834,P<0.0001)、分化程度(χ2=15.886,P<0.0001)和饮酒史(χ2=4.051,P=0.044)有关。结论 SNHG6在ESCC组织中呈高水平表达，其高表达与ESCC患者TNM分期、分化程度和饮酒史密切相关，可作为分子标志物为早期诊断和预后判断提供基础。
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食管癌(esophageal carcinoma, EC)是我国常见的消化道肿瘤，其发生率近年高居不下[1,2]。其中大部分EC是鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC),该疾病具有男性发病多、中晚期进展快、发病年龄普通大于40周岁、早期症状与其他疾病重叠等临床特点[2,3]。虽然随着医疗技术的发展，更多的ESCC得到针对性治疗，但其5年生存率仍低于30%[4,5]。因此，寻找ESCC新的靶点和治疗方案迫在眉睫。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的内源性非编码RNA,在细胞周期、分化等调控中发挥重要作用[6]。因此，lncRNA的异常表达可能影响癌基因或抗癌基因的表达、肿瘤细胞的生长、侵袭或/和转移等生理病理过程。小核仁RNA宿主基因6(SNHG6)是位于染色体8q13.1的新lncRNA,可通过和多种miRNA结合，调控其表达水平来参与肿瘤的发生[7]。近期刘方舟等[8]发现，lncRNA SNHG6通过结合mTOR和FAF2,增强和促进mTOR信号通路关键蛋白至溶酶体的激活，从而加速胆固醇驱动的肝癌的发展。但目前鲜有lncRNA SNHG6在ESCC中表达和机制的报道。因此本研究拟采用一系列PCR方法检测ESCC中lncRNA SNHG6的表达水平，并分析其与临床病理特征的相关性，以此为ESCC临床诊断和治疗提供新的理论依据。
1、材料与方法
1.1 研究对象
筛选2020年2月至2022年2月于本院诊治的鳞状食管癌患者资料，将符合标准的96例纳入本研究。其中男性50例，女性46例；年龄46～75岁，平均(62.18±3.45)岁；肿瘤<5 cm 47例，≥5 cm 49例；TNM Ⅰ～Ⅱ期37例，Ⅲ～Ⅳ期59例；低分化49例，中、高分化47例；家族肿瘤史18例，吸烟史20例，饮酒史20例。
纳入标准：本院首诊，并通过病理检查确诊鳞状食管癌；均行根治切除术，且癌组织和癌旁组织(癌灶边缘5 cm外的组织)保存完好；无既往化疗、放疗及免疫等治疗经历；无其他免疫系统疾病，不合并其他恶性肿瘤；自愿加入本研究，且签署知情同意书。
本研究经本院伦理会批准，全部取样和实验均在监督下进行。
1.2 主要试剂
总RNA提取试剂TRIzol、反转录试剂盒购自美国Thermo公司，qPCR购于爱博泰克公司，SNHG6和GAPDH引物由南京金斯瑞生物公司合成。
1.3 样本处理
从手术获取样本后，立即将样本剪碎并加入Trizol浸没样本，用匀浆仪进行匀浆处理，离心后取上清去除杂质，转移至无RNA酶的EP管中，使用RNA抽提试剂盒提取总RNA。如样本不是立即抽提RNA,则置于-80 ℃保存待用。
1.4 指标检测
SNHG6在正常食管组织中表达情况：通过UALCAN分析工具(http: //ualcan.path.uab.edu/)搜索并获取TCGA数据库中食管组织SNHG6表达量数据。
SNHG6在ESCC及癌旁组织中的表达情况：采用qPCR法检测样本组织中SNHG6表达水平。首先在OD260/280下测定抽提的总RNA浓度，按照反转录试剂盒说明书使用RNA,在25 ℃ 5 min、40 ℃ 60 min、75 ℃ 5 min的条件下制备cDNA。随后以此cDNA为模板进行PCR扩增，扩增调节：95 ℃预变性10 min; 95 ℃变性5 sec、60 ℃退火32 sec、72 ℃延伸30 sec, 共进行40个循环，72 ℃延伸5 min。扩增完成后，根据荧光信号到达阈值的循环数计算各空的Ct值，通过2-ΔΔCt法计算相对表达量，重复3次。以GAPDH作为参照。
1.5 数据分析
应用SPSS 22.0统计软件。计量资料以表示，组间两两比较采用LSD-t检验。计数资料以频数和构成比表示，组间两两比较采用χ2分割法或Wilcoxon秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
2.1 TCGA数据库中SNHG6在ESCC及正常食管组织中的表达情况
应用UALCAN在线工具对数据库中SNHG6在ESCC和正常食管组织中表达水平的分析发现，ESCC组织中SNHG6表达水平(1.60±0.41)明显高于正常食管组织(0.08±0.06)(t=12.59,P<0.0001),见图1。
图1 数据库中SNHG6在正常食管组织及ESCC中的表达情况
2.2 SNHG6在ESCC及癌旁组织中的表达情况
qPCR检测显示，96例ESCC组织中SNHG6 mRNA表达水平(1.40±0.65)显著高于癌旁组织(0.17±0.15)(t=17.93, P<0.0001),见图2。
2.3 SNHG6表达与ESCC患者临床病理特征的相关性分析
本研究将所有ESCC患者相对表达临界阈值定为1,相对表达>1为高表达，≤1为低表达。SNHG6表达水平与ESCC患者性别、年龄、吸烟史和家族肿瘤史无关(P均>0.05),与TNM分期(χ2=12.834,P<0.0001)、分化程度(χ2=15.886,P<0.0001)和饮酒史(χ2=4.051,P=0.044)相关，见表1。
图2 SNHG6在ESCC及癌旁组织中的表达情况
表1 SNHG6表达与ESCC患者临床病理特征的相关性分析
3、讨论
研究表明，95%以上的EC是ESCC或腺癌，同时这两种不同的EC具有不同的临床特征，具体差异体现在肿瘤位置和易感因素[9,10]。ESCC主要危险因素是吸烟和饮酒[11,12]。由于早期症状轻微，或与其他食管相关疾病症状重叠，因此ESCC难以在早期被发现。同时，这种癌症的治疗是世界性难题。因此，寻找针对的标志物势在必得。lncRNA是一类无开放阅读框的RNA分子。虽然其不具有编码蛋白的能力，但lncRNA被证实在染色质重塑、mRNA降解、蛋白翻译后修饰等多个重要节点调控肿瘤发生和发展[13]。因此，lncRNA失调可能与恶性肿瘤进展密切相关。
SNHG6,也称U87HG,可通过和多种miRNA结合，以调控其表达水平来参与肿瘤的发生和发展[14]。2016年Chang等人首次证实，SNHG6在肝细胞癌中过表达，并能够通过诱导上皮细胞向间质转化促进肿瘤生长和转移，被认为具有重要[15,16]。但在ESCC中的表达及其临床价值探讨少有。为了明确SNHG6在ESCC中是否存在表达异常，本研究首先在TCGA数据库中分析了SNHG6的表达水平。结果显示，与正常食管组织相比，SNHG6在ESCC癌组织中表达水平明显更高。这说明，SNHG6可能与ESCC的发生发展相关。为了验证这一猜想，本研究通过qPCR法检测了96例ESCC患者根治术中获取的癌组织及癌旁组织样本中的SNHG6表达水平。结果显示，SNHG6在ESCC组织中的表达水平明显高于癌旁组织。这一结果印证了上述猜想，也提示SNHG6的表达水平在ESCC发展中上调。同时，其可能影响EESCC细胞的生物学功能，并可能成为ESCC诊断的分子标志物。
随后，本研究分析了SNHG6与ESCC患者临床症状的相关性。上述研究发现，癌旁组织SNHG6表达水平最高为1.030,正常食管组织这一值为0.18,癌组织中SNHG6表达量的95%CI为1.278～1.766。所以本研究将所有ESCC患者相对表达临界阈值定为1。进一步分析发现，表达水平高于1的患者更多出现于TNM Ⅲ～Ⅳ期，或肿瘤中、高分化，或具有饮酒史患者中。这说明，SNHG6可能参与肿瘤的转移和侵袭。但由于本研究纳入近年病例，随访时间不足，未探究SNHG6与患者预后、生存率等近远期指标间的相关性。因此在下一步的研究中，将延长研究时间，分析SNHG6与近远期预后之间的相关性。
综上所述，SNHG6在ESCC组织中呈高水平表达，其高表达与ESCC患者TNM分期、分化程度和饮酒史密切相关，可作为分子标志物为早期诊断和预后判断提供基础。
参考文献:
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[9]马俊杰,李斌,陈海泉.中下段食管鳞癌的"最佳"手术方式[J].临床外科杂志,2021,29(8):781-783.
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基金资助:河南省医学科技攻关计划联合共建立项项目(编号:LHGJ20200578);
文章来源:尚自强,张殿宝,张灿斌等.lncRNA SNHG6在鳞状食管癌组织中的表达及其临床意义[J].实用癌症杂志,2024,39(03):370-372+377.
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食管癌是全世界六种最常见的癌症之一。根据世界卫生组织数据，大约一半的食管癌病例发生在中国，主要类型为鳞状细胞癌，患者5年总生存率低于20%[1,2]。虽然放化疗结合的多模式治疗在疗效方面取得显著改善，但食管癌患者的预后仍然很差且不良反应较大[3]。因此，迫切需要寻找新的治疗选择，例如找到新的抑制肿瘤生长且毒性低的药物。吉马酮是从莪术油中提取分离的一种重要的活性成分,具有广泛的药理活性[4]。
2024-06-07
食管癌是一种常见的恶性肿瘤，以中老年男性多发。食管癌通常与不良饮食习惯、亚硝胺类化合物等有关。患者早期一般无明显症状或仅在进食中出现哽咽感，中晚期会出现严重疼痛、明显消瘦、吞咽困难等症状。本文探讨食管癌微创手术治疗食管癌的临床疗效，现报告如下。
2024-06-06
食管癌病人术后恢复期间，由于面临吞咽困难和食物摄取不足的问题，导致其营养不良，影响其预后[1]。术后为了确保病人获得足够的营养和能量，需要通过肠内营养支持来获取营养物质[2]。肠内营养支持是指通过胃管或空肠管将液体饮食或特定的高营养液体送入病人的消化道，以满足病人的营养需求[3]。然而部分病人会对肠内营养支持产生不耐受，表现为腹胀、腹泻、腹痛等症状，严重影响病人肠内营养支持效果[4]。
2024-06-03
食管癌是一种发生于食管上皮的恶性肿瘤[1]。症状是吞咽时有哽噎、异物感，胸骨后有疼痛感；若发生转移或侵犯临近器官，可出现疼痛和被累及器官的相应不适。长期吸烟和饮烈性酒、吃热烫食物、饮浓茶、多食辣椒、食物过硬而咀嚼不细等，可引起食管病理生理改变，与其他因素协同食管癌的发生，其中吸烟和饮酒是食管癌发病的主要原因[2,3]。我国是食管癌高发地区，食管癌的发病率和病死率均很高，严重危害着群众的身体健康[4]。
2024-05-29
食管癌(EC)发病率居世界恶性肿瘤的第7位，死亡率居第6位。中国EC发病与死亡均占世界EC发病与死亡的50%以上。近年来，随着诊断和治疗技术的进步，EC死亡率有所下降，但由于其起病隐匿，侵袭性强，进展迅速，EC患者的预后仍然很差，5年生存率在20%～30%。研究表明，肿瘤患者的一些临床参数可以预测其预后及生存，从而指导临床治疗以提高长期生存率。
2024-05-27
食管癌是消化系统常见恶性肿瘤，根据世界卫生组织下属国际癌症研究机构GLOBOCAN 2020 的估计，2020年全球新发食管癌60.41万例，死亡54.41万例，分别居恶性肿瘤发病和死亡谱的第7位和第6位[1]。食管癌迁移力强，因缺乏早期特异性的临床症状，大部分食管癌患者就诊时肿瘤已发生转移或处于晚期，导致其死亡率居高不下。
2024-05-09
食管癌是我国较为常见的消化系统性恶性肿瘤，主要发生于食管黏膜上皮，早期缺乏特异性症状，常表现为胸骨后不适，饮食时哽咽等，而随着病情进展，此类患者可出现进行性吞咽困难等症状，此时不仅治疗难度大，而且预后较差。因此精准明确患者术前分期，对于指导临床治疗有着非常重要的指导意义。
2024-05-08
食管癌是国内常见消化道肿瘤之一，早期无明显症状，病情进展出现吞咽困难、饮食不下的典型症状，就诊时多属中晚期，其治疗往往预后不佳。伴随着手术、放化疗、靶向治疗、免疫治疗等现代医学的进展及应用，疗效肯定，但总体效果不佳，各种不良反应也随之发生。中医首先明确食管癌中医证型，辨证施治，可以提高患者生活质量。
2024-05-04
食管癌为常见的消化道恶性肿瘤之一。六君子汤出自《医学正传》,由四君子汤(人参、白术、茯苓、甘草)加陈皮、半夏组成，在治疗食管癌的方药中，六君子汤组方药物排在用药前10位[8,9,10,11,12],是临床治疗食管癌及术后并发症的常用方药[13,14,15,16],尤益于脾虚型和气阴两虚型食管癌[17]。
2024-04-12
我国食管癌发病率较高[1,2],目前食管癌根治术以McKeown食管切除术为主，淋巴结清扫较充分，但手术并发症也较多，如吻合口瘘、喉返神经损伤等[3,4,5]。其中喉返神经损伤对患者长期生存质量影响较大，可出现声音嘶哑、饮水呛咳，甚至发生吸入性肺炎，危及生命[3]。但目前关于喉返神经损伤的原因尚无定论。喉返神经旁淋巴结清扫可增加喉返神经损伤的发生率[6,7]。
2024-04-11
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国内刊号： 41-1455/R
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创刊时间：1982年
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2024-03-14
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