摘要:目的 观察补肾活血汤对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠种植窗期子宫内膜miR-135b和HOXA10 mRNA的影响,探讨子宫内膜容受性(ER)的影响机制及补肾活血汤对EMs大鼠ER的改善机制。方法 建立EMs的大鼠模型,随机分为空白正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组,采用RT-PCR法检测各组大鼠子宫内膜miR-135b、HOXA10 mRNA的表达。结果 空白正常组和假手术组种植窗口期子宫内膜miR-135b表达量显著低于模型组、中药组和西药组,中药组显著低于模型组和西药组(P<0.001);空白正常组和假手术组的HOXA10 mRNA表达量显著高于模型组、中药组和西药组,而中药组和西药组显著高于模型组(P<0.001)。结论 补肾活血汤可通过下调小鼠子宫内膜miR-135b,从而上调HOXA10 mRNA的表达,改善ER。
子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是一种子宫内膜组织生长在子宫腔以外的妇科疾病,常引起继发性痛经、慢性盆腔痛和不孕等症。这种疾病常见于育龄妇女,患病率约为10%[1]。该病难以治愈,且治疗后易复发,消耗了大量的社会资源,也给女性身体健康及家庭经济带来巨大的负担。约50%的EMs患者合并不孕,“EMs相关性不孕”的概念为国外学者Buyalos等人于2000年首次提出,并阐明其是通过多个环节引发不孕的[2]。子宫内膜容受性(Endometrial receptivity,ER)是指子宫内膜对胚胎的接受能力,是影响胚胎着床的关键因素;正常情况下人体内膜在排卵后6~10 d呈最佳容受状态,这一时期又称“着床窗口期”[3]。EMs患者内膜在着床窗口期出现的细胞形态改变以及细胞因子、黏附因子和基因的表达异常,降低了ER,从而影响胚胎着床,导致不孕。miR-135b和HOXA10 mRNA基因与ER关系密切。本研究主要通过检测miR-135b和HOXA10 mRNA基因的表达,探讨EMs对ER的影响机制及补肾活血汤改善EMs相关不孕症患者ER的潜在机制。
表1 引物序列
1、实验材料
1.1 实验动物
年龄70 d左右[平均体质量(270±6)g]的SPF级SD雌性大鼠68只,购于南昌大学医学部实验动物中心,动物许可证号:SYXK(赣)2010-0002。
1.2 主要药物
补肾活血汤,由江西省妇幼保健院中药房提供药材;地诺孕素,由德国拜耳医药保健有限公司生产。
2、实验方法
2.1 EMs大鼠分组
根据体质量将大鼠编号,采用随机数字表法分为模型组、西药组、中药组、空白正常组和假手术组,各12只;EMs供体组8只。
2.2 EMs大鼠模型的建立
将8只供体大鼠以0.9%水合氯醛腹腔注射,进行麻醉;常规消毒后切除子宫,剪成3 mm×4 mm大小的子宫碎片,缝合于受体大鼠两侧腹壁及卵巢周围肠系膜血管丰富处,左右各1块,内膜面朝向腹腔,逐层缝合腹腔;假手术组于两侧腹壁及卵巢周围肠系膜血管丰富处各缝合1个线结,逐层缝合腹腔。术后大鼠均予青霉素钠注射液腹腔注射10 000 IU。术后5 d腹部切口常规消毒。空白正常组无需处理。
造模1周后,各组随机选取2只大鼠检验模型是否成功。若移植组织体积增大,异位病灶内液体积聚,见硬质透明小囊泡,内含淡黄色透明液体,并与周围组织呈不同程度的粘连;卵巢旁异位病灶与周围紧密粘连、不易分离,可形成包裹性积液或血肿;HE染色后,光镜下见明显的内膜细胞或间质细胞、腺体,视为造模成功。
2.3 给药方法
模型建立2周后给药,5 d为1个周期,连续给药3个周期。
2.3.1 中药组
予补肾活血汤。组方:桃仁15 g,丹参20 g,白芍15 g,炙甘草9 g,菟丝子10 g,当归10 g,紫河车10 g,川芎10 g,赤芍10 g;用500 mL蒸馏水将以上中药材浸泡30 min,加热沸腾后小火微沸30 min,煎煮两次;将两次药液合并,纱布过滤,水浴锅浓缩至生药含量为1.09 g/mL的中药液,装于无菌小瓶中,4℃冰箱保存备用。剂量:109 g/60(kg·d)×6.25=11.35 g/(kg·d)≈0.011 g/(g·d)
2.3.2 西药组
予地诺孕素。地诺孕素为白色或类白色片,每片含地诺孕素2 mg。用蒸馏水溶解药片,制成溶液,调整浓度为含地诺孕素0.2 mg/mL的药液。剂量:2.0 mg/60(kg·d)×6.25=0.21 mg/(kg·d)≈0.0002 mg/(g·d)。
2.3.3 其他
模型组、假手术组依据体质量予等量蒸馏水灌胃。
2.4 标本采集
各组大鼠着床窗口期采用颈椎脱臼法处死,剖腹,完整取出双侧卵巢和子宫,用小镊子仔细分离并剔除表面的脂肪,0.9%NaCl注射液冲洗血渍,滤纸吸拭表面,放置于冻存管中,置于-80℃冰箱里保存,待检测。
2.5 RT-PCR法检测子宫内膜miR-135b和HOXA10mRNA表达量
取手术切除的各组大鼠一半子宫内膜组织,采用TRIzol法提取组织总RNA,经紫外分光光度计鉴定,OD 260/280为1.8~2.1。按TaqMan microRNA反转录试剂盒说明,将总RNA反转录为cDNA。以cDNA为模板,按TaqMan Universal PCR Master Mix试剂盒说明进行PCR扩增。所有引物由哈尔滨赛拓生物科技有限公司设计合成,引物序列见表1。
PCR扩增体系(10μL):2×TaqMan PCR Mix 5μL+上下游引物各1μL+模板cDNA 1μL+蒸馏水2μL。
反应条件:95℃30 s、95℃5 s、60℃30 s,共35个循环。
以U6或GAPDH为内参,采用2-ΔΔct法计算miR-135b、HOXA10 mRNA相对表达量。实验重复3次,取平均值。
2.6 统计学方法
采用SPSS 22.0统计学软件分析,计量资料以表示,行单因素方差分析,组间比较并用邦弗伦尼法;以GraPhpad Prism 9.0软件作图,P<0.05为差异有统计学意义。
3、结果
采用RT-PCR法检测结果显示,空白正常组和假手术组着床窗口期子宫内膜miR-135b表达量显著低于模型组、中药组和西药组,中药组显著低于模型组和西药组,差异均有统计学意义(P<0.001);空白正常组和假手术组的HOXA10 mRNA显著高于模型组、中药组和西药组,而中药组和西药组显著高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.001)。见表2、图1、图2。
表2 各组大鼠着床窗口期子宫内膜miR-135b、HOXA10 mRNA表达比较
图1 miR-135b在各组的表达
图2 HOXA10在各组的表达
4、讨论
EMs的亚型及导致的疼痛、炎症、盆腔解剖结构改变、粘连、卵巢储备功能紊乱、子宫内膜容受性同疾病的全身影响之间的复杂相互作用,可导致不孕症的发生[4]。研究[5]表明,EMs患者血清及腹腔液中白细胞介素-37(IL-37)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平比正常组显著增高,干扰素-γ(IFN-γ)的分泌显著降低。Bagot C N等[6]的研究认为,EMs通过降低小鼠HOXA10mRNA的表达,影响胞饮突的发育从而降低ER。
miR-135包括miR-135a和miR-135b两种亚型,其表达与ER及着床密切相关。在正常子宫内膜和EMs女性的月经周期中,miR-135表达谱存在显著差异[7,8]。Ri⁃yanti A等[9]研究发现,不孕症女性的子宫内膜中miRNA-135b的表达高于能正常生育的对照组1.81倍(P<0.01),而HOXA-10 mRNA的表达显著低于对照组(P=0.047),结论与本研究类似。Petracco R等[10]研究发现,与正常女性相比,EMs患者增殖期子宫内膜中miR-135a表达显著升高,miR-135b在增殖期和分泌期都有较高表达且变化较小,且该研究还发现HOXA10 mRNA基因在EMs患者内膜组织中的表达受到抑制,故提示miR-135的高表达可抑制子宫内膜中HOXA10 mRNA的表达,从而影响ER。本研究结果表明,miR-135a在mRNA和蛋白质水平上都抑制了HOXA10 mRNA的表达,其促进细胞迁移和侵袭的能力被HOXA10 mRNA过表达部分逆转。
中医学认为,血瘀是本病的关键病机,瘀血积聚、肾精化源不足,导致肾虚血瘀;肾虚是基本病机,肾虚则气血运行不畅,血脉瘀积阻滞胞宫,形成肾虚血瘀,故肾虚与血瘀二者互为因果,相互影响[11]。本研究中已造模的三组大鼠着床窗口期子宫内膜miR-135b表达量显著高于空白正常组和假手术组,HOXA10 mRNA表达量显著低于空白正常组和假手术组,初步表明EMs对ER存在不良影响。中药组大鼠在治疗后子宫内膜miR-135b表达量比模型组显著下调,HOXA10 mRNA显著上调(P<0.05),表明补肾活血汤可通过抑制miR-135b的表达,上调HOXA10 mRNA,从而改善ER。
本研究首次报道了补肾活血可经miR-135b来改善EMs大鼠ER的机制,对进一步的临床治疗及研究起到一定的启示作用。
参考文献:
[5]江昭颖,蒋建发,薛敏.子宫内膜异位症患者血清及腹腔液中IL-37与TNF-α、IFN-γ的关系[J].解放军医学杂志,2020,45(3):304-307.
[11]马堃,陈燕霞,李敏.补肾活血法治疗子宫内膜异位症不孕的临床经验[J].中国中药杂志,2019,44(6):1094-1098.
基金资助:江西省卫生健康委科技计划项目【No.202211062】;
文章来源:刘馨竹,祝佩,崔英.补肾活血汤经miR-135b改善内异症大鼠子宫内膜容受性的机制研究[J].中国中医药现代远程教育,2024,22(11):153-156.
分享:
子宫内膜息肉是临床上一种比较常见、高发的子宫腔内膜病变,是子宫内膜组织炎症增生导致的单发或多发性息肉状赘生物,息肉大小不均,且形态多样,可影响患者正常的子宫生理功能,表现为不孕、经血量增加、经期延长、月经不规则等症状。目前,宫腔镜手术为治疗该疾病的主要手段,而在临床的长期实践中发现,此治疗方法有较高的复发率。
2024-06-01在育龄期夫妇中,不孕症人群占10%~12%[1]。体外受精-胚胎移植(IVF-ET) 作为一种治疗临床不孕症的有效技术已被越来越多的人关注,胚胎反复种植失败是阻碍IVF-ET临床妊娠率进一步提高的主要因素之一[2]。子宫内膜容受性受损与子宫内膜间质蜕膜化失败是导致胚胎植入失败的主要原因[3]。影响子宫内膜容受性的因素众多,如多囊卵巢综合征(PCOS)、雌孕激素水平、代谢异常以及子宫内膜本身因素等[4]。
2024-05-31子宫内膜异位症是一种常见的炎症性妇科疾病,好发于育龄妇女,主要表现为子宫内膜样组织存在并侵袭于子宫腔外的部位,发病率约为5%~10%,其病因尚未得到完全阐明,但其作为一种慢性炎症性疾病,异位灶局部免疫功能失调已得到一定认可[1];并且该免疫异常状态在外周血的免疫细胞中也有直接反映[2]。
2024-05-31子宫内膜息肉是子宫内膜腺体异常增生伴随间质改变的良性疾病,是妇科常见的子宫腔内疾病之一。研究报道,30岁以下女性子宫内膜息肉的发生率低于0.9%,随着年龄增加,子宫内膜息肉的发生率随之增高,围绝经期或绝经后女性是高发人群[1,2];此外由于地区差异,总体发生率报道差异较大,为7.8%~34.9%[3,4]。目前子宫内膜息肉的手术治疗中刮宫术及宫腔镜下子宫内膜电切术是常用的治疗方案[5]。
2024-05-30子宫内膜异位症(简称内异症)是雌激素依赖性妇科良性疾病,以疼痛为主要的临床表现。现有治疗方案包括药物和手术,旨在缓解疼痛及缩小病灶。治疗方式的选择取决于临床症状和疾病的严重程度。目前,指南将口服避孕药和孕激素列为一线治疗。在2/3的内异症女性中效果良好,在1/3对黄体酮存在耐药性的内异症女性中无效。
2024-05-27纵隔子宫(septate uterus)是由于胚胎时期双侧副中肾管融合后吸收障碍所导致的生殖道畸形,是最常见的子宫畸形,影响2%的育龄期妇女,主要引起不孕、早产、流产、胎位异常和胎儿畸形等。近年国内外多篇文献报道纵隔子宫患者中子宫内膜异位症(endometriosis, EMs)发生率升高,但也有学者认为纵隔子宫并不增加EMs的发生率。
2024-05-25宫腔粘连(IUA)是指子宫内膜基底层受破坏导致子宫内膜无法完成增生修复,被纤维组织所取代,最终引起宫颈管、子宫腔局部或全部形成粘连闭塞[1,2]。IUA导致宫腔粘连部位、程度、面积的不同,可引起闭经、月经过少、痛经、反复流产及不孕[3]。IUA的发生与患者既往行人工流产术、清宫术、子宫肌瘤切除术、引产等子宫腔操作史密切相关[4];据报道,多次人工流产、刮宫所致的IUA发生率高达25 %~30 %[5]。
2024-05-14子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是一种子宫内膜组织生长在子宫腔以外的妇科疾病,常引起继发性痛经、慢性盆腔痛和不孕等症。这种疾病常见于育龄妇女,患病率约为10%[1]。该病难以治愈,且治疗后易复发,消耗了大量的社会资源,也给女性身体健康及家庭经济带来巨大的负担。约50%的EMs患者合并不孕,“EMs相关性不孕”的概念为国外学者Buyalos等人于2000年首次提出,并阐明其是通过多个环节引发不孕的[2]。
2024-05-14子宫内膜病变属于妇科常见疾病,以月经紊乱、下腹痛及不孕为主要表现,严重影响女性健康,故对子宫内膜病变进行早诊断、早治疗对改善患者预后至关重要。经阴道超声检查能够观察子宫内膜形态特征,并测定子宫内膜厚度,是临床检查子宫内膜病变的常用手段[1]。但部分子宫内膜良性病变与子宫内膜癌较为相似,仅通过阴道超声检查漏诊率较高。
2024-05-13子宫内膜息肉(endometrial polyps, EPs)是女性患者高发的宫腔占位性病变,据报道其患病率差异很大,为7.8%~34.9%不等,与局部炎症刺激、肥胖、雌激素水平过高等因素密切相关。临床上主要表现为阴道不规则出血、月经期长、下腹不适等,对于育龄期女性而言更重要的一点是,EPs还能降低功能,导致不孕、流产等。
2024-05-10人气:11680
人气:10905
人气:9921
人气:9496
人气:9446
我要评论
期刊名称:中医药管理杂志
期刊人气:5019
主管单位:国家中医药管理局
主办单位:中华中医药学会
出版地方:北京
专业分类:医学
国际刊号:1007-9203
国内刊号:11-3070/R
邮发代号:80-585
创刊时间:1991年
发行周期:半月刊
期刊开本:大16开
见刊时间:7-9个月
影响因子:0.213
影响因子:0.000
影响因子:0.069
影响因子:0.345
影响因子:0.323
400-069-1609
您的论文已提交,我们会尽快联系您,请耐心等待!
你的密码已发送到您的邮箱,请查看!