首页 > 论文范文 > 自然科学论文 > 生物学论文 > 病毒学论文 > 关于2岁以下婴幼儿RV腹泻的发病情况的调查研究

关于2岁以下婴幼儿RV腹泻的发病情况的调查研究

2020-06-18 369 上传者：管理员

摘要：目的通过对监控区域内腹泻病例的监测，获取轮状病毒腹泻发生率。方法在广西壮族自治区融水县、湖南省湘潭县两个地区的村卫生室及乡镇卫生院中开展腹泻监测，收集腹泻病例和流行病学信息，采集病例粪便样本。应用ELISA法检测RV,RT-PCR法对其进行基因分型。结果湘潭县和融水县RV腹泻高峰主要集中在2月份，分别占总数的45.9%和53.9%；两地腹泻发病率为285.1/（1000人•年），RV检出率为18.0%,RV腹泻发病率为51.2/（1000人•年）；湘潭县和融水县的轮状病毒血清型均以G9型（分别占58.7%和73.7%）和P8型为主（分别占67%和81.6%）。结论RV是导致2岁以下婴幼儿腹泻的常见病原体，湘潭和融水县的RV流行株均为G9型和P8型，流行高峰为2月。

关键词：
流行病学
病毒学
腹泻
血清型
轮状病毒
加入收藏

婴幼儿腹泻是常见病、多发病，而轮状病毒是婴幼儿腹泻的主要致病因子，主要分为A、B、C3群，其中A群致婴幼儿腹泻。A群RV引起的婴幼儿腹泻有明显的季节性，一般秋冬季发病，俗称“秋季腹泻”，具有一定的流行性，表现为发病快，水样腹泻，易引起脱水，严重者可引发休克甚至危及生命。由于RV感染，全球每年约有20万名婴幼儿死亡，每年超过200万5岁以下儿童住院[1]，其中82%的死亡病例发生在发展中国家[2]。大多数RV胃肠炎病例（77.1%）发生在12月至次年5月，发病高峰值因区域而异。不同年龄RV阳性率不同，但大多数病例发生在6～23月龄儿童[3]。本文选择湖南省湘潭县和广西壮族自治区融水县进行RV腹泻监测，观察当地2岁以下婴幼儿RV腹泻的发病情况，为后续Ⅲ期临床研究奠定疾病监控基础。

1、对象与方法

1.1研究对象

为2016年12月至2017年3月湖南省湘潭县和广西壮族自治区融水县村卫生室及乡镇卫生院中因腹泻就诊的2岁以下儿童。监测期间动态总人群3918人，男童2074(52.9%），女童1844(47.1%），男女比例为1.12∶1；其中湘潭县和融水县男女比例分别为1.10∶1(1199/1087）和1.16∶1(875/757）。见表1。采集便样进行10%稀释后，离心取上清作为待检样品。

表1动态总人群

1.2主要试剂

ELISA检测试剂盒购自英国OXOID公司；病毒核酸提取试剂盒（VirusNucleicAcidExtractionKitⅡ）购自台湾Geneaid公司；第1轮基因分型试剂盒（OneStepRT-PCRKit）购自德国Qiagen公司；第2轮扩增试剂盒[BioSolutions(2XtaqPCRStarMixwithLoadingDye）]购自北京Genstar公司；蛋白标准品（1000bpDNALadder）购自北京Genstar公司；凝胶（BiowestRegularAgaroseg10）购自香港Gene公司。

1.3引物设计及合成

G血清型分型：第1轮扩增采用编码VP7基因的保守序列设计引物，即正链引物VP7F、负链引物VP7R；第2轮扩增正链引物为基因保守序列的公用引物VP7R，负链引物根据基因内不同血清型的特征序列设计1组分型引物，即aBT1F、aCT2F、aET3F、aDT4F、aAT8F和aFT9F，从扩增产物的特征相对分子量大小区别RV的不同血清型。P基因型分型：第1轮扩增引物设计类似G血清型分型，选择VP4基因内的保守序列设计引物，即正链引物VP4F和负链引物VP4R；第2轮扩增选择不同基因型的特征序列设计1组分型引物，即2T-1R、3T-1R、1T-1DR、4T-1R、5T-1R和P11R，正链引物仍采用公用引物VP4F。见表2。引物均由美国Invitrogen公司合成。

表2RT-PCR法所用引物及其产物信息

注：F表示正向引物，R表示反向引物。a表示引物中有不确定的碱基用BHKNRSVWY等代替，N=A、C、G或T,R=A或G,Y=C或T;b表示第1轮半巢式PCR中用来扩增编码VP7G基因型全长的引物；c表示在第1轮半巢式PCR中用来扩增编码VP7P基因型全长的引物。

1.4RV抗原的检测

采用ELISA法，具体操作按照RV抗原ELISA检测试剂盒（ProSpectTMRotavirusKit）说明书进行。

1.5基因分型

用病毒核酸提取试剂盒同时提取病毒DNA和RNA,RT-PCR法对RV进行分型。VP7/VP4第1轮RT-PCR反应体系：20μmol/LVP7F/VP4F1.5μL,20μmolVP7R/VP4R1.5μL,RNA模板4μL,H2O16μL,5×buffer5μL,10mmoldNTPs1μL,EnzymeMix1μL，总体积30μL。反应条件：94℃预变性3min;94℃变性30s,42℃退火30s,72℃延伸1min，共35个循环；72℃终延伸7min。VP7/VP4第2轮RT-PCR反应体系：2×Mix10μL,20μmol/L引物（aBT1,aCT2,aET3,aDT4,aAT8,aFT9/1T1,2T1,3T1,4T1,5T1,P11）各0.5μL，共3μL,VP7R/VP4R0.5μL,H2O5.5μL，第1轮产物1μL，总体积20μL。反应条件：94℃预变性3min;94℃变性30s,42℃退火30s,72℃延伸1min，共35个循环；72℃终延伸7min。

2、结果

2.1腹泻发病情况

湘潭县腹泻发病率为361.1/（1000人·年），发病率最高的为3～5月龄组，为637.9/（1000人·年）；RV腹泻发病率为52.1/（1000人·年），发病率最高的为12～14月龄组，为96.2/（1000人·年）。见表3。

融水县腹泻发病率为180.7/（1000人·年），发病率最高的为12～14月龄组，为242.6/（1000人·年）；RV腹泻发病率为49.9/（1000人·年），发病率最高的为15～17月龄组，为90.5/（1000人·年）。见表4。

监测期间，湘潭县和融水县共发生婴幼儿腹泻1030例，总人群腹泻发病率为285.1/（1000人·年）；检出RV185例，检出率18.0%，发病率为51.2/（1000人·年）。见表5和表6。

表3湘潭县不同月龄婴幼儿腹泻及RV腹泻发病情况

表4融水县不同月龄婴幼儿腹泻及RV腹泻发病情况

表5湘潭县和融水县2岁以下总人群腹泻及RV腹泻发病情况

表6不同地区2岁以下总人群RV检出情况

2.2RV腹泻的月份分布

湘潭县和融水县RV腹泻总人群主要集中在2月份，占49.2%，其次为3月份，占27.6%，见表7。

表7不同地区2岁以下总人群RV腹泻的月份分布

2.3RV基因分型

2016年12月至2017年3月间，湘潭县流行的RVG血清型优势毒株为G9（占58.7%），其次分别为G2、G4、G1、G3血清型，P血清型的优势毒株为P8（占67.0%），其次分别为P4、P6；融水县流行的G血清型优势毒株为G9（占73.7%），其次分别为G2、G3、G4、G1血清型，P血清型的优势毒株为P8（占81.6%），其次为P4血清型。湘潭县和融水县以G9、P8型最多。见图1和图2。

图1湘潭县（A）和融水县（B）流行的RVG分型

图2湘潭县（A）和融水县（B）流行的RVP分型

3、讨论

监测期间（2016年12月至2017年3月）共发生婴幼儿腹泻1030例，RV检出率为18.0%，该结果与耿启彬等[4]、郭汝宁等[5]研究的腹泻患儿中RV检出率22.9%接近，与尼日利亚腹泻儿童中RV检出率16.6%接近[6]。

湘潭县和融水县RV腹泻均2月份达到高峰，分别占总数的45.9%和53.9%，其中湘潭县RV腹泻12月至次年3月，分别有10、30、50和19例，主要集中在1和2月份；融水县RV腹泻12月至次年3月，分别有1、2、41和32例，主要集中在2和3月份。通过查询既往天气数据，发现在监测期间，湘潭县1～3月份湿度较高，降雨分别为7、10和23d,12月至次年3月的平均气温分别为13.3、12.6、12.5和13.6℃，最低气温低于10℃的分别为18、19、18和9d；融水县2、3月份湿度较高，降雨分别为12和27d,12月至次年3月的平均气温分别为9.3、7.9、8.8和11.6℃，最低气温低于10℃的分别为30、28、24和21d。因此，推测RV腹泻集中月份可能与当地气温及湿度相关，平均气温接近10℃后即开始RV腹泻流行。融水县较湘潭县偏南，且湿度较大，RV腹泻流行晚于湘潭县。湘潭县RV腹泻主要发生在9～20月龄婴幼儿，融水县RV腹泻主要发生在12～17月龄婴幼儿，两个地区婴幼儿发生RV腹泻的月龄接近，且月龄范围与其他地区RV腹泻流行病学资料中高发年龄组12～23月龄接近[7]。

湘潭县和融水县G9型（分别占58.7%和73.7%）和P8型为优势流行株（分别占67%和81.6%）。ZHOU等[8]报道的济南和临沂的RV流行病学2013～2014年调查中，G9型占91.8%,P8和P4分别占56.0%和35.8%；耿启彬等[4]、李兴斌等[9]、吕榜军等[10]的研究表明，中国RV的主要流行株从2011年起逐渐由G1、G3替代为G9，与本次调查中湘潭县和融水县的RV主要流行病株和组合相同。此外，土耳其一项2012～2015年5岁以下RV的分子流行病学调查中，优势流行株为G9和P8[11]，伊朗阿瓦士一项2016年RV基因型流行分布调查中，优势流行株也为G9和P8[12]，表明全球范围内RV的流行株处在一个动态变化过程中。

目前已上市的RV疫苗仅覆盖G1、G2、G3、G4和G9这5个血清型，保护作用不全面。研发血清型价型更多的RV疫苗，可能对儿童腹泻提供更全面的保护。

参考文献:

[4]耿启彬,赖圣杰,余建兴,等.中国26省(直辖市､自治区)2011-2014年5岁以下儿童腹泻病例轮状病毒流行特征分析[J].疾病监测杂志,2016,31(6):463-470.

[5]郭汝宁,李剑森,郑慧贞,等.2008年广东省轮状病毒腹泻监测分析[J].华南预防医学杂志,2009,35(6):13-19.

[7]熊晓顺,刘彩霞,胡音音,等.温州地区2014年-2016年儿童腹泻病毒感染流行情况调查[J].中国卫生检验杂志,2017,27(5):2257-2259.

[9]李兴斌,宣昊,张宏山,等.甘肃省武威市腹泻症候群病例检测分析[J].疾病预防控制通报杂志,2015,30(4):59-61.

[10]吕榜军,黎明强,覃彦香.轮状病毒感染性腹泻流行及疫苗的研究进展[J].现代预防医学,2016,43(4):739-741.

刘玉晴,李庆亮,白萱,姜志军,张久威,冯冬扬,杨彪,董犇,陈天柱,鄢廷栋,何绍航,杨可嘉,李放军,莫兆军,汪萱怡,徐葛林.湘潭县和融水县2岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻病流行病学调查[J].中国生物制品学杂志,2020,33(06):684-688.

基金:重大新药创新科技重大专项(2013ZX09402302)资助.