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口腔黏膜组织中miRNA-590对早期诊断口腔扁平苔癣癌变的效果

2020-07-09 196 上传者：管理员

摘要：目的探讨口腔黏膜中miRNA-590对口腔扁平苔癣(OLP)癌变的早期诊断效果。方法选取2016年4月至2018年4月间山东省立第三医院收治的200例疑似OLP癌变患者，根据病理学确诊分为OLP组101例和口腔鳞状细胞癌(OSCC)组99例，另选取40例健康志愿者为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测三组受试者口腔黏膜组织中miRNA-590的表达水平。结果对照组志愿者口腔黏膜miR-590相对表达量为(0.66±0.33),OLP组为(1.93±0.62),OSCC组为(2.76±0.87)。OSCC组和OLP组患者miR-590表达较对照组高，OSCC组患者较OLP组高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miRNA-590表达水平可作为0SCC的早期诊断标准，有很高的临床意义。

关键词：
miRNA-590
口腔扁平苔癣
口腔鳞状细胞癌
口腔黏膜
病理学
诊断效果
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口腔扁平苔癣(orallichenplanus,OLP)是口腔黏膜最常见的病症之一，同时又是一种慢性炎症性疾病，患病率0.1%～4%，病因和发病机制目前尚不明确，以中年女性为多见。口腔扁平苔癣损害好发于颊、舌、牙龈部位，一般情况对称分布，呈现一种白色珍珠状或网状、斑块改变，多数患者患病部位会有疼痛感，WHO已将其列入潜在口腔恶性疾患范畴。口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC)是口腔黏膜最常见的恶性肿瘤[1]。从生物学机理来说，miRNA-590由肿瘤细胞分泌，其表达随肿瘤细胞的生成和凋落而发生变化，有成为肿瘤标志物的优势[2,3]。miRNA-590是一种小的内源性非编码RNA分子，约由21～25个核苷酸组成。我们采用实时荧光定量PCR技术检测健康志愿者、OLP患者和OSCC患者口腔黏膜中miRNA-590的表达，为临床发生早期癌变提供可靠依据[4]。

资料与方法

1.一般资料:选取2016年4月至2018年4月间山东省立第三医院收治的200例疑似OLP癌变患者，根据病理学确诊分为OLP组101例和OSCC组99例，另选取40例健康志愿者为对照组。所有受试者对研究均知情同意。纳入标准:OLP组和OSCC组:(1)经临床表现和病例分析确诊;(2)无自身免疫性疾病;(3)非怀孕期和哺乳期。健康志愿者:(1)自愿参与;(2)无口腔炎症和其他疾病;(3)无不良生活习惯。OLP组患者男56例，女45例，年龄28～65岁，平均54岁。OSCC组患者男48例，女51例，年龄29～60岁，平均48岁。对照组男26例，女14例，年龄29～64岁，平均52岁。

2.研究方法:采用实时荧光定量PCR技术检测三组受试者口腔黏膜组织中miRNA-590的表达水平。RIzol试剂(Invitrogen，美国)依据说明书提取口腔黏膜组织标本总RNA，用紫外分光光度仪测定总RNA浓度与纯度，0D260/0D280在1.8～2.0，琼脂糖凝胶电泳检测质量。采用OneStepPrimeScriptmiRNA-590cDNASynthesiskit(Takara.日本)进行反转录反应[5]。取组织总RNA各lμl,miRNA-590-590PrimeScript反转录酶混合物2μl,miRNA-590反应缓冲液10μl，加无RNA酶水至反应体积为20μl,37℃60min,95℃5min终止反应。用miScriptSYBRGreenPCRKit(Qiagen，德国)在ABI7500PCR仪上进行荧光实时定量PCR检测miR-590表达情况。荧光实时定量PCR反应miR-590及内参U6上游引物由上海生工公司合成，各基因引物序列如表1所示。将引物分别用超纯水溶解后，制成10pmol/μl溶液，取出2.0μl加至PCR体系中，行PCR反应。将扩增后PCR产物立即进行电泳，最终计算出基因表达量。

表1引物序列

3.统计学方法:采用SPSS19.0软件分析数据，总体差异采用Kruskal-Wallis检验，各组样本均数间比较采用非参数两独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.三组受试者口腔黏膜miR-590表达量比较:OSCC组和OLP组患者miR-590表达较对照组高，OSCC组患者较OLP组高，差异均有统计学意义(均P<0.05，表2)。

表2三组受试者口腔黏膜miR-590表达量比较

讨论

miR-590在恶性肿瘤中存在差异性表达，并通过不同信号通路对恶性肿瘤的增殖、凋亡和侵袭等生物学行为产生不同影响[6]。miRNA-590在恶性肿瘤细胞中的表达远远高于其他正常细胞。随着精准医学理论和技术的进步，miR-590在肿瘤细胞中的研究不断深化，使其成为诊断和预后的新的潜在临床生物标志物，未来也将开发更多的靶向治疗药物。但现有研究表明，miRNA-590在各种恶性肿瘤中的作用尚不完全清楚，其在恶性肿瘤的发生发展中可能有着不同的作用机制，体现出miR-590在恶性肿瘤病理过程中信号作用通路的复杂性和重要性。对miR-590的进一步探索也可能为恶性肿瘤的研究提供新的思路，为癌症的临床治疗找到新的生物标志物，并为癌症的精准治疗提供更好的基础。从现有文献看，miRNA-590并非通过消化吸收而来[7,8,9]，是由细胞自身表达，并作用于自身的调节物质。在异常细胞，如癌症细胞中，存在miRNA-590异常表达，其因果关系为，细胞癌变导致了miRNA-590异常表达，而非miRNA-590异常表达导致癌症。miRNA-590并不能改变基因结构，而是对基因表达产生影响[10,11,12,13,14]。口腔扁平苔藓癌变是医生和患者都十分关心的问题，目前一般认为，扁平苔藓属于癌前状态，其癌变率远低于口腔黏膜白斑，约0.4%左右[15]。本研究结果显示，对照组口腔黏膜miR-590相对表达量为(0.66±0.33),OLP组为(1.93±0.62),OSCC组为(2.76±0.87)。OSCC组和OLP组患者miR-590表达较对照组高，OSCC组患者较OLP组高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

因此，miRNA-590表达水平可作为0SCC的早期诊断标准，有很高的临床意义。

参考文献：

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