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促凝血与抗凝血对酶联免疫吸附实验中HBsAg检测结果的研究

2024-05-08 47 上传者：管理员

摘要：目的分析促凝血和抗凝血样本对于酶联免疫吸附实验(ELISA)中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测结果的影响。方法选取2022年1月至2022年6月驻马店市中心血站共3 680例无偿献血者的血液样本进行研究，均留取血液样本两份，其中一份采取促凝血处理，另外一份采取抗凝血处理，所有血液样本使用的检测仪器及试剂均相同，并于相同条件下采取ELISA检测HBsAg；并依据HBsAg弱阳性参考品的比例加入抗凝剂开展测定；比较促凝血样本和抗凝血样本ELISA检测HBsAg的样本吸光度与标准吸光度比值(S/CO值)情况。结果促凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性48例，阳性率是1.30%；抗凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性30例，阳性率是0.82%。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的阳性率高于抗凝血样本，差异有统计学意义(P <0.05)。3 680例无偿献血者促凝血样本和抗凝血样本内共有18名的HBsAg检测结果存在不一致，促凝血样本HBsAg检测的S/CO值普遍高于抗凝血样本。经重复实验后，上述18例样本复试结果一致，均为阳性，重复实验结果和促凝血样本的检测结果相同。HBsAg质控血清依据比例加进抗凝剂后，伴随抗凝剂量不断升高，HBsAg含量以及S/CO值逐渐降低。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的S/CO值高于抗凝血样本，差异有统计学意义(P <0.05)。结论和促凝血样本相比，酶联免疫吸附实验中采取抗凝血样本检测HBsAg可能产生漏检的情况，建议留取促凝血样本开展检测，以确保检测结果的准确度。

关键词：
乙肝病毒表面抗原
促凝血样本
抗凝血样本
无偿献血
酶联免疫吸附实验
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伴随无偿献血事业持续健康发展，当前无偿献血人数正在不断增多。采供血机构给临床提供血液和血液成分制品期间需要开展输血有关传染性指标检测，乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)是主要的检测指标之一，无论是对献血者自身健康，还是采血来源、血液质量均存在重要影响[1]。当前，HBs Ag的检测方式主要包含酶联免疫吸附实验(ELISA)、血凝实验、化学发光免疫方法及核酸检测方法等，其中ELISA检测HBs Ag有着操作方便、敏感度高、特异度强、实验要求不高等优点，是各级医院以及采供血机构使用较多的一类检测方式[2]。但实际工作期间样本采集及处理、试剂和操作技术等均可能影响到ELISA检测HBs Ag的准确度，进而影响到献血者安全、血液质量和后续血液制品生产和使用[3]。影响ELISA检测HBs Ag的因素众多，其中采取不同类型血液样本开展ELISA检测是否会对检测结果产生影响，已经成为备受关注的问题[4]。较多血站采取的肝素等固体抗凝剂对血液样本开展抗凝处理，还有血站为了节省工作时间，留取和血袋内相同的抗凝血液样本开展二次检验，可能会导致血液样本稀释，进而使得部分浓度较低的HBs Ag漏诊[5]。相关研究认为[6]，离体后血液样本通常需60 min以上才可全部凝固，甚至不凝固，很难满足实验室的快速诊断需求，这时需对血液样本开展促凝处理，以加快血液的凝固速度。现对2022年1月至2022年6月驻马店市中心血站3 680例无偿献血者的血液样本开展研究，分析促凝血和抗凝血样本对于ELISA中HBs Ag检测结果的影响，现报告如下。

1、资料和方法

1.1 一般资料

选取2022年1月至2022年6月本中心血站3 680例无偿献血者，其中男1 980人，女性1 700人；年龄范20～50岁，平均(35.62±5.38)岁。本研究已经过医院医学伦理委员会审批。

纳入标准：均为本中心血站的无偿献血者；年龄≥20岁；均知晓本次研究目的，并自愿参与此次研究。

排除标准：已经确诊存在病毒性肝炎或采取过影响肝功能的药物者；血液系统疾病者；存在认知障碍或者精神病者。

1.2 方法

1.2.1 样本留取

所有受试者均留取血液样本2份，其中一份采取促凝血处理，即采集完血液样本之后放入促凝试管内；另外一份采取抗凝处理，即采血后放在5 m L肝素抗凝试管中，来回颠倒5～8次后充分混匀。

1.2.2 检测试剂

HBs Ag有关ELISA检测试剂盒为英科新创(厦门)科技有限公司提供(批号2005035102),1 ng/m L的HBs Ag质控血清为国家卫生健康委临床检验中心提供(批号200504)。

1.2.3 检测仪器

北京赛勒公司提供的TECAN全自动化样本处理系统、澳斯邦公司提供的FAME全自动式酶联免疫检测系统。

1.2.4 检测方法

收集的每份血液样本均开展初检和复检检查，初检、复检阳性和高值阴性样本需要采取相应的试剂进行双控复试；1 ng/m L的HBs Ag质控血清按照比例加进液体抗凝剂开展测定，以确定抗凝血液样本的HBs Ag漏检情况；并比较促凝血样本和抗凝血样本的ELISA检测样本吸光度与标准吸光度比值(S/CO)情况。

操作步骤如下：加入待测样本每孔0.05 m L，并设HBs Ag阳性对照2孔，HBs Ag阴性对照2孔，空白对照1孔，然后加入酶结合物每孔1滴(0.05 m L、空白对照孔不加)，充分混匀后置37℃孵育30 min。弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔，弃去拍干，反复5次后拍干。先加显色剂A每孔1滴(0.05 m L)，然后再加显色剂B每孔1滴(0.05 m L)，混匀，37℃孵育10 min。每孔加终止液1滴(0.05 m L)，混匀。

结果评定：当S/CO结果<1时即可评定成阴性，当S/CO结果≥1时即可评定成阳性。所有的实验结果(S/CO)均将室内质控于靶值范围内±2标准差当作可信[7]。

1.3 观察指标

观察促凝血、抗凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的结果及HBs Ag弱阳性参考品依据比例加入抗凝剂的ELISA检测结果，并比较促凝血、抗凝血样本的ELISA检测S/CO值情况。各组阳性率=各组阳性例数/各组总例数×100%。

1.4 统计学方法

经SPSS 23.0统计软件处理数据，计数资料以%代表，行χ2检验；计量资料以代表，行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 促凝血、抗凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的结果对比

促凝血样本采取ELISA法检测HBs Ag显示阳性48例，阳性率是1.30%；抗凝血样本采取ELISA法检测HBs Ag显示阳性30例，阳性率是0.82%。促凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的阳性率高于抗凝血样本，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 促凝血、抗凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的结果对比

2.2 18例促凝血样本和抗凝血样本HBs Ag检测结果不同的S/CO值情况

3 680例无偿献血者促凝血样本和抗凝血样本内总共18例HBs Ag检测结果存在不一致现象，其中促凝血样本HBs Ag检测的S/CO值普遍高于抗凝血样本，两种血液样本的S/CO值详见表2所示。经重复实验后，上述18例样本复试结果一致，均为阳性，重复实验结果和促凝血样本的检测结果相同。

2.3 HBs Ag质控血清依据比例加进抗凝剂后的ELISA检测结果

HBs Ag质控血清依据比例加进抗凝剂后，伴随抗凝剂量不断升高，HBs Ag含量及S/CO值逐渐降低，采取ELISA检测的HBs Ag含量及S/CO值详见表3。

2.4 促凝血、抗凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的S/CO值相比

促凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的S/CO值高于抗凝血样本，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表2 18例促凝血样本和抗凝血样本HBs Ag检测结果不同的S/CO值情况

表3 HBs Ag质控血清依据比例加进促凝剂后的ELISA检测结果

表4 促凝血、抗凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的S/CO值相比

3、讨论

HBs Ag属于无偿献血期间一项必须检测的血液传染性指标，其检测结果能直接影响到献血者、用血者健康和血液制品质量[8]。ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术[9]。ELISA属于一类敏感度及特异度较高的实验诊断技术，因其试剂较为平稳、操作方便、容易保存、结果判断较为客观和适用于大规模筛查等优点，当前已逐渐成为国内采供血机构开展血液传染指标测定的主要方式[10]。ELISA实验结果能受到较多因素影响，其中采集样本的处理方式是一项重要因素[11,12]。促凝血和抗凝血属于采集血液样本后两种常用的处理方式，有关二者对于ELISA结果的影响临床报道较少。

相关研究显示[13]，血液样本采取抗凝剂开展处理能干扰到ELISA实验结果，采取含有抗凝剂的血浆开展病毒抗体测定，若抗凝剂的含量不适宜，则容易产生花板现象(即空白、阴阳性对照及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却偏高的现象)。本次研究发现：促凝血样本用于ELISA法检测HBs Ag的阳性率高于抗凝血样本，差异有统计学意义(P<0.05)。3 680例的无偿献血者促凝血样本和抗凝血样本内共18人次的HBs Ag检测结果存在不一致现象，经重复实验后，上述18例样本复试结果一致，均为阳性，重复实验结果和促凝血样本的检测结果相同。上述结果提示，抗凝血样本在ELISA检测HBs Ag时会对检测结果产生干扰，而促凝血样本不会影响到检测结果。分析原因如下：对血液样本开展抗凝血处理，会导致血液样本被稀释，进而引起低浓度的HBs Ag漏检，产生假阴性的情况[14,15]。促凝血样本采取促凝剂使得离体后血液迅速凝固，不仅能满足实验室的快速检测需求，还能提供出高质量的血清供实验室检测，确保检测结果的准确度[16]。结合血站的操作规程，当S/CO值≥1时即可判断为阳性，复试需做2孔，明确是否为阳性[17]。因操作规程的修订时间较早，未提及检测结果位于正常范围和异常范围之间，即“灰色区”内血液样本处理方式。当前各大血站为提升血液安全质量，对于“灰色区”的血液样本采取聚合酶链反应等方法开展进一步测定。本研究结果显示：促凝血样本的用于ELISA法检测HBs Ag的S/CO值高于抗凝血样本，差异有统计学意义(P<0.05)，原因可能和促凝血样本用ELISA法检测HBs Ag的检出率较高有关。

结合本研究研究结果，提出以下应对措施：临床对于抗凝血样本用于ELISA检测HBs Ag为阴性的情况，需要开展复试之后才能下结论，以提高实验准确度。有学者认为[18]，为保证输血的安全性，提升血液质量，避免阳性样本漏检，在血液筛查时采取的ELISA试剂需通过国家检测，同时血站应正确选取相应的ELISA试剂盒，定期开展试剂评价，采取进货前抽检，积极建立和完善科学的接收标准。尤其是实际操作期间，因不同实验室的检测条件和模式存在差异，试剂说明书内的各类性能无法全部体现。因此，实验室评价试剂时不能只依靠参考品，需要结合常规的血液筛查结果，以判定试剂的均一性、稳定性和适用性，进而选择和自己实验室相符的试剂，确保实验室检测质量。

综上所述，和促凝血样本相比，酶联免疫吸附实验中采取抗凝血样本检测HBs Ag可能产生漏检的情况，建议留取促凝血样本开展检测，以确保检测结果的准确度。

参考文献:

[1]孙俊艳,何成涛,刘海波,等.分析前因素对血液乙肝表面抗原检测的影响[J].临床检验杂志,2021,39(6):470-471,480.

[2]马红,张珊珊,何美香,等.抗凝与非抗凝血液标本对4项传染性指标酶联免疫吸附试验影响的研究[J].中国医药科学,2022,12(9):146-148,179.

[5]张春芳.抗凝与非抗凝血标本对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响[J].实用心脑肺血管病杂志,2012,20(6):1014-1015.

[9]刘丽辉.不同标本及处理方式对微柱凝胶卡式法交叉配血试验结果的影响分析[J].中外女性健康研究,2019(22):100,118.

[11]仁青道吉.对不同血液标本处理方式对其临床生化检验结果的影响进行研究[J].中西医结合心血管病电子杂志,2020,8(8):100,127.

[12]杨荣.酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析[J].临床医药文献电子杂志,2018,5(85):75.

[13]陆国伟,陈群芳,彭俊云,等.酶联免疫吸附试验检测中应用不同抗凝剂的结果分析[J].深圳中西医结合杂志,2019,29(9):90-91.

[14]孙金玲.EDTA-K2抗凝标本Rh血型抗原检测研究[J].中西医结合心血管病电子杂志,2020,8(18):105.

[17]宋为娟,葛秋霞,张巧娣,等.EDTA-K2抗凝管用于溶血标本胰岛素测定的价值[J].江苏医药,2019,45(5):470-473.

[18]李丽萍.血液标本不同处理方式对临床生化检验结果的影响[J].医学美学美容,2021,30(6):111.