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健脾利湿和胃膏中白芍、丹参和黄柏的鉴别方法

2020-06-11 508 上传者：管理员

摘要：目的：建立健脾利湿和胃膏中白芍、丹参和黄柏的鉴别方法。方法：采用薄层色谱法鉴别健脾利湿和胃膏中的白芍、丹参和黄柏三种主药。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰。结论：薄层色谱鉴别方法简便准确，专属性、重现性好，可用于鉴别健脾利湿和胃膏中的白芍、丹参和黄柏。

关键词：
中医药
中药复方膏剂
健脾利湿和胃膏
薄层色谱法
鉴别
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健脾利湿和胃膏是医院自制膏方，由白芍、党参、当归、陈皮、黄柏、佛手，鸡内金、丹参、薏苡仁、炒白扁豆、神曲、山药、茯苓、桂枝等三十余味药组成的中药复方膏剂，具有健脾和胃、利湿安神、补气行血的功效。本膏方针对现代人生活节奏快、生活工作压力大、饮食不节、缺少锻炼的亚健康状况制定方药，主要通过改善身体脾胃的运化功能，充盈精、气、血等物质基础，修复脏腑功能，以达到祛湿、清热、健脾养胃、补益心肺，调肝固肾之功，使患者温养脾胃，纾解内湿、调畅气机、行气止痛、补益气血、强筋健体，从而得以顺利恢复健康。临床上适用于肢体困倦、食欲不振、腹痛、腹胀、腰膝酸痛、头晕耳鸣、头胀、失眠、月经不调等证属脾虚困湿、气滞血瘀、肾精亏虚的亚健康状况人群。薄层色谱法是鉴别中药材复方制剂中各成分最简单准确的定性方法，应用非常广泛[1,2,3,4,5]。为了简便、有效地控制药品的质量，提高药品的质量标准，参照《中国药典》2015年版一部相关方法[6]，利用薄层色谱法鉴别了处方中的主药白芍、丹参和黄柏，结果准确，方法简单，建立了健脾利湿和胃膏的质量控制标准。

1、仪器与材料

1.1仪器：

REPROSTAR-Ⅱ型薄层摄像仪（瑞士：CAMAG);KQ-300DE型超声波清洗器：功率300W，频率40kHz（昆山超声波仪器有限公司）；CP225D型电子天平（赛多利斯）。

1.2试药：

健脾利湿和胃膏3批（由广东省佛山市禅城区中心医院生产，批号：20190310、20190420、20190508，规格：50g/瓶）；对照品、对照药材均购买于中国药品生物制品检定所：芍药苷对照品（110736-201943）、丹参对照药材（120923-200610）、黄柏对照药材（121510-200904）、丹参酮ⅡA对照品（110766-201520）、盐酸小檗碱对照品（110713-201814）；其余试剂均为分析纯。

1.3薄层板采用自制和预制板：

自制硅胶G板，规格为10cm×20cm，厚0.5mm（硅胶G产自青岛市市北区海化干燥剂厂）；三种预制板分别是：(1)MERCKG板：Geldesilice60;(2)青岛硅胶G板：青岛海洋化工厂生产；(3)烟台硅胶G板：烟台市化学工业研究所生产。

2、方法与结果

2.1白芍的TLC鉴别

2.1.1供试品溶液的制备：

称取5g样品，加入10mL乙醇，超声溶解20min，滤过，水浴中蒸干滤液，加乙醇1mL溶解残渣，即得供试品溶液。

2.1.2对照品溶液的制备：

精密称取10mg芍药苷对照品，加乙醇适量溶解定容至10mL，制成每1mL含1mg的对照品溶液。

2.1.3阴性对照溶液的制备：

称取5g缺白芍阴性对照，按照2.1.1法同法制成阴性对照溶液。

2.1.4鉴别：

依照2015年版《中国药典》四部（通则0502）薄层色谱法试验[7]，分别吸取供试品、对照品、阴性对照溶液各5～10μL点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，用三氯甲烷乙酸乙酯甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）上行展开，取出并晾干，用5%香草醛硫酸溶液喷雾显色，于105℃加热使斑点显色清晰。

2.1.5结论：

于日光下观察，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。阴性对照无相应的斑点干扰。见图1。

图1白芍的TLC图

2.2.7耐用性考察：

试验中分别采用实验室自制板和商业预制板两种薄层板按拟定方法鉴别，结果显示用自制板或预制板的展开结果基本一致；并分别在两种温度（4～10℃和室温）、两种湿度（20%和75%）的条件下按拟定方法鉴别，结果显示在高湿低湿、常温低温的条件下的展开结果基本一致。试验中还考察了5、10、20μL的点样量，结果显示以5～10μL的斑点最清晰，无拖尾现象。

2.2丹参的TLC鉴别

2.2.1供试品溶液的制备：

称取5g样品，加入20mL乙醚，水浴回流提取1h，静置放冷后离心，水浴蒸干上清液，加乙酸乙酯1mL溶解残渣，即得供试品溶液

2.2.2对照药材溶液的制备：

称取1g丹参对照药材，按照2.2.1同法制备即得对照药材溶液。

2.2.3对照品溶液的制备：

精密称取10mg丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯适量溶解定容至5mL，制成每1mL含2mg的对照品溶液。

2.2.4阴性对照溶液的制备：

称取5g缺丹参阴性对照，按照2.2.1同法制备即得阴性对照溶液。

2.2.5鉴别：

依照2015年版《中国药典》四部（通则0502）薄层色谱法试验[7]，分别吸取20μL供试品溶液、对照药材和对照品溶液各10μL点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，用石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）上行展开，取出并晾干。

2.2.6结论：

于日光下观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。

阴性对照无相应的斑点干扰。见图2。

图2丹参的TLC图

2.2.7耐用性考察：

2.3黄柏的TLC鉴别

2.3.1供试品溶液的制备：

称取5g样品，加入20mL的1%醋酸甲醇溶液，60℃水浴中超声溶解20min，滤过，取滤液水浴加热浓缩至2mL即得供试品溶液。

2.3.2对照药材溶液的制备：

称取0.1g黄柏对照药材，按照2.3.1同法制备即得对照药材溶液。

2.3.3对照品溶液的制备：

精密称取10mg盐酸小檗碱对照品，加入1%醋酸甲醇溶液适量溶解并定容至20mL，制成每1mL含0.5mg的对照品溶液。

2.3.4阴性对照溶液的制备：

称缺5g缺黄柏阴性对照，按照2.3.1同法制备即得阴性对照溶液。

2.3.5鉴别：

依照2015年版《中国药典》四部（通则0502）薄层色谱法试验[7]，分别吸取供试品、对照品、阴性对照溶液各1～2μL，点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，用甲苯-乙酸乙酯一甲醇一异丙醇-浓氨试液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）为展开剂，展开缸一侧槽中加入展开剂，另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，共同预平衡15min；上行展开；展距10cm。

2.3.6结论：

于紫外光灯（365nm）下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性无相应的斑点干扰。见图3。

图3黄柏的TLC图

2.3.7耐用性考察：

试验中分别采用实验室自制板和商业预制板两种薄层板按拟定方法鉴别，结果显示用自制板或预制板的展开结果基本一致；并分别在两种温度（4～10℃和室温）、两种湿度（20%和75%）的条件下按拟定方法鉴别，结果显示在高湿低湿、常温低温的条件下的展开结果基本一致。试验中还考察了1、2、5、10、的点样量，结果显示以1～2μL的斑点最清晰，分离效果最好，无拖尾现象。

3、讨论

3.1薄层色谱鉴别法是中成药中中药成分鉴别最常用的方法，专属性强，方法简单，结果直观明了。王刚等[8,9,10,11,12]制定中成药标准均采用薄层色谱鉴别法进行药材的鉴定。

3.2丹参的薄层鉴别实验中曾考察了用稀乙醇提取样品溶液，同法制备丹参对照药材、丹参酮ⅡA、丹酚酸B为对照溶液，用三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4）上行展开约4cm，取出并晾干，再用石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）上行展开约8cm，取出并晾干，分别在日光及紫外灯（365nm）下检视，结果显示样品中丹酚酸B和丹参酮ⅡA的斑点不明显[13,14,15]。试验中还考察了乙醚超声萃取和加热回流的提取方法，结果表明以加热回流的提取方法斑点最明显。

3.3黄柏的薄层鉴别方法是参考《中国药典中药材薄层色谱彩色图集》等文献中黄柏药材项下方法修改而成的。试验中曾使用三氯甲烷-甲醇-水（30:15:4）的下层溶液为展开剂，置氨然气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，结果表明斑点分离效果不理想；还考察了浓氨试液不同加入方式对展开效果的影响，结果表明以展开缸一侧槽中加入展开剂，另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，共同预平衡15min，展距10cm最为合适[16,17,18]。

3.4文中所拟定鉴别健脾利湿和胃膏中的主药白芍、丹参和黄柏的薄层色谱法，方法操作简便、分离度高、专属性强、重现性好，可以有效控制健脾利湿和胃膏的内在质量。

参考文献：

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