健脾固肾颗粒原方系汕头市中医医院糖尿病专科“从脾胃论治消渴病”理论衍生的临床验方，由麸炒白术、酒萸肉、太子参、黄芪、粉葛、丹参等十二味药物组成，具有健脾益肺补肾、养阴生津的功效，临床用于气阴两虚所致的消渴病[1]。该方在临床实践中展现出显著的疗效，但传统的汤剂存在煎煮、携带、使用不便等缺点，根据《医疗机构应用传统工艺配制中药制剂实施备案管理》[2]的相关规定及患者实际需求，故采用传统工艺将此配方制成颗粒剂，不仅能够完整保留汤剂的药效特点，更有便携易保存、服用方便等优点。本研究通过考察该方的提取工艺、成型工艺，建立制剂成品的质量标准，以期为临床提供一种治疗气阴两虚型糖尿病的可控、有效的中药制剂。

1、仪器与试药

1.1仪器

TC6K型电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；DC-NSG-30型多功能提取浓缩机组（上海达程实验设备有限公司）；Waters e2695型高效液相色谱仪（美国沃特世公司）；Heidolph旋转蒸发仪（海道尔夫仪器设备（上海）有限公司）；BPG-9070A型鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；STREA-1流化床（瑞士NIROAEROMATIC）。

1.2试药

麸炒白术、酒萸肉、太子参、黄芪、粉葛、丹参、当归、山药片、酒女贞子、炙甘草、陈皮、黄柏均购自广州健泽药业有限公司；莫诺苷对照品（批号：RDD-MO271908031）购自成都瑞芬思生物科技有限公司；白术对照药材（批号：120925-202013）、女贞子对照药材（批号：121041-201905）、黄柏对照药材（批号：121510-201606）、马钱苷对照品（批号：11640-201808），均购自中国食品药品检定研究院；糊精（批号：211007）购自东莞市东岳葡萄糖厂有限公司；健脾固肾颗粒中试样品（批号：20211201、20211202、20211203），由广东在田药业股份有限公司生产。乙腈等HPLC所用试剂均为色谱纯（德国Merck公司）；水为屈臣氏蒸馏水；其他试剂均为分析纯（广州化学试剂厂）。

2、方法与结果

2.1提取工艺的优选

2.1.1样品的制备

按处方比例称取饮片205 g，按实验设计的方法进行提取，过滤，滤液减压浓缩，200目筛滤过，转移至250 m L量瓶，加水至刻度，摇匀，即得。

2.1.2莫诺苷和马钱苷含量测定

2.1.2. 1色谱条件[3]

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5µm)；以乙腈为流动相A，以0.3%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱参数如表1所示；柱温：25℃；流速：1 m L/min；波长：240 nm。

2.1.2.2对照品溶液的制备

精密称取莫诺苷和马钱苷对照品适量，加甲醇制成每1 m L含莫诺苷206.8μg和马钱苷211.2μg的对照品储备溶液。精密吸取对照品储备溶液0.8 m L，置2 m L量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成每1 m L含莫诺苷82.72μg和马钱苷84.48μg的对照品溶液，备用。

2.1.2.3供试品溶液的制备

精密移取“2.1.1”项下浓缩液4 m L，置25 m L量瓶中，加入80%甲醇约18m L，超声（功率120 W，频率40 k Hz）处理30 min，取出，自然冷却至室温，加80%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.2.4线性关系考察

分别精密吸取莫诺苷和马钱苷混合对照品储备溶液1、2、3、5、7 m L，置10 m L容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，分别制成每1 m L含有莫诺苷20.68、41.36、62.04、103.40,144.76μg和马钱苷21.12、42.24、63.36、105.60、147.84μg的对照品溶液。分别吸取上述莫诺苷对照品溶液和马钱苷对照品溶液各10μL按上述条件进样，测得峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得标准曲线的回归方程为Y莫诺苷=14906X莫诺苷+930.33,r=0.9994;Y马钱苷=14699X马钱苷+55788,r=0.9992。表明莫诺苷和马钱苷分别在浓度范围20.68～144.76μg/m L,21.12～147.84μg/m L之间范围内线性关系良好，见图1、图2。

2.1.2.5测定方法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，测定，计算莫诺苷和马钱苷的含量。

2.1.2.6阴性对照溶液的制备及结果考察

按处方比例，称取除酒萸肉外的所有药材，按“2.1.2.3”所述方法制备阴性对照溶液。照“2.1.2.5”所述方法检测，结果显示：阴性对照溶液在对应于莫诺苷和马钱苷的检测位置没有吸收响应，证实了配方中其他药味对本测定没有造成干扰。

2.1.3正交试验设计优选提取工艺

采用正交设计法，以供试品溶液中莫诺苷、马钱苷含量和干膏得率为评价指标，选用3因素3水平按正交表L9(34）进行正交试验，考察提取次数、加水量和提取时间，筛选最佳提取工艺[4-5]。提取工艺正交试验结果见表2，方差分析见表3。由表2、表3的直观分析可知，各因素主次影响为：提取次数（A）>加水量（B）>提取时间（D）。方差分析表明，提取次数、加水量和煎煮时间这三个参数的变化对试验结果均无统计学意义上的显著影响，最佳工艺组合为A3B3D1。综合考虑生产周期、节能等综合因素，选择提取工艺为A2B1D1，即加水提取二次，每次8倍量水，每次提取1 h。

表1 梯度洗脱参数

图1 莫诺苷标准曲线

图2 马钱苷标准曲线

2.1.4提取工艺验证结果

按处方比列，称取饮片3份，每份205 g，按照优选的最佳工艺条件提取，滤过，减压浓缩，并定容至250 m L，并按上述方法计算干膏得率及莫诺苷和马钱苷含量，计算综合评分值（见表4）。结果显示，三次平行试验的综合评分的平均值为96.79，与正交试验优选结果差异不大，提示拟定的提取工艺条件稳定可行。

2.2浓缩工艺的研究

以提取液中莫诺苷和马钱苷为指标成分，分别置旋转蒸发仪中减压浓缩（浓缩条件为：-0.08～-0.06Mpa;55～85℃），分别浓缩至相对密度为1.10、1.15(80℃），计算浓缩过程指标成分的保留率，结果见表5。根据研究结果，本品提取液的浓缩选择减压浓缩（浓缩条件为：-0.08～-0.06 Mpa;55～85℃），相对密度为1.10～1.15(80℃）。

表2 提取工艺试验结果

表3 方差分析表

表4 提取工艺验证结果

表5 不同浓缩方法对莫诺苷和马钱苷的保留率的影响

2.3成型工艺的研究

2.3.1辅料用量的考察

考虑到本制剂的应用人群为糖尿病患者和糊精在喷雾制粒工艺的适用性，因此选择糊精作为填充剂。结合前期固形物得率和日服用量，考察不同料辅比对颗粒成型性的影响，制粒条件为开启程序（控制进风温度148～158℃，出风温度30～58℃），使物料在流化床内呈充分沸腾状态，当物料加热至65℃时开启雾化器，喷入浓缩液制粒，结果如表6。结果显示，料辅比为1:0.8～1:1.5时，颗粒均具良好成型性。

2.3.2制粒工艺参数的考察

以颗粒的成型性为评价指标，采用单因素比较法，对影响一步制粒的主要工艺因素浸膏相对密度、喷雾速度、雾化压力、进风温度、药液温度进行考察[6]，结果见表7～11。

2.3.3制粒工艺验证

按制粒工艺参数的考察结果，拟定制粒工艺并进行验证：称取相对密度为1.12(80℃）的浓缩液、糊精，先将糊精置于流化床底部，开动鼓风机送入热风，控制进风温度150～160℃，使糊精预热达到预定温度时，固定喷雾速度为每千克糊精喷入浸膏粉30g/min，雾化压力为2～3 bar，喷入药液（药液温度保持70～80℃），开始喷雾制粒。喷雾制粒完成后，在物料干燥温度下继续使颗粒流化干燥至含水量不超过6%，停机出料，整粒，收集10～80目之间的颗粒为合格，其余为不合格颗粒，计算颗粒成型率，结果见表12。结果显示，颗粒成型率平均为88.97%，水分平均含量为3.84%，制成的颗粒大小均匀，松实适宜，流动性好，颗粒间色差小，说明该工艺稳定可靠。

表6 辅料用量考察

表7 浸膏相对密度考察

表8 喷雾速度的考察

表9 雾化压力的考察

表1 0 进风温度的考察

表1 1 药液温度的考察

表1 2 一步制粒工艺验证

表1 3 健脾固肾颗粒三批中试结果

2.4中试试验

按最优提取工艺和制粒工艺进行3批中试试验（表13）。结果显示，3批中试产品的成品率接近，确证了优选配制工艺稳定可行，能满足工业化生产一般要求。

2.5质量标准的研究

2.5.1麸炒白术的薄层色谱鉴别

取本品8 g，加水50 m L使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次25 m L，合并乙醚液（水液备用），蒸干，残渣加甲醇1 m L使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材1 g，加水100 m L，微沸30 min，滤过，滤液放冷，同法制成对照药材溶液。再取除麸炒白术外处方比例的其余中药，按处方工艺制备麸炒白术阴性样品。按照薄层色谱法（《中国药典》四部通则0502）试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（9:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热2～3 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果见图3，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰。

2.5.2酒女贞子的薄层色谱鉴别

取“2.5.1”项下水液，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次25 m L，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1m L使溶解，作为供试品溶液。另取女贞子对照药材1 g，加水100 m L，微沸30 min，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。再取除酒女贞子外处方比例的其余中药，按处方工艺制备酒女贞子阴性样品。按照薄层色谱法（《中国药典》四部通则0502）试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:7:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液。结果见图4，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。

2.5.3黄柏的薄层色谱鉴别

取本品1 g，加甲醇10 m L，超声处理30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1 g，加甲醇20 m L，同法制成对照药材溶液。再取除黄柏外处方比例的其余中药，按处方工艺制备黄柏阴性样品。按照薄层色谱法（《中国药典》四部通则0502）试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各2μL、对照药材溶液1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，置用浓氨试液饱和的展开缸内预饱和30 min，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（6:3:1.5:1.5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果见图5，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。

通过上述研究，证明本制剂成品中采用薄层色谱法鉴别麸炒白术、酒女贞子、黄柏切实可行。

图3 麸炒白术的薄层图

图4 酒女贞子的薄层图

图5 黄柏的薄层图

3、讨论

健脾固肾方是源于汕头市中医医院糖尿病专科“从脾胃论治消渴病”理论衍生的临床验方，临床上以中药汤剂应用为主。由于糖尿病为慢性病，患者往往需要长期服药，中药汤剂虽疗效确切，但煎煮不便，不利于患者长期坚持服用。本研究通过考察健脾固肾方的最优提取工艺和颗粒成型工艺，最大程度地还原汤剂煎煮过程，使有效成分既与汤剂相近，又方便患者携带服用，有利于中药特色制剂的临床推广应用。

药效成分提取是保证颗粒剂疗效的前提和关键环节。现代药理研究显示，健脾固肾方君药山茱萸中的莫诺苷、马钱苷等环烯醚萜成分是其抗炎、抗氧化、调节血脂、改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗、延缓糖尿病肾病的发生等药理作用的主要有效成分[7-8]。因此，本研究选择正交试验设计，以莫诺苷、马钱苷和干浸膏率作为考察指标，综合考察健脾固肾方提取次数、加水量和提取时间，优选出最佳提取工艺。结果显示，加水提取二次，每次8倍量水，每次提取1 h，即可充分提取处方的主要成分。

喷雾制粒技术在中药制剂领域已得到广泛应用，其将混合、制粒、干燥等关键步骤集成于单一设备中，显著提高了生产效率和操作的可控性。该技术制备出的颗粒松脆、粒度均匀、水分可控性强，能较好地保证制剂的质量[9]。本研究通过考察喷雾制粒过程中辅料用量、浸膏相对密度、喷雾速度、雾化压力、进风温度、药液温度等因素进行优选，确定了最佳的喷雾制粒工艺；并以优选配制工艺进行3批中试生产，以实际成品率为评价指标，证明了该工艺稳定可行，适合工业化生产。

同时，本研究建立了健脾固肾颗粒质量标准，通过运用TLC法能清晰鉴别出主要药味麸炒白术、酒女贞子、黄柏的特征斑点，重复性好，结果准确可靠，为后续健脾固肾颗粒的质量监控与标准化生产提供了良好的理论基础。未来，本课题组将采用包括高效液相色谱（HPLC）在内的前沿分析技术，根据方剂“君臣佐使”的原则，对健脾固肾颗粒的指标性成分进行更精确分析，建立更全面的质量控制体系，从而进一步提升本制剂的安全性与治疗效能。

前期临床实践已充分验证了健脾固肾方的有效性。以此为基础，本课题组在致力于提升健脾固肾颗粒质量稳定性的同时，对本制剂进行更深层次的研究——即深入探究健脾固肾颗粒“从脾胃论治消渴病”的作用机制，如其如对胰岛素信号通路、糖脂代谢酶活性的影响，以及对炎症和氧化应激的调控等，从而阐明健脾固肾颗粒治疗糖尿病的科学机理。

参考文献:

[1]陈秋铭,陈超,吴帮泰.从脾胃论治消渴病及临床应用[J].光明中医,2019,34(23):3556-3558.

[2]国家药品监督管理局.关于对医疗机构应用传统工艺配制中药制剂实施备案管理的公告(2018年第19号)[EB/OL].[2018-02-12].

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2020年版四部[S].北京:中国医药科技出版社,2020:29-30.

[4]黄亮,刘志龙,李明晓,等.益气甘露颗粒的工艺研究及质量标准的建立[J].中国处方药,2022,20(5):26-29.

[5]马葆睿,倪健,庞琳诺,等.青紫颗粒制备工艺及质量控制方法研究[J].广东药科大学学报,2021,37(2):18-23.

[6]张桂杰,陈明霞,宋晓莉,等.糖网明目颗粒喷雾制粒工艺参数优选及其颗粒性状研究[J].中国中医药信息杂志,2018,25(1):79-83.

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[8]杨宁.山茱萸环烯醚萜苷提取工艺及降血糖机制初步研究[D].陕西师范大学,2015.

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基金资助:广东省科技创新战略专项(No.STKJ202209074);

文章来源:吴典伟,陈展祥,陈雪婷,等.健脾固肾颗粒的制备工艺和质量标准研究[J].中医康复,2024,1(11):41-46.