随着生活方式和饮食结构变化，高尿酸血症成为继高血压、高血糖、高血脂之后的“第四高”。高尿酸血症是痛风的直接致病因子，WHO/ISH已将高尿酸血症列为心血管疾病、代谢综合征、糖尿病等疾病的独立危险因素和标志物[1-2]。现有药物黄嘌呤氧化酶抑制剂和促尿酸排泄药物如别嘌呤醇、非布司他、苯溴马隆等，能有效降低尿酸值和控制症状，但存在较严重的不良反应如皮疹、胃肠道反应、肝肾损伤等。

传统中药在防治高尿酸血症痛风方面历史悠久。四妙丸出自《成方便读》，临床多用于痹病，收载于历版《中华人民共和国药典》（下文简称《药典》），由黄柏、苍术、薏苡仁、牛膝四味中药组成，药简效宏。现代多中心临床研究[3-5]表明四妙丸对高尿酸血症痛风疗效确切。本课题组动物实验[6]发现其可以通过抑制XOD酶活性，下调尿酸盐转运蛋白1(URAT1）、葡萄糖转运蛋白9(GLUT9）蛋白表达，上调ATP结合盒亚家族G成员2(ABCG2）和有机阴离子转运蛋白1(OAT1）蛋白表达以及抗炎等多种途径发挥治疗作用。

现行《药典》四妙丸仅以小檗碱为质量控制指标，难以客观评价和有效控制产品的质量。故本研究通过UPLC-Q-Exactive-MS技术分析四妙丸体内外化学成分，基于入血成分的潜在药效物质特性，采用网络药理学分析关键的入血成分-靶点通路-复方功效的网络，筛选潜在药效物质候选成分；采用分子对接技术精准分析候选成分的结合模式和作用力，确定四妙丸防治高尿酸血症痛风的关键药效物质，为基于病症模型-生物信息学-计算机辅助设计-药效验证的中药复方精准药效物质研究提供参考。

1、材料与仪器

1.1 实验动物及细胞

SPF级健康SD大鼠，雄性，体质量180～220 g，由珠海百试通生物科技有限公司提供，生产许可证号：SCXK（粤）2020-0051，动物质量合格证号：44822700023234；饲养于中科产业控股（深圳）股份有限公司实验动物房，使用许可证号：SYXK（粤）2021-0263。饲养温度22～24℃，相对湿度50%～60%，并保持12 h/12 h光/暗循环，自由获取标准饮食和水。动物实验经中科产业控股（深圳）有限公司实验动物伦理委员会批准，批准号：202200111。人肾上皮细胞HK2，购自武汉普诺赛公司，在37℃、5%CO2培养箱中培养，于对数生长期进行传代备用。

1.2 药物及试剂

黄柏（产地：辽宁铁岭，批号：210401）、牛膝（产地：河南焦作，批号：201001），安徽聚草中药饮片有限公司；苍术（产地：内蒙鄂尔多斯，批号：20200801），安徽华鼎堂中药饮片科技有限公司；薏苡仁（产地：贵州，批号：201201），广东时珍制药有限公司；花旗松素，宝鸡市辰光生物科技有限公司，批号：HR1693S1；异氟烷，深圳市瑞沃德生命科技有限公司，批号：22101601；甲酸铵，美国Sigma-Aldrich公司，批号：70221；氧嗪酸钾，上海迈瑞尔生化科技有限公司，批号：77677190；腺嘌呤、苯溴马隆，上海笛柏生物科技有限公司，批号分别为：MF09、FE19；尿酸，上海麦克林生化科技有限公司，批号：C12931003；甲醇、乙腈，购自美国ThermoFisherScientific公司，色谱级，批号分别为：F23N38206、F22M9N202；尿酸盐转运蛋白1(URAT1），美国Affinity Biosciences公司，批号：DF12340;β-actin（批号：18C03A27）、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗（批号：BST17GO4A17G50），美国BosterBiological公司；特超敏ECL化学发光试剂盒，上海碧云天生物技术有限公司，批号：P0018AS;DMEM培养基、澳洲胎牛血清，购自美国Gibco公司，批号分别为：C11995500BT、10099141C。

1.3 主要仪器

UltiMate 3000液相色谱仪、Q Exactive质谱仪，美国Thermo公司；PowerPac Basic凝胶电泳仪，美国Bio-Rad公司；Tanon-5200SF全自动化学发光图像分析系统，上海天能生命科学有限公司；H1850-R冷冻离心机，湘仪离心机仪器有限公司；1-16K高速冷冻离心机，美国Sigma公司；Vortex Mixer QL-866混匀仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；Eppendorf 5305真空浓缩仪，德国Eppendorf公司；SLKO3000-S摇床，美国SCILOGEX公司。

2、方法

2.1 四妙丸提取物制备

黄柏、苍术、薏苡仁、牛膝药材单独破碎为粗颗粒，参考《药典》四妙丸药材配比（2∶1∶2∶1），称取黄柏40 g、苍术20 g、薏苡仁20 g、牛膝40 g，加入15倍水浸泡30 min，回流提取1 h，过滤，滤渣加10倍水回流提取1 h，合并两次滤液，70℃减压浓缩至1 g·mL-1，备用。

2.2 急性高尿酸血症大鼠模型的建立[7]及含药血清制备

SD大鼠适应性喂养1周，随机分为正常组和高尿酸血症模型组。高尿酸血症大鼠模型的制备采用氧嗪酸钾-腺嘌呤联合造模，以模型组血清尿酸（SUA）明显升高（P<0.05）作为造模成功的依据。模型组灌胃腺嘌呤50 mg·kg-1+氧嗪酸钾1.0 g·kg-1造模；正常组给予同体积相应溶剂（0.5%羧甲基纤维素钠水溶液），每日1次，造模14 d后，模型复制成功。高尿酸血症大鼠于第14天造模成功后1 h，灌胃给予四妙丸提取物（6.48g·kg-1，按生药量计），连续给药3d，正常组给予蒸馏水。末次给药后1 h,4%～5%异氟烷诱导麻醉，眼眶静脉丛采血，4℃冰箱静置约2 h，以4℃、3 000×g离心10 min，分离血清，同组血清合并（每只大鼠50μL），震荡混匀60 s,-80℃冻存，待测。

2.3 供试品制备

精密移取空白组血清及含药组血清200μL置于2 mL离心管中，按体积比1∶4加入甲醇，振荡60 s;4℃条件下，以12 000×g高速离心10 min，取上清液，37℃氮气吹干；加200μL甲醇复溶，0.22μm过滤，得空白血清及含药血清待测样本。同法制备四妙丸提取物供试品。

2.4 UPLC-Q-Exactive-MS检测条件

色谱条件：ACQUITYUPLC®HSST3色谱柱（2.1mm×150mm,1.8μm）；正离子模式流动相A为0.1%甲酸水，B为0.1%甲酸乙腈；负离子模式流动相C为5 mmol甲酸胺水，D为乙腈。梯度洗脱：0～1 min,2%B/D;1～9min,2%～50%B/D;9～12min,50%～98%B/D;12～13.5min,98%B/D;13.5～14min,98%～2%B/D；柱温：25℃；流速：0.25 mL·min-1。

质谱条件：使用Thermo Q Exactive，电喷雾离子源（ESI），正/负离子电离模式，正离子喷雾电压3.50 kV，负离子喷雾电压2.50 kV，鞘气30 arb，辅助气10 arb。毛细管温度325℃，以分辨率70 000进行全扫描，扫描范围81～1 000,HCD二级裂解，碰撞电压30 eV。

2.5 四妙丸调控高尿酸血症痛风的“入血成分-靶点”网络构建及通路分析

血中移行成分是复方可能的活性成分，故以四妙丸入血成分为潜在活性成分，通过TCMSP、SWISS、STITCH等数据库对潜在活性成分进行检索，获得四妙丸候选活性靶点；在GeneCards、CTD等数据库中以“Hyperuricemia”“gout”为关键词进行检索，得高尿酸血症及痛风的治疗靶点。将四妙丸候选活性靶点与疾病治疗靶点取交集，得四妙丸抗高尿酸血症痛风潜在活性靶点。整理四妙丸活性成分与高尿酸血症痛风活性靶点的作用关系，导入Cytoscape 3.9.0构建“入血成分-靶点”网络。

将四妙丸抗高尿酸血症痛风的潜在靶点进行GO(Gene ontology）功能和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes）通路富集分析。

2.6 分子对接与实验验证

通过PubChem下载活性成分；通过PDB和AlphaFoldproteinstructuredatabase数据库下载URAT1(AF-Q96S37-F1）、OAT1(AF-Q4U2R8-F1）、ABCG2(6eti）、XDH(1n5x）、RELA(6yp3）、TLR4(5ijb）、PTGS2(4cox）、CASP3(1nms）、ESR1(1err）、INS(1jk8）、MAPK14(6sfo）、PARG(1k74）的晶体结构；采用LigPrep模块进行小分子配体处理，选择Epik方法产生pH 7.0±2.0所有的构象；应用薛定谔分子对接软件Proteinpreparationwizard模块进行蛋白准备，加氢，加电荷，删掉水分子和能量优化；采用Receptor grid generion创建活性口袋，以晶体结构中心或原配体为中心生成对接盒子文件，盒子大小设为2 nm(20Å）；Ligand Docking模块进行分子对接，用prime MM-GBSA进行结合自由能计算。

根据分子对接结果，选择未见药效报道的花旗松素成分进行实验验证，收集对数生长期的人肾上皮细胞HK2细胞，以每孔3×106个的密度接种于6孔板，贴壁后按分组情况给药处理48 h。实验分为正常细胞组、模型组（尿酸终浓度2 mmol·L-1）、阳性对照组（同时给予尿酸终浓度2mmol·L-1+苯溴马隆终浓度25μmol·L-1）及花旗松素高（同时给予尿酸终浓度2mmol·L-1+花旗松素终浓度50μmol·L-1）、中（同时给予尿酸终浓度2 mmol·L-1+花旗松素终浓度10μmol·L-1）、低（同时给予尿酸终浓度2 mmol·L-1+花旗松素终浓度2μmol·L-1）剂量组，共培养48h，收集总蛋白。

采用RIPA冰上裂解细胞30 min，以4℃、13 201×g离心10min，取上清液，经SDS-PAGE电泳，转至PVDF膜，以5%脱脂牛奶封闭2 h;TBST清洗3次；加入一抗URAT1(1∶6000）及β-actin(1∶10000),4℃下孵育过夜；TBST清洗3次，加入辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗，室温下孵育1 h;TBST清洗3次，ECL发光显影。采用ImageJ软件测定各蛋白条带灰度，以各组URAT1/β-actin灰度比值与正常组URAT1/β-actin灰度比值比较，并进行统计分析。

3、结果

3.1 急性高尿酸血症大鼠模型的建立

实验周期内，大鼠无死亡情况。正常组大鼠精神状态良好，毛色正常，活动自如，反应快。随着造模时间延长，高尿酸血症模型大鼠出现脱毛的现象。见图1，模型组在造模期间内血尿酸值稳定上升，造模两周后，与正常组比较差异有统计学意义（P<0.001）。在模型成功基础上，可进行下一步血中移行成分研究。

图1 急性高尿酸血症造模过程血尿酸值变化情况（±s,n=6)

3.2 基于高尿酸血症大鼠模型含药血清非靶向化学成分的UPLC-Q-Exactive-MS分析

基于“2.4”项下色谱和质谱条件，对四妙丸及高尿酸血症大鼠含药血清供试品进行化学成分定性分析，通过Proteowizard软件将原始数据转换成mzXML格式，利用R的XCMS程序包进行峰识别（Peaks Identification）、峰过滤（Peaks Filtration）、峰对齐（Peaks Alignment），得到质核比（MasstoChargeRatio,m/z）、保留时间（Retention Time）等信息数据矩阵；根据精确分子量进行确认（误差≤30ppm）；采用HumanMetabolome Database、METLIN、Massbank、LipidMaps、mzClound数据库对MS/MS碎片模式进行确认，获得高尿酸血症大鼠四妙丸含药血清非靶向化学成分数据，正负总离子流图见图2。

通过提取母离子，比较保留时间和质谱裂解规律，四妙丸体外共鉴定了89个化学成分，高尿酸模型大鼠含药血清共鉴定出74个原型移行成分（见表1），包括生物碱类（小檗碱、黄连碱、木兰花碱、黄柏碱、巴马汀），有机酸类（咖啡酸、绿原酸、阿魏酸、油酸），黄酮类（儿茶素、表儿茶素、圣草素、黄柏苷、槲皮素、芒柄花黄素），萜类（白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术苷A、苍术苷B、柠檬苦素）等。这些成分作为病理模型的血中移行成分，是四秒丸防止高尿酸血症痛风的潜在药效物质，故作为网络药理学研究的候选成分，进行后续网络药理学研究。

图2 四妙丸及高尿酸血症大鼠含药血清正负离子流图

表1 四妙丸及高尿酸血症大鼠含药血清中共有成分鉴定信息（74个）

3.3 四妙丸调控高尿酸血症痛风“入血成分-靶点”网络构建及GO功能、KEGG通路富集

四妙丸74个血中移行成分共匹配了1 027个活性靶点。疾病靶点共筛选了364个高尿酸血症相关靶点及571个痛风相关靶点。把四妙丸活性靶点与高尿酸血症靶点及痛风靶点重叠制韦恩图，如图3-A所示，入血成分分别匹配116个高尿酸靶点和173痛风靶点。把活性成分及相应的治疗靶点导入Cytoscape构建四妙丸抗高尿酸血症痛风“入血成分-靶点”网络（图3-B），通过网络拓扑参数筛选（DC≥2×median DC,BC≥2×median BC,CC≥median CC），构建四妙方抗高尿酸血症的关键子网络（图3-C）。发现NOS2、ESR1、PTGS2、F2、DPP4、PPARG、NOS3、PTGS1、AR、IL2、VEGFA、AKR1B1、ABCG2、CCNA2、ABCB1、OAT1、CASP3、ADRB2、NCOA2、TTR、MAPK14、TLR2、MAOA、IL6、MAPT、JUN、HMGCR、NFE2L2、ABCC1、OAT3、RARB、NFKB1、XDH、ADH1B、TUBB1、TNFRSF1A、RELA是四妙丸调控高尿酸血症、痛风的关键靶点；槲皮素、丹皮酚、琥珀酸、芒柄花黄素、阿魏酸、异甘草素、黄芩素、香豆酸、山柰酚、葛根素、香草酸、柚皮素、肉豆蔻酸、普罗萘尔、黄芩苷、咖啡酸、吴茱萸次碱、丁香酚、黄芪紫云英苷、β-蜕皮甾酮、白屈菜碱、芦丁、异阿魏酸、小檗碱、滨蒿内酯、花旗松素、白屈菜赤碱、绿原酸、巴马亭、儿茶素、4-羟基苯甲酸、木兰花碱、染料木苷、黄柏碱、松柏苷、药根碱、圣草酚、黄连碱、甘草素、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、表儿茶素、新绿原酸是四妙丸调控高尿酸血症痛风靶点的关键活性成分。

四妙丸抗高尿酸血症痛风靶点的GO及KEGG分析结果见图4。入血成分参与调节含氮化合物、脂质及糖的代谢、氧化应激反应、胰岛素分泌、炎症反应、ERK1和ERK2级联反应、MAPK级联反应、PI3K信号传导等生物过程，可通过调节血脂与动脉粥样硬化、凋亡、胰岛素抵抗、AGE-RAGE、TNF、IL-17、PI3K-Akt、MAPK、TLRs、JAK-STAT、NF-κB、NOD样受体信号通路发挥多途径调控高尿酸血症及痛风疾病网络的作用，体现复方多途径调控疾病的特点。

图3 四妙丸调控高尿酸血症痛风靶点的韦恩图（A），“入血成分-靶点”网络（B）及核心网络（C)

图4 四妙丸调控高尿酸血症痛风靶点GO功能富集（A）及KEGG通路富集（B)

3.4 分子对接及Western Blot实验验证

3.4.1 分子对接

四妙丸入血成分与尿酸生成酶（XDH），尿酸转运体（ABCG2、GLUT9、OAT1、URAT1）及炎症靶点（TLR2、TLR4、PTGS2）对接结果见图5。分子对接表明黄芩素、丹皮酚与XDH，黄芩素、花旗松素、圣草酚、（2S）-甘草素、小檗碱、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ与URAT1，黄芩素、芒柄花黄素、花旗松素、圣草酚、（2S）-甘草素、药根碱、巴马汀、小檗碱、原阿片碱、黄柏碱、木兰花碱、黄柏酮、人参皂苷Ro对GLUT9，药根碱对OAT1，黄芩素、芒柄花黄素、花旗松素、圣草酚、（2S）-甘草素、药根碱、巴马汀、小檗碱对ABCG2，芒柄花黄素、花旗松素、圣草酚、（2S）-甘草素、药根碱、巴马汀、小檗碱、原阿片碱、人参皂苷Ro对TLR2，没食子酸对TLR4等对接得分均少于-7；活性成分与活性靶点通过氢键（H-bond）、π-π堆积（π-πstacking）和阳离子-π（cation-π）等相互作用形成良好的结合，是四妙丸防治高尿酸血症痛风的关键药效物质。

图5 四妙丸关键入血成分与尿酸合成酶、尿酸转运体及炎症靶点分子对接得分（A），结合模式（B）及活性结合位点（C)

3.4.2 Western Blot法检测花旗松素对URAT1蛋白表达的影响

通过HK2高尿酸血症体外模型，Western Blot实验发现花旗松素可以明显降低模型细胞URAT1的表达，见图6。与正常组比较，模型组URAT1蛋白表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.001），说明模型复制成功。与模型组比较，阳性药物苯溴马隆及花旗松素高、中、低剂量组均能明显逆转因高尿酸刺激诱导的URAT1蛋白上调（P<0.001），抑制尿酸重吸收。花旗松素调节URAT1蛋白表达相关研究已申请专利，后续将深入研究该成分对高尿酸血症其他靶点的作用。

图6 花旗松素对高尿酸血症HK2细胞模型中尿酸重吸收转运体URAT1表达的影响（±s,n=6)

4、讨论

4.1 基于病症模型的中药复方精准药效物质研究

中医认为中药治病过程是“以偏纠偏”的过程，复方的药效物质因针对的病证不同而变化，这对阐明复方药效物质基础带来巨大挑战。得益于高精度质谱检测技术、结构生物学、生物信息学大数据挖掘、成分与靶标精准对接的计算机辅助药物设计技术的发展，为针对不同病症的中药复方精准药效物质研究提供了有力方法。王喜军[8]在国内率先建立了中药血清药物化学研究方法，已成为研究药效物质的可靠技术。罗国安等[9]认为中药复方作用于机体是一个“干预系统（中药）-应答系统（生物机体）”相互作用整合的生物学过程，干预系统受到应答系统的作用而发生ADME过程，而应答系统受到干预系统的影响而产生效/毒反应，机体所处的病理生理状态对中药ADME具有很大差异。刘建勋团队[10]通过对进入血浆、脑脊液、尿液中化学成分群与类药成分的比对分析，发现同一复方在不同疾病或不同证型状态下体内成分发生明显变化，证明中药复方功效物质与病证相关。故，本研究以高尿酸血症痛风经典模型为基础，探讨基于病症状态下四妙丸的血中移行成分，提高药效物质与病症的关联性；利用病症关联生物信息和靶点，分析疾病模型的入血成分-疾病靶点通路-复方功效三位一体的药效物质网络关系，提高入血成分作为潜在药效物质的功效针对性；针对病症核心靶点（高成药性靶点）如XHD、URAT1采用计算机辅助分子对接技术，进一步精准分析靶点和成分的结合模式和作用力特点，通过药效实验证实其可靠性。本研究突出基于病理状态的中药复方精准药效物质基础研究的思路，提出基于病症模型的入血成分（血清药化技术）-病症相关靶点通路（大数据网络药理学方法）-精准成分靶标相互作用（分子对接）-实验验证的路线，可以更准确地阐释中药复方药效物质基础的科学内涵，为中药质量标准提升和质量控制提供依据。

4.2 色谱及质谱条件优化[11]

本实验过程中对色谱条件及质谱条件进行了考察。为了提高离子化水平，正、负离子模式比较了不同的流动性体系，正离子模式下，比较了甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸水、0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈不同的体系，发现采用0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈体系效果最稳定；同样负离子模式下，发现采用C-5 mmol甲酸胺水，D-乙腈体系效果最好。故确立，正离子模式流动相A-0.1%甲酸水，B-0.1%甲酸乙腈流动相体系；负离子模式流动相C-5 mmol甲酸胺水，D-乙腈流动相体系。正离子喷雾电压3.50 kV，负离子喷雾电压2.50 kV的较低电压更方便检测到药材-制剂-体内成分的共有原型成分。

4.3针对高尿酸血症的四妙丸药效物质探索

中药质量是中药临床疗效的保证，是中药产品的生命线；中药（复方）药效物质研究是阐明中药防治疾病内涵、提高质量控制的关键科学问题。借鉴经典名方药效成分量值传递的质控思想，采用UPLC-Q-ExactiveMS技术鉴定了“药材-制剂-血中移行成分”共有成分74个。通过网络药理学分析，结合高尿酸血症痛风关键成药靶点的对接以及实验验证，首次证实了花旗松素的负向调节URAT1药理效应，为其在高尿酸血症方面的应用提供了科学依据，具有良好的创新性。本研究综合分析表明黄柏碱、小檗碱、药根碱、巴马汀、木兰花碱、黄柏酮、柠檬苦素、苍术素、白术内酯Ⅲ、β-蜕皮甾酮、花旗松素可作为四妙丸防治高尿酸血症痛风的主要药效物质。

君药黄柏最重要的活性物质是生物碱，含量高达4.24%～7.89%[12]，具有明显的抗炎、镇痛、免疫调节等作用。其中小檗碱类成分还可以抑制尿酸生成酶XOD活性，抑制尿酸重吸收转运蛋白GLUT9、URAT1表达，上调尿酸分泌蛋白OAT1/3及ABCG2表达，发挥降尿酸的作用[13-15]；黄柏碱、黄柏酮具有明确的抗炎、缓解急性肾损伤的作用[16-17]；柠檬苦素为萜类化学成分，通过降低iNOS、IL-6、IL-1β等表达及p38 MAPK磷酸化水平发挥抗氧化、抗炎、镇痛的作用[18]。臣药苍术中白术内酯类成分可促进淋巴细胞增殖、促进IL-2、IL-12及INF-γ等免疫相关分子分泌，通过调节Bax/Bcl-2凋亡信号通路，促进Bax、CASP9、CASP3、Cleaved CASP3等表达，抑制Bcl-2表达，发挥抗细胞凋亡的作用[19]。白术内酯Ⅰ可生成白术内酯Ⅲ[20]发挥药效作用。苍术素作为苍术的特征成分，其通过抑制促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及炎性介质iNOS和NF-κB等发挥抗炎、镇痛等作用[21]。天然类固醇成分β-蜕皮甾酮是牛膝的关键药效成分，除具有明显的抗炎、免疫调节作用外，其还通过激活IRS-1/AKT/GLUT4及IRS-1/AKT/GLUT2通路，提高IRS-2表达，发挥降血糖、改善胰岛素抵抗等作用[22-23]。薏苡仁主成分为多糖、油脂、甾醇、多酚类成分[24]，《药典》以甘油三油酸酯作为其功效指标成分，但血液样品仅发现其他非特异成分。

综上，立足刘昌孝院士提出的中药质量标志物“五原则”思想[25]，结合四妙丸血清药化、网络药理、分子对接和实验验证结果，从成分特有性、有效性、可测性及复方配伍环境等综合出发，我们认为黄柏碱、小檗碱、药根碱、巴马汀、木兰花碱、黄柏酮、柠檬苦素、苍术素、白术内酯Ⅲ、β-蜕皮甾酮、花旗松素等可以作为四妙丸防治高尿酸血症痛风的关键药效物质，并可用作四妙丸制剂的标准提升或质量控制的指标；后续将建立四妙丸中相关成分高效快速定量分析方法。

本研究基于高尿酸血症痛风模型探索了四妙丸的血中移行成分，采用网络药理学方法全方位解析方剂入血成分-靶点-通路的关联性；筛选关键的药效物质，采用计算机辅助药物设计方法，以高成药性关键靶点进行分子对接，明确成分与靶点的结合方式和结合能力，精准评价和实验验证与功效密切相关的药效物质，为更精准地阐述四妙丸复方药效物质和质量评价提供了参考。

参考文献:

[3]戴跃龙,白慧颖,窦永起.四妙丸治疗高尿酸血症合并高三酰甘油血症的临床研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2019,17(5):768-769.

[4]水光兴,叶炯,李莎罗,等.四妙丸对高尿酸血症肾病患者肾功能及NLRP3炎症小体活化的影响[J],中国中西医结合肾病杂志,2021,22(10):878-881.

[5]赵向波,赵永凯,李兰英.四妙丸加减治疗急性痛风性关节炎临床研究[J],新中医,2021,53(4):58-60.

[6]梁少瑜,曾永长,李仲秋,等.四妙散及其加减方对高尿酸合并高脂血症大鼠的影响及机理探讨[J].中药新药与临床药理,2016,27(3):347-350.

[7]程雅欣,李佳.高尿酸血症和痛风动物模型及其建立方法的研究进展[J].中国实验动物学报,2023,31(2):251-256.

[8]王喜军.基于临床有效性的中药药效物质基础生物分析体系[J].世界科学技术-中医药现代化,2013,15(1):16-19.

[9]罗国安,梁琼麟,王义明,等中医药系统生物学发展及展望[J].中国天然药物,2009,7(4):242-248.

[10]孟硕,苗兰,林力,等.基于证候表征生物学的中药复方功效物质基础研究思路与方法[J].世界科学技术-中医药现代化,2023,25(3):835-842.

[11]曾永长,梁少瑜,吴俊洪,等.基于UHPLC-ESI-QqQ-MS/MS技术的中药复方新天泰1号多类别多成分质量控制方法研究[J].中草药,2018,49(16):3835-3841.

[12]蓝松.酸性染料比色法测定黄柏中总生物碱的含量[J].广东化工,2018,45(24):37-38,49.

[13]蹇睿,杨敏,郑书林.小檗碱对小鼠痛风性关节炎模型中NLRP3/TLRs的调控作用[J].重庆医科大学学报,2020,45(2):251-256.

[16]姜盈盈,林岳.黄柏碱改善脓毒症大鼠急性肾损伤的作用及机制研究[J].中国中西医结合外科杂志,2019,25(6):882-887.

[17]刘芬.黄柏酮靶向抑制MIF抗炎作用研究[D].北京:北京协和医学院,2016.

[18]尤文挺,王洒,何龙,等.柠檬苦素单体的药理活性研究进展[J].2017,40(1):242-246.

[19]李小芳.白术内酯Ⅲ对人结肠癌HCT-116细胞凋亡的诱导作用研究[D].四川:泸州,西南医科大学,2019.

[20]王小芳,王芳,张亚环,等.白术挥发油中苍术酮氧化反应的动力学研究[J].应用化学,2007,24(3):301.

[23]朱玉霞,孙丽莎,杨矫,等.蜕皮甾酮对2型糖尿病大鼠肝细胞IR S-2蛋白表达的影响[J].山东医药,2014,54(33):10-12.

[24]吴静雨,陈晓凡,徐万爱,等.薏苡仁活性成分研究进展[J].中国中药杂志,2024:1-13.

[25]张铁军,白钢,陈常青,等.基于“五原则”的复方中药质量标志物(Q-marker)研究路径[J].中草药,2018,49(1):1-13.

基金资助:国家自然科学基金项目(81603669); 广东省自然科学基金项目(2021A1515010978､2021A1515012474); 岭南中医药现代化重点专项(2020B1111120003); 深圳市科技计划项目(JCYJ20210324121610029);

文章来源:曾永长,梁少瑜,吴俊洪,等.基于病症模型的经方四妙丸防治高尿酸血症痛风的药效物质探讨[J].中药新药与临床药理,2024,35(08):1152-1162.