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银杏内酯B注射液对ITP患者T细胞亚群、MDSCs免疫失衡影响

2025-03-26 90 上传者：管理员

摘要：目的探究原发免疫性血小板减少症（ITP）患者应用银杏内酯B注射液治疗对T细胞亚群和髓源性抑制细胞（MDSCs）免疫失衡的影响。方法选取2021年12月至2023年12月廊坊市中医医院收治的132例ITP患者作为研究对象，将其随机分为研究组（n=66）和对照组（n=66）。给予对照组利妥昔单抗治疗，给予研究组银杏内酯B注射液治疗，两组治疗周期均为14 d。对比两组疗效；对比两组治疗前后Th1/Th2细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素（IL）-4、IL-10]、MDSCs、Treg/Th17水平；对比两组不良反应发生率。结果研究过程中，对照组3例患者退出研究，研究组1例患者退出研究，最终对照组纳入63例，研究组纳入65例。研究组（95.38%）治疗总有效率高于对照组（74.60%）(P<0.05)。治疗后，两组TNF-α、IFN-γ、Th17均降低（P<0.05）,IL-4、IL-10、MDSCs、Treg和Treg/Th17均升高（P<0.05）；与对照组比较，研究组TNF-α、IFN-γ、Th17水平均降低（P<0.05）,IL-4、IL-10、MDSCs、Treg和Treg/Th17均升高（P<0.05）。与对照组（26.98%）比较，研究组（9.23%）总不良反应发生率降低（P<0.05）。结论应用银杏内酯B注射液治疗ITP患者，可提升患者临床疗效，改善Th1/Th2细胞因子和MDSCs免疫失衡，且不会增加患者不良反应发生率。

关键词：
Th1/Th2细胞因子
原发免疫性血小板减少症
调节性T细胞
银杏内酯B注射液
髓源性抑制细胞
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原发免疫性血小板减少症(primaryimmunethrombocytopenia,ITP)是一种以血小板损伤及造血功能下降为主要特征的自身免疫病,该病的发生与抗血小板抗体､巨核细胞以及T淋巴细胞均有关,这些因素均可导致血小板损伤,且各发病机制存在差异[1]｡已有研究发现,ITP患者体内产生的自身抗体与血小板膜表面的特定抗原发生免疫反应,促进血小板的损伤[2]｡越来越多的研究显示,ITP与调控免疫系统的失调密切相关,对于初次确诊的ITP患者,单纯应用糖皮质激素药物治疗可取得较好的近期疗效,但仍有较多的患者会出现药物依赖性或严重不良反应,进而发展为难治性ITP[3]｡对于一些常规治疗无效或耐药的ITP患者而言,利妥昔单抗是一种有效的治疗选择,但该药物易导致患者出现不良反应,进而降低患者的服药依从性[4]｡银杏内酯B是一种中药提取物,已有研究证实其在缺血性脑卒中､血栓等疾病中的作用,可有效降低血小板激活因子[5],但银杏内酯B注射液在ITP治疗中的研究较少｡基于此,本研究选取ITP患者作为研究对象,分析银杏内酯B注射液的治疗效果及应用价值｡

1、资料与方法

1.1一般资料选取2021年12月至2023年12月廊坊市中医医院收治的ITP患者,共计132例,随机分为研究组和对照组,每组66例｡对照组和研究组相关基线资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),两组具有可比性,详见表1｡患者及家属对本研究方案了解且签署知情同意书,本研究已获得廊坊市中医医院伦理委员会批准(批准号:2021-0606)｡

表1两组患者一般资料(n=66)

1.2纳入标准

(1)符合ITP诊断标准[6]｡①多次化验检查血小板计数减少;②脾脏不增大或仅轻度增大;③骨髓检查巨核细胞数增多或正常,有成熟障碍;④泼尼松或切脾治疗有效､血小板寿命测定缩短｡(2)血小板计数<30×109/L｡(3)临床资料完整｡

1.3排除标准

(1)合并其他免疫病｡(2)合并严重肝､肾功能损害｡(3)合并病毒感染｡(4)既往已接受本研究药物治疗｡

1.4治疗方法

1.4.1对照组给予患者利妥昔单抗(德国罗氏诊断有限公司,国药准字:SJ20160030,规格:500mg/50mL)治疗,静脉滴注100mg/次,1次/周,共4次｡治疗前给予25mg苯海拉明(北京中新药业股份有限公司,国药准字:H13020674,规格:25mg)､5mg地塞米松(湖北美林药业有限公司,国药准字:H42020620,规格:1mL∶5mg)抗过敏处理,均在利妥昔单抗输注前30min给药,每次输注利妥昔单抗前均需使用｡泼尼松(江西国药有限责任公司,国药准字:H12020689,规格:5mg):1mg/(kg·d),4次/d,病情稳定后,逐渐减少用量｡

1.4.2研究组给予患者银杏内酯B注射液[成都百裕制药股份有限公司,国药准字:Z20110035,规格:每支装2mL(含萜类内酯10mg)],静脉滴注20mL银杏内酯B与250mL50g/L葡萄糖液混合液,每日1次｡

1.4.3疗程两组均治疗8周｡

1.5观察指标

1.5.1临床疗效痊愈:治疗后,患者无任何出血表现且血小板计数≥100×109/L;有效:治疗后,患者无任何出血表现且血小板计数≥30×109/L(相较基础水平增加2倍);无效:治疗后,患者未达到上述标准[7]｡总有效率=痊愈率+有效率｡

1.5.2Th1/Th2细胞因子治疗前后采集患者空腹肘静脉血5mL,3500r/min离心10min(离心半径为7.5cm)｡取上层血清,采用美国Biorad酶标仪测定肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNFα)､干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)､白细胞介素(interleukin,IL)-4和IL-10因子水平｡

1.5.3髓源性抑制细胞(myeloidsuppressorcells,MDSCs)治疗前后采集空腹肘静脉血5mL,给予肝素抗凝,以3000r/min离心6min(离心半径为15cm),离心完毕后分离上层液并丢弃｡将PBS洗涤液提前冷处理,以辅助细胞沉淀,加入500μL结合缓冲液重悬细胞,再依次加入AnnexinV-FITC与PI各5μL,混匀后静置10min｡采用流式细胞仪对MDSCs进行检测,并在光学显微镜下观察,计算MDSCs比例｡

1.5.4Treg/Th17细胞比例Treg细胞标记:将外周血单个核细胞与单克隆抗体混合,同时将其置于避光环境内孵育10min,将固定剂加入后与叉头框蛋白质3(forkheadboxprotein3,FOXP3)单克隆抗体混匀,并将其置于避光环境内孵育,30min后将上清液弃除并将PBS缓冲液加入｡Th17细胞标记:将外周血单个核细胞置于条件为37℃､5%CO2中孵育,5h后离心并将上清液弃除,将固定剂加入并于Th17单抗体中混匀,同时将其置于避光环境下,孵育30min后行离心操作并将PBS缓冲液加入｡采用流式细胞仪检测标本中Treg､Th17含量,并计算Treg/Th17细胞比例｡

1.5.5不良反应记录两组患者治疗期间发热､寒战､头痛､恶心/呕吐情况｡

1.6统计学分析

采用SPSS26.0处理数据｡计量资料行正态检验,均符合正态分布,以“x±s”表示,组间/组内比较采用独立/配对t检验｡计数资料采用“例(%)”表示,行χ2检验｡以P0.05为差异具有统计学意义｡

2、结果

2.1两组患者疗效比较研究过程中,对照组3例患者退出研究,研究组1例患者退出研究,最终对照组纳入63例,研究组纳入65例｡研究组总有效率为95.38%,显著高于对照组的74.60%(P<0.05)｡详见表2｡

表2两组患者疗效比较[例(%)]

2.2两组患者治疗前后Th1/Th2细胞因子比较

治疗前,两组TNF-α､IFN-γ､IL-4､IL-10水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)｡治疗后,两组TNF-α､IFN-γ水平均较治疗前降低(P<0.05),IL-4､IL-10水平均较治疗前升高(P<0.05);且研究组TNF-α､IFN-γ水平低于对照组(P<0.05),IL-4､IL10水平高于对照组(P<0.05)｡详见表3｡

表3两组患者治疗前后Th1/Th2细胞因子变化(x±s,ng/L)

2.3两组患者治疗前后MDSCs比较

治疗前,两组MDSCs差异无统计学意义(P>0.05)｡治疗后,两组MDSCs均较治疗前升高(P<0.05);且研究组MDSCs高于对照组(P<0.05),详见表4｡

表4两组患者治疗前后MDSCs比较(x±s,%)

2.4两组患者治疗前后Treg､Th17及Treg/Th17比较治疗前,两组Treg､Th17､Treg/Th17差异均无统计学意义(P>0.05)｡治疗后,两组Treg和Treg/Th17均较治疗前升高(P<0.05),Th17均较治疗前降低(P<0.05);且研究组Treg和Treg/Th17高于对照组(P<0.05),Th17低于对照组(P<0.05)｡详见表5｡

表5两组患者治疗前后Treg､Th17及Treg/Th17比较(x±s)

2.5两组患者不良反应发生率比较研究组总不良反应发生率(9.23%)低于对照组(26.98%)(P<0.05)｡详见表6｡

表6两组患者不良反应发生率比较[例(%)]

3、讨论

ITP是一种自身免疫性疾病,其致病机制尚未完全明确｡ITP以T细胞功能紊乱为主要病理特点,引起血小板破坏增加､巨核细胞发育不良[8]｡目前认为,ITP的发病机制为抗血小板抗体与血小板相互作用,并与其表面Fc型受体发生相互作用[9]｡以往研究表明,ITP的发生与机体的体液免疫紊乱､血浆中的血小板结合性抗体增多､血小板被破坏等因素有关[10]｡近年来,免疫学和分子生物学等研究表明,T淋巴细胞在ITP发病中起重要作用[11]｡

MDSCs是一种异质性的未成熟髓系细胞,可产生IL等免疫抑制因子,而炎性环境可能促进ITP患者MDSC的增加[12]｡本研究结果发现,相较于对照组,研究组MDSCs比例更低,且研究组总有效率更高｡分析其原因可能是银杏内酯B作为一种中药提取物,主要自银杏叶中提取分离,对血小板活化因子有明显的抑制效应[13]｡银杏内酯B可以调节免疫细胞的活性,降低自身免疫反应的强度,减少自身抗体对血小板的攻击和破坏｡LI等[14]研究发现,在血小板活化因子受体于机体作用过程中,可参与炎症､免疫等生理过程,而银杏内酯B可与其发生相互作用,调控血小板活化因子诱导血小板激活,对血栓的形成有一定的抑制作用,从而发挥保护血管内皮细胞的效果,同时机体炎症效应的改善也间接导致MDSCs比例下降｡此外,银杏内酯B可以调节免疫细胞的活性,降低自身免疫反应的强度,减少自身抗体对血小板的攻击和破坏[15]｡银杏内酯B还可通过下调氧化低密度脂蛋白介导的炎症相关基因的表达,抑制核因子κB的激活[16]｡

Th1分泌TNF-α､IFN-γ等细胞因子,可介导细胞免疫反应;Th2细胞主要分泌IL-4､IL-10等细胞因子,可介导体液免疫反应｡本研究结果发现,相较于对照组,研究组TNF-α､IFN-γ水平更低,IL-4､IL-10水平更高｡银杏内酯B具有较强的抗氧化能力,且在机体中可与血小板因子发生反应,进而减轻自由基对血小板的损伤,保护血小板的完整性和功能[17]｡此外,银杏内酯B可维持ITP患者血管内皮的正常生理功能,为血小板提供良好的生存环境,促进其正常黏附､聚集,释放反应,进而促进血小板生成,改善T细胞亚群细胞因子[15]｡本研究结果表明,治疗后,两组Treg､Treg/Th17均升高,Th17均降低,且相较于对照组,研究组Treg､Treg/Th17更高,Th17更低｡分析原因,可能是银杏内酯B可通过多种途径刺激造血干细胞分化为血小板,增加血小板的数量,抑制血小板活化和聚集,避免血栓形成和血小板的过度消耗[18]｡总之,银杏内酯B注射液对ITP的作用机制具有多面性,其通过免疫调节､抗氧化应激以及改善血管内皮功能等多种方式,有效促进血小板的生成和功能恢复｡然而,在使用银杏内酯B注射液或其他相关药物时,必须严格遵循医生的专业建议,并结合患者的具体个体情况进行科学评估和治疗｡

综上所述,应用银杏内酯B注射液治疗ITP患者,可显著提升患者临床疗效,改善Th1/Th2细胞因子､MDSCs及免疫失衡情况,提升临床治疗安全性｡本研究为单中心研究､未对ITP患者进行随访,无法判定银杏内酯B注射液的长期效果｡因此,未来应采用多中心样本,增加随访时间,进一步证实银杏内酯B注射液对ITP的临床应用价值｡

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