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乳腺浸润性导管癌MMP2和p120ctn表达临床病理研究

2024-07-04 61 上传者：管理员

摘要：目的探讨乳腺浸润性导管癌(breast invasive ductal carcinoma, BIDC)患者MMP2和p120ctn表达与临床病理指标及预后的关系。方法应用免疫组织化学EliVisionTM plus两步法检测80例BIDC患者手术标本及30例癌旁乳腺组织MMP2和p120ctn的表达，分析MMP2和p120ctn表达与患者年龄、TNM分期、分化等级、淋巴结宏转移、术后5年内复发转移5项指标的关系。结果 BIDC及癌旁乳腺组织MMP2阳性率分别为78.8%(63/80)和16.7%(5/30),p120ctn阳性率分别为45.0%(36/80)和86.7%(26/30),差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP2和p120ctn表达均与年龄无关(P>0.05)。在TNM(T3+T4)期、低分化、有淋巴结宏转移和5年内复发转移患者中MMP2高表达，p120ctn低表达，两者呈负相关(r=-0.46)。结论 BIDC发生发展与MMP2和p120ctn显著相关，MMP2高表达或(和)p120ctn低表达均预示BIDC发展快、分化低、转移早、预后差。

关键词：
MMP2
p120ctn
乳腺
导管
肿瘤复发
肿瘤转移
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乳腺浸润性导管癌(breast invasive ductal carcinoma, BIDC)发病率和死亡率均较高，手术切除是主要治疗手段，腋窝淋巴结转移与否对患者预后具有重要影响。配合放化疗、内分泌治疗、靶向治疗等多种措施有利于延长生存期[1,2]。研究表明，BIDC发生发展存在多个癌基因、抑癌基因的异常表达，探讨其在BIDC表达状况，对辅助诊断、指导治疗和评估预后均具有重要实用价值[3,4]。MMP2(matrix metalloproteinase 2)是一种锌离子依赖性蛋白酶，系基质金属蛋白酶家族中与肿瘤关系最密切的成员之一，在肿瘤浸润转移过程中发挥了重要作用[5]。P120ctn(p120-catenin)属连环蛋白家族，能与E-钙黏附素(E-cadherin)形成复合体，共同介导细胞黏附和信号转导，参与肿瘤转移等恶性发展过程[6,7,8]。我们应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色技术检测BIDC及癌旁乳腺组织MMP2和p120ctn的表达，探讨两者与BIDC临床病理指标的关系，以期为判断乳腺组织良恶性及BIDC生物学行为、指导治疗提供有价值的参考指标。

1、材料与方法

1.1材料

回顾性分析2014-05-2015-12月陆军第八十一集团军医院手术切除的80例BIDC标本，患者平均年龄(55.0±8.7)岁；癌灶平均直径(3.7±2.1)cm;遵照《AJCC癌症分期手册(第8版)》,T1期、T2期、T3期、T4期分别为11例、40例、21例、8例。依据乳腺超声报告和数据系统(breast imaging, reporting and data system, BI-RADS)分类、纳米碳示踪、术中快速冰冻结果确定手术。诊疗方案上报医院伦理委员会讨论通过后实施，患者及(或)亲属均知情同意。选取30例距癌灶3 cm处的同侧乳腺组织作为癌旁对照组。

纳入标准：①普通病理苏木素-伊红(HE)染色及IHC染色确诊为BIDC;②临床资料齐全，BI-RADS具有乳腺癌影像学特征；③术前未接受过任何抗癌治疗方案。排除标准：①HE染色及IHC染色诊断为单纯癌、硬癌、浸润性小叶癌或特殊癌，以及其他罕见组织类型；②双乳癌或多源癌；③妊娠期乳腺癌；④合并急性乳腺炎或其他部位严重的炎性疾病；⑤合并严重系统性疾病或凝血机制障碍。

1.2 IHC染色方法

鼠抗人MMP2和p120ctn单克隆抗体、EliVision试剂盒、3,3'-二氨基联苯胺显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4μm,裱于经烷基酚聚乙烯醚处理的载玻片上，65℃烘烤过夜，防止脱片。采用IHC染色EliVisionTM plus两步法检测BIDC及癌旁乳腺组织MMP2和p120ctn表达，主要操作步骤见文献[9]。阳性对照采用北京中杉金桥生物技术有限公司提供的已知MMP2和p120ctn阳性染色片，阴性对照采用磷酸盐缓冲液代替第一抗体。

1.3判定标准

IHC染色呈黄色或棕褐色者为阳性颗粒，依据染色强度和染色癌细胞占比2项指标判分定性：①染色强度：由浅至深分为3个等级，无色、黄色、棕褐色分别判定为0、1、2分；②癌细胞占比：黄色或(和)棕褐色癌细胞占比≤5%、6%～30%、31%～69%、≥70%分别判定为0、1、2、3分。根据①+②总分定性：≤1、2～3、4～5分，分别判定为阴性(-)、阳性(+)、强阳性(++)。

1.4观察指标

①MMP2和p120ctn在BIDC及癌旁乳腺组织表达部位及阳性率；②MMP2和p120ctn表达与BIDC患者5项临床病理指标的关系；③MMP2和p120ctn在BIDC表达的相关性。

1.5统计学方法

运用SPSS 22.0分析数据。IHC染色判定为MMP2和p120ctn阳性组或阴性组例数采用n(%)表示，组间比较采用χ2检验，通过χ2值计算列联系数进行相关性分析。检验水准α=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 MMP2和p120ctn在BIDC及癌旁乳腺组织表达部位及阳性率

BIDC及癌旁乳腺组织MMP2阳性染色多见于细胞质和细胞膜，p120ctn阳性染色多见于细胞膜。BIDC与癌旁乳腺组织MMP2和p120ctn阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 MMP2和p120ctn在BIDC及癌旁乳腺组织表达阳性率n(%)

2.2 MMP2和p120ctn表达与BIDC患者5项临床病理指标的关系

MMP2和p120ctn表达均与年龄无关(P>0.05)。在(T3+T4)期、低分化、有淋巴结宏转移和5年内复发转移患者中，MMP2表达高于、p120ctn表达低于(T1+T2)期、(高+中)分化、无淋巴结宏转移和5年内无复发转移患者，各组间阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 MMP2和p120ctn表达与BIDC患者5项临床病理指标的关系n(%)

2.3 MMP2和p120ctn在BIDC表达的相关性

80例BIDC患者MMP2和p120ctn共阳性20例，共阳率为25.0%;共阴性1例，共阴率为1.2%。经列联系数相关性分析，两者表达呈负相关(r=-0.46)(表3)。

表3 MMP2和p120ctn在BIDC表达的相关性n(%)

3、讨论

乳腺癌的生物学特性与多种肿瘤标志物异常表达密切相关，迄今尚未发现BIDC特异强的肿瘤标记物。MMP2和p120ctn均与癌细胞黏附迁移和转移浸润有关，我们观察了80例BIDC患者IHC染色结果，表明MMP2阳性率显著高于癌旁组织、p120ctn阳性率显著低于癌旁组织，提示两者有助于鉴别乳腺良、恶性病变。

3.1 MMP2表达与BIDC患者年龄、TNM分期、分化等级及复发转移的关系

癌细胞自身分泌或诱导宿主分泌多种溶解酶降解基底膜和细胞外基质才能脱离原发灶越过基质屏障，在黏附基底膜、降解和迁移过程中，MMP2能降解基底膜多种胶原和明胶，分解纤维黏连蛋白和层黏连蛋白，促进癌细胞转移浸润。近年研究发现，MMP2在正常乳腺上皮细胞多为不表达或低表达，在乳腺癌细胞中则呈异常高表达，表达水平与乳腺癌临床病理分期及转移浸润密切相关[10,11]。本研究对63例MMP2阳性表达患者进行分组对比分析，结果显示，MMP2表达与年龄无关，说明无论任何年龄发生BIDC,MMP2均可呈高表达状态，与Lukianova等[12]研究结果一致。在TNM(T3+T4)期、不良分化程度(低分化)和5年内有复发转移患者中，MMP2表达显著高于TNM(T1+T2)期、良好分化程度(高分化+中分化)、5年内无复发转移患者，表明临床分期越高(癌灶越大)、分化等级越低、复发转移越早，MMP2阳性率越高，进一步验证了MMP2表达与BIDC恶性发展呈显著正相关，可作为判断BIDC恶性程度、预测复发转移、帮助临床病理分期、评估患者预后的指标之一。

3.2 P120ctn表达与BIDC患者年龄、TNM分期、分化等级及复发转移的关系

P120ctn参与调节钙黏蛋白聚集和钙黏蛋白与肌动蛋白细胞骨架的连接，作为一种黏附分子，其表达下降或缺失可致细胞失分化，降低黏附功能，癌细胞浸润周围组织，脱离癌灶转移至淋巴结和远方器官。P120ctn在胞核内同转录抑制因子kaiso结合，参与Wnt信号通路转导，影响细胞增殖、发育及分化，其低表达状态可增加细胞癌变风险[13,14]。研究发现，p120ctn低表达的乳腺癌具有高侵袭性，不同病理类型的乳腺癌p120ctn表达部位不尽相同，与BI-RADS微小钙化点分布、血流显像情况、淋巴结转移等超声征象具有一定相关性[15,16,17]。本研究对36例p120ctn阳性表达患者进行分组对比分析，结果显示，p120ctn表达与年龄无关，说明无论任何年龄发生BIDC,p120ctn均可呈低表达状态。在TNM(T3+T4)期、不良分化程度(低分化)和5年内有复发转移患者中，p120ctn表达显著低于TNM(T1+T2)期、良好分化程度(高分化+中分化)、5年内无复发转移患者，表明临床分期越低(癌灶越小)、分化等级越高、复发转移越晚，p120ctn阳性率越高，进一步验证了p120ctn表达与BIDC的恶性发展呈显著负相关，其低水平表达预示临床发展快、分化等级低、易发生复发转移。

3.3 MMP2和p120ctn表达与BIDC淋巴结宏转移的关系

BIDC淋巴结转移可分为宏转移、微转移和微小转移3种状态，前哨淋巴结转移对乳腺癌手术范围及综合治疗具有重要指导意义[18],利用纳米碳或吲哚菁绿荧光等示踪技术，有助于精准定位前哨淋巴结，指导淋巴结清除程度，提高术后对转移淋巴结IHC研究的全面性和可靠性[19]。本研究结果显示，有宏转移与无宏转移患者MMP2和p120ctn表达阳性率差异具有显著性，验证了MMP2高表达、p120ctn低表达均在BIDC淋巴结宏转移中发挥作用，两者反向调节BIDC的形成和发展，增强癌细胞转移浸润潜能，预示患者预后差，生存期短。目前尚未发现诊断BIDC淋巴结转移特异性强的标记物，通过网络数字化智能检测BIDC相关基因组和蛋白组，有助于提高BIDC及其转移淋巴结的诊断水平。

综上，MMP2高表达、p120ctn低表达均与BIDC恶性发展密切相关，两者表达呈负相关。联合检测MMP2和p120ctn对评估BIDC恶性程度、病情发展及预后等均具有一定实用价值。当前，基于MMP2和p120ctn的分子诊断和抗癌治疗方兴未艾，通过靶向MMP2,应用Xanthohumol可阻止BIDC侵袭和细胞周期进程[20]。皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ、长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1等可下调MMP2表达，诱导BIDC细胞凋亡，抑制癌细胞迁移和侵袭[21,22]。监测p120ctn表达水平有助于观察患者对靶向治疗的反应性[23,24]。针对这两种基因或蛋白质的靶向治疗新制剂的开发和应用，有利于提高BIDC个体化分子治疗水平。

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