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喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒在水产品中的使用及推广分析

2020-03-05 123 上传者：管理员

摘要：文章通过利用自行开发的水产品药残快检试剂盒，并集中培训操作人员，再用熟练技术员带新人的方式，对应用操作人员扩大范围，从而实现水产品检测的快速有效、大范围推广，对基层检测能力上缺失问题得以解决，并对我省水产品质量安全状况全面精准把握提供了技术支持及推广应用模式。

关键词：
应用与推广
水产品
药残快检试剂盒
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喹诺酮类药物、孔雀石绿均为化学合成抗菌类药物，被广泛用于水产养殖业动物疾病的治疗和控制，但这两种药物在动物体内消除缓慢，危害人类身体健康。水产品中喹诺酮类和孔雀石绿药物残留的检测手段主要包括液质联用、液相色谱等仪器方法及EusA方法。仪器方法前处理过程复杂、仪器设备昂贵、溶剂消耗量大、检测周期长、检测成本高，对操作人员的专业技能要求高；ELISA法检测耗时长、试剂寿命短、需低温保存、结果分析需要制定标准曲线。现正在推行“产地准出、市场准入、质量可追溯”制度，提升水产品安全供给能力，实现水产品“从池塘到餐桌”全过程可追溯，市场上急需快速检测试剂对水产样品进行大规模筛选普查。省站针对市场需求，通过开展关键技术攻关，开发出前处理步骤简单、快速、准确性高的简单法与复杂法两种喹诺酮类免疫胶体金快速检测试剂盒和Ⅳ型与Ⅴ型两种孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂盒，在江西省的南昌、九江和新余市大力推广。

1、材料与方法

1.1 材料

试剂盒：我站开发的水产品中喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒。

1.2 监测内容

（1）品种：鱼、虾、蟹、鳖、蛙类等水产品。

（2）检测参数：环丙沙星等15种氟喹诺酮类、孔雀石绿、隐色孔雀石绿。

（3）验证：试剂盒方法与仪器方法（LC-MS/MS）相比较。

1.3 推广区域

在江西省内选择南昌市、九江市、新余市的省级（1家）、市级（1家）、县级检测中心/站（13家）开展水产品药残快检技术推广，以强带弱，以点带面，全面进行推广。

1.4 推广方式

采取集中培训、上门培训和电话培训等多种培训方式相结合。

（1）集中培训。从每个中心（站）挑选1～2个具有检测基础、责任心强、技术熟练的检测人员在省站集中跟班示范培训，讲解操作注意事项，直至培训合格。

（2）电话咨询培训。检测人员集中培训结束后回到各自单位练兵，练兵结果与仪器检测结果比较，省站每周通过电话咨询了解练兵情况，探讨各中心（站）检测过程中碰到的技术问题，并及时给予解决。

（3）上门培训。对需要进行现场指导的检测中心（站），由省中心派人到现场解决或中心（站）再派人到省中心来跟班操作学习。培训合格后，各中心（站）分别在农贸市场、超市和基地抽取水产样品，用绞肉机制成鱼糜，制好的鱼糜样品一分为二，1份用作喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒快检用，1份送至省站上大型仪器液-质-质检测用，由省站统计快检结果并与仪器数据结果对比进行分析评价。评价合格的中心（站），对各自市县的水产样品进行大规模筛选普查。各中心（站）在现场采集样品、制样，用药残快检试剂盒对抽检的水产品进行检测，测得阳性样品，送至省站上大型仪器液-质-质进行确证。

2、试验结果

（１）考核。设计6个待测样品，经仪器液-质-质确证后得到正确结果，然后对参训人员进行独立操作检测考核，合格率100%。

（2）按照喹诺酮类和孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂盒的说明书要求，分别安排做1个样品和50个样品实验，计算检测过程所用时间，从检测时间和价格上与仪器方法相比较。

表1 喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒应用与仪器结果比较

（３）南昌、九江、新余市检测中心（站）在各个地市的市场上随机抽取水产品样品，品种基本覆盖江西省城乡居民的淡水产品消费品种。样品带回实验室制成2份样品，一份用省站开发的2种喹诺酮类和2种孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂盒检测样品；另一份省站按仪器方法GB/T19857-2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》与农业部1077号公告-1-2008《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》前处理后上液-质-质仪器检测，按仪器结果判定样品的阴阳性；各中心（站）检测结果的假阳性率与假阴性率数据如表2所示。

表2 喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒假阳性率与假阴性率监测结果

3、讨论

从培训推广的模式上来看，通过现场培训后，参训人员100%达到可熟练操作的要求，并能在规定的时间内得出结果，说明快检试剂盒操作方法简单易行，不存在技术难点和盲点。不需要再投入，从基层的现状来看，可以解决基层层面上检测能力的缺失。从检测时间和成本上看，快检试剂盒优势突出。检测1个水产品中喹诺酮类，得出结果：简单法试剂盒10min，复杂法试剂盒24min，仪器方法24h；检测1个水产品中的孔雀石绿，得出结果：Ⅴ型试剂盒19min，Ⅳ型试剂盒41min，仪器方法24h。药残快检试剂盒大大缩短了检测时间，比之仪器方法有绝对优势，并且样本越多，节约的时间越多。药残快检试剂盒成本只是仪器方法的1/16，价格低廉、操作简单、使用人员易上手，省钱省力；适合养殖者、加工企业等自身质量安全及时监控，提升自身产品的市场竞争力。从验证的结果上来看，快检试剂盒技术可行。南昌和九江市的检测中心（站）同时使用喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒对300批次样品进行检测，假阴性率全部为0，假阳性率均小于5%；新余市检测中心（站）检测100批次样品，除喹诺酮类（简单法）检出1批次样品为假阴性，假阴性率为1%外，其他快检试剂盒样品假阴性率都为0，100批次的假阳性率均小于5%。结果表明：同时使用喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒对水产样品进行检测，检测结果与液相色谱-串联四级杆质谱仪法测定结果基本一致，假阳性率和假阴性率均小于5%，检测结果符合率都在95%以上，符合试剂盒检测要求，适用于大批量样本中喹诺酮类和孔雀石绿残留的检测。

4、小结

通过对水产品中喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒的示范与推广，可以使基层技术人员掌握该技术，并得到广泛应用。同时由于产品价格低廉、操作简便、检测结果快，解决了养殖者、加工企业等检测能力上的缺失，从而可以大面积筛查水产品药残状况，扩大监测面，为全面精准把握我省水产品质量安全提供了有效的手段，也为促进水产养殖绿色发展提供了技术保障。

参考文献：

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[2]崔淑娟,吕燕宁,黄芳,等.流感快检试剂盒在流感监测中的应用分析.[J].中华疾病控制杂志,2011,15(7):590-593.

谢世红,徐节华,黄五秀,等.水产品中喹诺酮类和孔雀石绿药残快检试剂盒的应用与推广[J].江西水产科技,2019,(1):9-10.

项目来源:江西省科技支撑计划重大项目(20152ACG70006).