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三乌胶丸急性毒性的动物实验研究

2024-02-24 128 上传者：管理员

摘要：目的观察三乌胶丸对美国癌症研究所(ICR)小鼠和SD大鼠的急性毒性反应，以期为三乌胶丸提供安全性评价数据。方法实验起始时间2020年3—4月。选取ICR小鼠40只及SD大鼠40只，根据中心标准操作规程规定区段随机法将ICR小鼠分为ICR对照组和ICR三乌胶丸组，每组20只；按照区段随机法进行试验设置SD对照组和SD三乌胶丸组，各20只。ICR对照组、ICR三乌胶丸组分别给予纯净水、三乌胶丸40 ml/kg经口灌胃；SD对照组、SD三乌胶丸组分别给予纯净水、三乌胶丸20 ml/kg经口灌胃。各组均连续观察14 d。观察各组一般情况、大体解剖检查结果，给药前及给药后第4、7、10、14天体质量。结果各组实验动物均未出现死亡，未见明显的活动异常及中毒症状。实验动物各器官表面和切面均未见明显异常。给药前及给药后第4、7、10、14天，2组小鼠及SD大鼠体质量比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。结论三乌胶丸对ICR小鼠在相当于成年人临床给药剂量的264倍(按公斤体质量计)/34倍(按体表面积计)内未见有明显急性毒性反应，三乌胶丸对SD大鼠在相当于成年人临床给药剂量的132倍(按公斤体质量计)/24倍(按体表面积计)内未见有明显急性毒性反应。

关键词：
三乌胶丸
临床前研究
动物实验
急性毒性
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三乌胶丸是彝族名方三乌汤剂型改良而成，具有祛寒除湿、祛风通络、活血止痛、强筋健骨等功效[1],主要用于风寒湿邪、风痰、淤血引起的风湿麻木、骨节肿痛、腰腿疼痛、四肢瘫痪、陈伤劳损、中风偏瘫、口眼歪斜、失语及风湿性关节炎、类风湿关节炎、风湿性肌炎、骨质增生、坐骨神经痛、肩周炎、创伤性关节炎等疾病[2,3]。为论证三乌胶丸的临床毒性，本实验通过观察三乌胶丸对美国癌症研究所(ICR)小鼠和SD大鼠的急性毒性反应，以期为三乌胶丸提供安全性评价数据。

1、材料与方法

1.1研究对象

实验起始时间2020年3—4月。选取ICR小鼠40只，SPF级，雌雄各半，体质量18.2～21.0 g,小鼠由湖南斯莱克景达实验动物有限公司供应，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2019- 0004,实验动物使用许可证号：SYXK(湘)2015- 0016,实验动物质量合格证号：1107272011001256。根据中心标准操作规程(SOP)规定区段随机法将ICR小鼠分为ICR对照组和ICR三乌胶丸组，每组20只。另选取SD大鼠40只，SPF级，雌雄各半，体质量180.0～212.3 g,大鼠由湖南斯莱克景达实验动物有限公司供应，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2019- 0004,实验动物使用许可证号：SYXK(湘)2015- 0016,实验动物质量合格证号：1107272011001255。按照区段随机法将SD大鼠分为SD对照组和SD三乌胶丸组，每组20只。

1.2药品试剂

三乌胶丸(云南金乌黑药制药有限公司生产，规格：每1 g浸膏相当于生药3.02 g,批号：200205);对照品：纯水，临用前现制，TCH-RO/20C型纯化机(中心编号：TZ/csy001);丙泊酚注射液(西安力邦制药有限公司生产，规格：20 ml/200 mg,批号：11904303)。

1.3实验方法

本实验采用最大给药量法。ICR对照组小鼠给予纯水40 ml/kg经口灌胃，每天2次，每次间隔6 h。ICR三乌胶丸组小鼠给予三乌胶丸，临床剂量为30.2 g生药/d,按成年人平均体质量60 kg计算约为0.503 g生药/kg,按体表面积换算成小鼠等效剂量为3.926 g生药/kg;根据前期实验结果，按照40 ml/kg经口灌胃三乌胶丸药液，给药前禁食不禁水约13 h,当日给药2次(2次给药间隔6 h, 2次给药间禁食不禁水),累积剂量为132.88 g生药/kg(44.0 g干浸膏/kg),给药剂量约是成年人临床给药剂量的264倍(按公斤体质量计)/34倍(按体表面积计)。

根据《药物单次给药毒性研究技术指导原则》相关要求及结合前期实验结果，按体表面积换算成大鼠等效剂量为2.718 g生药/kg,采用最大给药量法进行试验，SD对照组、SD三乌胶丸组分别按20 ml/kg经口灌胃给予纯水、三乌胶丸药液，给药前禁食不禁水约13 h,当日给药2次(2次给药间隔6 h, 2次给药间禁食不禁水),累积剂量为66.44 g生药/kg,给药剂量约是成年人临床给药剂量的132倍(按公斤体质量计算)/24倍(按体表面积计算)。

各组均连续观察14 d。

1.4观察指标与方法

(1)一般情况：观察小鼠及大鼠一般活动情况，包括外观、行为、饮食情况、排泄物等，并观察其中毒及死亡情况。(2)大体解剖检查结果：观察期结束时，予丙泊酚乳状注射液(20 mg/kg)2.0 ml/kg尾静脉注射，处死实验动物后进行大体解剖，观察其心脏、脑、肝脏、脾脏、肾脏的表面及切面，对异常器官进行组织病理学检查。(3)体质量：于给药前及给药后第4、7、10、14天，使用ME2002E型电子天平(中心编号：555)称量实验动物的体质量。

1.5统计学方法

采用SPSS 26.00统计学软件进行数据处理，计量资料以

表示，采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1一般情况

各组实验动物均未出现死亡，未见明显的活动异常及中毒症状。

2.2大体解剖病理结果

实验动物各器官表面和切面均未见明显异常。

2.3体质量比较

给药前及给药后第4、7、10、14天，2组小鼠体质量比较，差异均无统计学意义(P>0.05),见表1～3;给药前及给药后第4、7、10、14天，2组大鼠体质量比较，差异均无统计学意义(P>0.05),见表4～6。

3、讨论

三乌胶丸是在彝族经典名方三乌汤的基础上，经多次剂型改造升级而来[4],该药由生川乌、生草乌、何首乌、附子(附片)、生白附子、乳香、冰糖、鲜猪蹄组成[5],其中生川乌为毛茛科植物卡氏乌头的母根，有小瘤状凸起的侧根及除去子根后的痕迹，主要含乌头碱、中乌头碱、塔技乌头胺、杰斯乌头胺、苯甲酰乌头胺、苯甲酰中乌头胺等化学成分，具有祛风湿、温经、止痛的功效，多用于治疗风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝疼痛，跌打损伤及麻醉止痛等[6];生草乌为毛茛科多年生草本植物乌头或北乌头的块根，具有不定根残基形成环多角，主要成分有乌头碱、次乌头碱、根乌头定碱、乌头芬碱等，具有祛风除湿、温经止痛的功效，可用于治疗风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝作痛及麻醉止痛[7]。何首乌是为蓼科植物何首乌的块根乌的干燥块根，含蒽醌类化合物，主要成分为大黄酚和大黄素，还含有卵磷脂、粗脂肪等，具有补益精血(制用)、解毒、截疟、润肠通便(生用)的功效，主治精血亏虚、头晕眼花、须发早白、腰膝酸软、久疟、痈疽、瘰疬、肠燥便秘[8]。附子为毛茛科植物乌头子根的加工品，主要含有乌头碱、次甲基乌头碱等生物碱，还含有脂类、有机酸及微量元素等，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效，常用于治疗亡阳虚脱、肢冷脉微、心阳不足、胸痹心痛、虚寒吐泻、脘腹冷痛、阳痿宫冷、阴寒水肿、阳虚外感、寒湿痹痛[9]。生白附子为天南星科植物独角莲的干燥块茎，主要含β-谷甾醇、葡萄糖苷、内消旋肌醇、黏液质、蔗糖、皂苷等化学成分，具有祛风化痰、定惊搐、解毒散结、止痛的功效，可用于治疗中风痰壅，口眼歪斜，语言謇涩，惊风癫痫，破伤风，痰厥头痛，偏正头痛，瘰疬痰核，毒蛇咬伤[10]。乳香为橄榄科植物乳香树及同属植物树皮渗出的树脂，主要成分为树脂、树胶、挥发油等，善活血定痛、消肿生肌，可用于治疗胸痹心痛、胃脘疼痛、痛经经闭、产后瘀阻、症瘕腹痛、风湿痹痛、筋脉拘挛、跌打损伤、痈肿疮疡[11]。鲜猪蹄为猪科猪属动物猪的蹄，具有补气血、润肌肤、通乳汁、托疮毒之功效，常用于治疗虚劳羸瘦、产后乳少、面皱少华、痈疽疮毒等。现代药理学研究表明，三乌胶丸具有显著的抗炎镇痛、活血通经、祛瘀活络的作用，还可增强机体免疫力[12,13]。

表1ICR对照组与ICR三乌胶丸组小鼠不同时间点体质量比较

表2ICR对照组与ICR三乌胶丸组雌性小鼠不同时间点体质量比较

表3ICR对照组与ICR三乌胶丸组雄性小鼠不同时间点体质量比较

表4SD对照组与SD三乌胶丸组大鼠不同时间点体质量比较

表5SD对照组与SD三乌胶丸组雌性大鼠体质量比较

表6SD对照组与SD三乌胶丸组雄性大鼠体质量比较

本动物实验采用最大给药量法，ICR小鼠及SD大鼠以最大浓度的三乌胶丸药液经口灌胃14 d,来了解三乌胶丸的急性毒性情况，可为其重复给药毒性试验的剂量设计、毒性反应指标的选择提供依据[14,15]。本实验结果显示：(1)ICR三乌胶丸组小鼠在给药当天，部分小鼠拉稀便，给药后第1天恢复正常，截至观察期结束，所有小鼠、大鼠未见明显异常。(2)观察期结束时，大体解剖肉眼观察结果显示，ICR小鼠与SD大鼠各主要器官均未见明显毒性反应。(3)ICR三乌胶丸组小鼠按40 ml/kg经口灌胃给予最大浓度0.55 g干浸膏/ml药液，当日给药2次，累积剂量为132.88 g生药/kg(44.0 g干浸膏/kg)[相当于成年人临床给药剂量的264倍(按公斤体质量计)/34倍(按体表面积计)],结果显示，给药前及给药后第4、7、10、14天，ICR对照组与ICR三乌胶丸组小鼠、ICR对照组与ICR三乌胶丸组雌、雄小鼠体质量比较差异均无统计学意义，可见三乌胶丸对ICR小鼠体质量无明显影响。SD大鼠按20 ml/kg经口灌胃给予0.55 g干浸膏/ml三乌胶丸药液，当日给药2次，累积剂量为66.44 g生药/kg(22.0 g干浸膏/kg)[相当于成年人临床给药剂量的132倍(按公斤体质量计)/24倍(按体表面积计)],结果显示，给药前及给药后第4、7、10、14天，SD对照组与SD三乌胶丸组小鼠、SD对照组与SD三乌胶丸组雌雄小鼠体质量比较差异均无统计学意义，可见三乌胶丸对SD大鼠体质量无明显影响，且对雌、雄鼠体质量的影响无差异。

综上所述，三乌胶丸对ICR小鼠在相当于成年人临床给药剂量的264倍(按公斤体质量计)/34倍(按体表面积计)内未见有明显急性毒性反应，三乌胶丸对SD大鼠在相当于成年人临床给药剂量的132倍(按公斤体质量计)/24倍(按体表面积计)内未见有明显急性毒性反应。

利益冲突所有作者声明无利益冲突

参考文献:

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