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1型糖尿病患儿血清miRNA-29和TRAF3水平及临床意义

2024-08-16 14 上传者：管理员

摘要：目的探讨1型糖尿病(T1DM)患儿血清微小RNA-29(miRNA-29)和肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)水平及临床意义。方法选取2021年6月至2023年1月该院收治的78例T1DM患儿作为观察组，另选取同期60例健康儿童作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组血清miRNA-29水平，采用酶联免疫吸附试验检测两组血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、TRAF3水平。采用多因素Logistic回归分析儿童T1DM发生的危险因素；绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的价值，并计算曲线下面积(AUC)。结果观察组IL-6、TNF-α、IFN-γ、miRNA-29和TRAF3水平均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。T1DM患儿血清miRNA-29和TRAF3与IL-6、TNF-α、IFN-γ均呈正相关(P<0.05)。T1DM患儿血清miRNA-29与TRAF3呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示，IL-6、TNF-α、IFN-γ、miRNA-29和TRAF3水平升高均为儿童T1DM发生的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的AUC分别为0.866、0.798,均高于IL-6(0.601)、TNF-α(0.687)、IFN-γ(0.572)。结论 miRNA-29、TRAF3可能通过介导炎症损伤而参与T1DM的发生，二者有助于儿童T1DM的辅助诊断。

关键词：
1型糖尿病
儿童
微小RNA-29
肿瘤坏死因子受体相关因子3
辅助诊断
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1型糖尿病(T1DM)的发病率有逐渐上升的趋势，18%的新发患者为9岁以下儿童[1]。T1DM严重影响儿童的生命健康，寻找早期诊断标志物具有重要临床意义。既往有研究发现，微小RNA(miRNA)参与T1DM的发生和发展[2]。由于miRNA在外周血中表达的稳定性较好，并且miRNA异常改变常早于其他蛋白表达，因此可能成为T1DM诊断的标志物[3]。有研究发现，miRNA-145-5p有助于T1DM的诊断，并且有助于早期预测血管并发症发生[4]。T1DM的发生与胰岛β细胞炎症损伤有关[5]。miRNA-29是一种与免疫炎症损伤密切相关的miRNA[6]。miRNA-29在糖尿病大鼠肝脏组织和胰腺组织中呈高表达[7],并且可以通过肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)促进单核细胞和巨噬细胞募集和激活，进而造成胰岛β细胞炎症损伤[8]。miRNA-29、TRAF3与T1DM的关系既往少有报道，为此，本研究分析了T1DM患儿血清miRNA-29、TRAF3水平及其临床意义，旨在为儿童T1DM的诊断和治疗提供新靶点。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2021年6月至2023年1月本院收治的78例T1DM患儿作为观察组，其中男44例，女34例；年龄2～14岁，平均(7.21±2.65)岁。纳入标准：(1)首诊入院；(2)符合《中国1型糖尿病诊疗指南(2021版)》[9]中T1DM诊断标准。排除标准：(1)合并糖尿病并发症；(2)2型糖尿病；(3)心、肝、肾等脏器功能不全。另选取同期在本院进行健康体检的60例儿童作为对照组，其中男34例，女26例；年龄2～14岁，平均(7.52±2.89)岁。两组性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。所有受试者监护人均知情同意并签署知情同意书。本研究方案获得本院医学伦理委员会审核批准(2021伦审科字第021号)。

1.2方法

1.2.1血清炎症因子水平检测

采集所有受试者肘静脉血1.5 mL,以3 000 r/min离心10 min,取上层血清分装，置于-80℃冰箱中保存待检。采用酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、TRAF3水平，试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司，操作步骤按照试剂盒说明书进行。

1.2.2血清miRNA-29水平检测

采用Trizol试剂(北京普利莱基因技术有限公司)提取总RNA,采用miScriptⅡRT反转录试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司)将RNA反转录为cDNA,操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用miRNA实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒(美国Sigma公司)检测miRNA-29水平，引物序列：miRNA-29正向5′-AAGACTTGCCTGCGGAGCAG-3′;反向5′-CAAACTCCTGGCACTTGGTT-3′,内参U6正向5′-GTGCATTGTAGTTGCATT-3′,反向5′-AACATGTACAGTCCATGGATG-3′。反应条件：加热95℃30 min,变性94℃15 s,退火55℃30 s,延伸70℃30 s,共40个循环。采用2-ΔΔCt法计算miRNA-29水平。

1.3统计学处理

采用SPSS20.0统计软件进行数据分析处理。符合正态分布的计量资料以

表示，两组间比较采用独立样本t检验；计数资料以例数表示，组间比较采用χ2检验；绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的价值，并计算曲线下面积(AUC);采用Pearson相关对血清miRNA-29、TRAF3与炎症因子的相关性进行分析；采用多因素Logistic回归分析儿童T1DM发生的危险因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1观察组和对照组临床指标水平比较

观察组IL-6、TNF-α、IFN-γ、miRNA-29和TRAF3水平均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1观察组和对照组临床指标水平比较

2.2 T1DM患儿血清miRNA-29和TRAF3与炎症因子的相关性

T1DM患儿miRNA-29和TRAF3与IL-6、TNF-α、IFN-γ均呈正相关(P<0.05)。见表2。

表2T1DM患儿血清miRNA-29和TRAF3与炎症因子的相关性

2.3 T1DM患儿血清miRNA-29与TRAF3的相关性

T1DM患儿血清miRNA-29与TRAF3呈正相关(r=0.581,P<0.05)。

2.4儿童T1DM发生的多因素Logistic回归分析

以发生T1DM情况作为因变量(发生=1,未发生=0),以IL-6(原值输入)、TNF-α(原值输入)、IFN-γ(原值输入)、miRNA-29(原值输入)和TRAF3(原值输入)作为自变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示，IL-6、TNF-α、IFN-γ、miRNA-29和TRAF3水平升高均为儿童T1DM发生的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3儿童T1DM发生的多因素Logistic回归分析

2.5各项指标辅助诊断儿童T1DM的价值

以对照组为阴性样本，以观察组为阳性样本进行ROC曲线分析，结果显示，miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的AUC分别为0.866、0.798,均高于IL-6(0.601)、TNF-α(0.687)、IFN-γ(0.572)。见表4。

表4各项指标辅助诊断儿童T1DM的价值

3、讨论

T1DM是一种自身免疫性疾病，炎症因子损伤胰岛β细胞可能是其发病的重要机制[10]。有研究发现，T1DM患者血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均升高，这些炎症因子会损伤胰岛β细胞并造成炎症级联反应，进而参与T1DM的病情进展[11]。本研究发现，T1DM患儿血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均高于健康儿童，进一步提示炎症因子可能是T1DM诊断和治疗的靶点。遗憾的是，既往有研究发现，炎症细胞因子在早期诊断T1DM方面价值有限，存在灵敏度、特异度低的缺点[11]。miRNA属于非编码RNA,长度约为22个核苷酸，可通过靶向调控一个或多个基因，进而影响细胞增殖、分化、凋亡等。越来越多的研究显示，miRNA通过介导免疫炎症损伤而参与多种疾病的发生和发展，如肿瘤、心血管疾病、糖尿病等[12-13]。miRNA通过多种途径介导炎症性损伤，进而影响T1DM的发生和发展[14]。

miRNA-29与细胞增殖、分化、代谢、衰老、凋亡均有关[15]。miRNA-29在T细胞免疫应答中也有重要作用[16]。miRNA-29可以通过TRAF3促进单核细胞和巨噬细胞募集和激活，进而造成胰岛β细胞炎症损伤[8]。有研究发现，miRNA-29参与肥胖和糖尿病的发生[17]。本研究发现，T1DM患儿血清miRNA-29水平高于健康儿童，提示miRNA-29可能参与T1DM发病。Pearson相关分析结果显示，T1DM患儿miRNA-29与IL-6、TNF-α、IFN-γ均呈正相关(P<0.05),说明miRNA-29可能通过介导炎症损伤而影响T1DM。TRAF3为肿瘤坏死因子受体作用因子3,与泛素化淋巴细胞功能调节有关[18]。有研究发现，TRAF3与机体血糖调节有关，并且与高血糖诱导内皮炎症有关[19]。本研究发现，T1DM患儿血清TRAF3水平升高，并且TRAF3与IL-6、TNF-α、IFN-γ均呈正相关(P<0.05),提示TRAF3通过介导炎症而影响T1DM发生。TRAF3是miRNA-29的调控靶点，miRNA-29/TRAF3通路可影响单核细胞和巨噬细胞募集和激活，进而造成胰岛β细胞炎症损伤[8]。本研究还发现，T1DM患儿血清miRNA-29与TRAF3呈正相关(P<0.05),提示miRNA-29/TRAF3通路参与T1DM发病。

由于miRNA在外周血中表达的稳定性较好，并且miRNA异常改变常早于其他蛋白表达[20],因此，检测外周血miRNA表达有助于疾病早期的辅助诊断。本研究发现，miRNA-29、TRAF3水平升高是儿童T1DM发生的独立危险因素(P<0.05)。另外，miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的AUC分别为0.866、0.798,说明二者对儿童T1DM的辅助诊断有一定价值。

综上所述，miRNA-29、TRAF3可能通过介导炎症损伤而参与儿童T1DM发生，二者对儿童T1DM的辅助诊断有一定价值。然而本研究也存在一些局限性，例如未对T1DM患儿进行随访，未明确miRNA-29、TRAF3与并发症及疗效的关系；本研究为单中心研究，样本量相对较小；未直接明确miRNA-29对TRAF3的调控作用。未来需要开展细胞和动物研究，进一步探讨miRNA-29/TRAF3信号通路在T1DM发生和发展中的作用机制。

参考文献:

[9]中华医学会糖尿病学分会,中国医师协会内分泌代谢科医师分会,中华医学会内分泌学分会,等.中国1型糖尿病诊治指南(2021版)[J].中华糖尿病杂志,2022,14(11):1143-1150.

基金资助:秦皇岛市科学技术研究与发展计划(2021011A095);

文章来源:李侠,高宇,李江,等.1型糖尿病患儿血清miRNA-29和TRAF3水平及临床意义[J].检验医学与临床,2024,21(15):2177-2180.