首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 药学论文 > 药学综合论文 > 枸橼酸西地那非片在中国健康受试者体内的生物等效性研究

枸橼酸西地那非片在中国健康受试者体内的生物等效性研究

2024-02-18 80 上传者：管理员

摘要：目的评估在空腹、餐后条件下健康受试者口服枸橼酸西地那非片(100 mg)受试制剂与参比制剂的生物等效性。方法用单次给药、随机、开放、两周期、双交叉设计。空腹和餐后试验各入组36例健康受试者，每周期单次口服枸橼酸西地那非片受试制剂和参比制剂100 mg。用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测人血浆中西地那非及N-去甲基西地那非的浓度，用Analyst 1.6.3(AB Sciex)以非房室模型计算药代动力学参数，评价2种制剂的生物等效性，并对试验期间受试者进行相关的安全性评价。结果空腹试验西地那非受试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数：Cmax分别为(494.69±230.94)和(558.78±289.83)ng·mL-1,AUC0-t分别为(1 336.21±509.78)和(1 410.82±625.99)h·ng·mL-1,AUC0-∞分别为(1 366.49±512.16)和(1 441.84±628.04)h·ng·mL-1。餐后试验西地那非受试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数：Cmax分别为(381.89±126.53)和(432.47±175.91)ng·mL-1,AUC0-t分别为(1 366.34±366.99)和(1 412.76±420.37)h·ng·mL-1,AUC0-∞分别为(1 403.28±375.32)和(1 454.13±429.87)h·ng·mL-1。空腹和餐后试验受试制剂和参比制剂的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的几何均值比的90%置信区间均在80%～125%内，判断2种制剂具有生物等效性。空腹和餐后试验的不良事件发生率分别为33.33%和25.00%,未发生严重不良事件。结论枸橼酸西地那非片受试制剂和参比制剂具有生物等效性，安全性良好。

关键词：
N-去甲基西地那非
口服药物
安全性
枸橼酸西地那非片
生物等效性
加入收藏

枸橼酸西地那非是治疗勃起功能障碍(erectile dysfunction, ED)的口服药物，其是西地那非的枸橼酸盐，一种环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate, cGMP)特异的5型磷酸二酯酶(phosphodiesterase type 5,PDE5)的选择性抑制药。西地那非对组织中PDE5的抑制，可能是其增强一氧化氮的抗血小板聚集作用、抑制血小板血栓形成以及舒张外周动静脉的基础[1]。本研究针对枸橼酸西地那非片(规格：每片100 mg)开展其在空腹、餐后给药条件下生物等效性试验[2,3],旨在为临床用药提供依据。

一、材料、对象和方法

1 药物与仪器

受试制剂(test, T):枸橼酸西地那非片，规格：每片100 mg, 批号：1120190706,华润赛科药业有限公司生产并提供；参比制剂(reference, R):枸橼酸西地那非片(商品名：万艾可®),规格：每片100 mg, 批号：W97327,美国Pfizer Inc.生产；西地那非对照品，纯度：99.3%,批号：1305-007A1;西地那非-d8(内标，internal standard, IS)对照品，纯度：98.6%(同位素纯度),批号：1390-029A2,N-去甲基西地那非对照品，纯度：99.7%,批号：2617-056A6,N-去甲基西地那非-d8(IS)对照品，纯度：98.8%(同位素纯度),批号：1180-021A4,均购自美国TLC Pharmaceutical Standards。

TRIPLE QUAD 4500质谱仪，美国AB Sciex公司产品；LC-20ADXR高效液相色谱仪(配备Turbo Spray电喷雾离子源),日本Shimadzu公司产品；WinNonlin 8.1软件，美国Pharsight公司产品。

2 受试者选择

本研究经辽宁中医药大学附属医院伦理委员会批准[伦理批号：2019042CS (YW)-019-0l, 临床试验平台登记号：CTR20192043]。所有受试者均签署知情同意书。空腹试验入组男性受试者36例，年龄(30.39±8.09)岁，身高(172.54±4.42)cm, 体质量(66.93±5.39)kg, 体质量指数(22.50±1.98)kg·m-2;餐后试验入组男性受试者36例，年龄(29.33±7.89)岁，身高(171.39±5.35)cm, 体质量(66.40±6.29)kg, 体质量指数(22.61±2.00)kg·m-2。

入选标准①年龄在18周岁以上；②男性体质量≥50.0 kg, 体质量指数在19.0～26.0 kg·m-2;③健康状况良好，无心、肝、肾、消化道、内分泌、血液系统、神经系统及精神异常等疾病者；④在筛选前2周至研究药物最后1次给药后6个月内没有生育计划等。

排除标准①有影响药物吸收的胃肠道疾病史者；②有器质性心脏病史者；③有镰状细胞性贫血或相关贫血史者；④有眼部异常者；⑤过敏体质或食物、药物过敏史；⑥有药物滥用史、家族遗传病史者；⑦在服用研究药物前14 d内服用了任何处方药、非处方药、保健品或草药等。

3 给药方案与血样采集

本试验按随机、开放、双周期、双交叉、单次给药试验设计。

受试者于每周期给药前1天入住Ⅰ期病房，每个周期给药前禁食过夜至少10 h。在试验当天，空腹试验在空腹状态下服用受试制剂或参比制剂各100 mg, 以水240 mL送服；餐后试验在给药前30 min开始进食高脂餐，并在30 min内用餐完毕，在开始进餐后30 min时准时服用受试制剂或参比制剂各100 mg, 以水240 mL送服。2周期间清洗期为7 d。

空腹和餐后给药试验受试者给药前及给药后0.25、0.50、0.75、1.00、1.33、1.67、2.00、2.25、2.50、2.75、3.00、3.50、4.00、6.00、8.00、12.00、16.00、24.00 h每个时间点采集静脉血约4 mL,后置K2EDTA真空采血管中，轻柔颠倒混匀6～8次，在采血后1 h内，在2～8 ℃下，以1 800 r·min-1离心10 min分离血浆样品。分离的血浆样品在2 h内转移到-60 ℃及以下冰箱保存，待测。

4 测定方法与血浆样品处理

色谱条件色谱柱为Durashell C18 Plus(2.1 mm×50.0 mm, 5 μm);流动相：含0.1%甲酸的水溶液(A)-乙腈(B),起始有机相比例20.0%;柱温：35 ℃,流速：1.00 mL·min-1,进样体积：5.00 μL。梯度洗脱程序：0～1.3 min, 60% B;1.3～2.0 min, 90% B;2.0～2.1 min, 20%B。

质谱条件离子喷射电压：5 500 V;用正离子方式检测；离子化模式为多反应监测；西地那非及N-去甲基西地那非的碰撞能量电压分别为10.0和13.0 V;用于定量分析的离子反应分别为m/z 475.3→283.1(西地那非)和m/z 483.4→283.1(IS),m/z 461.3→283.1(N-去甲基西地那非)和m/z 469.3→283.1(IS);质谱采集时间：2.70 min。

血浆样品处理取血浆样品50 μL,加入内标工作液50 μL,涡旋混合3 min。给每个样品加入乙腈400 μL,涡旋混合5 min(在湿冰条件下)。在4 ℃ 下，以1 800 r·min-1离心15 min。取上清液200 μL至96孔板中，涡旋混合3 min, 在进样分析前，将样品处理后的提取物保存在自动进样器的温度下或2～8 ℃的冰箱中。

5 方法学考察与评价

专属性空白人血浆、标准曲线定量下限样品按“血浆样品处理”项下操作后进样分析，结果显示，西地那非和西地那非-d8的保留时间分别为0.89和0.88 min, 空白人血浆样本待测物干扰峰面积小于标准曲线定量下限样品平均待测物峰面积的20%;内标干扰峰的峰面积小于标准曲线定量下限样品中内标峰面积平均值的5.0%,表明血浆中内源性物质不干扰待测物和内标的测定，方法专属性良好，色谱图见图1。

标准曲线与定量下限配制质量浓度分别为4、8、16、50、150、500、900、1 000 ng·mL-1的西地那非人血浆样本，质量浓度分别为2、4、8、25、75、250、450、500 ng·mL-1的N-去甲基西地那非人血浆样本，按“血浆样品处理”项下操作后进样分析。用加权(权重系数1/x2)最小二乘法进行回归运算，求得直线回归方程即为标准曲线。结果显示，西地那非在4.00～1 000.00 ng·mL-1内，线性关系良好，其标准曲线y=1.21×10-2x-3.12×10-3(R2=0.996 3),定量下限为4.00 ng·mL-1;N-去甲基西地那非在2.00～500.00 ng·mL-1内，线性关系良好，其标准曲线为y=2.65×10-2x+2.34×10-3(R2=0.995 7),定量下限为2.00 ng·mL-1。

图1 血浆中2种分析物的典型色谱图

精密度与回收率配制西地那非低、中、高3个质量浓度的质控样本(12.00、400.00和750.00 ng·mL-1),N-去甲基西地那非低、中、高质量3个浓度的质控样本(6.00、200.00和375.00 ng·mL-1),每个质量浓度6份，连续测定3个批次。测得浓度计算精密度变异系数(coefficient of variation, %CV)和准确度相对误差百分率(relative error, %RE)结果见表1。在高、中、低3个质量浓度水平，计算回收率。结果显示，高、中、低3个质量浓度水平西地那非的提取回收率分别为96.93%、101.31%和97.70%,内标提取回收率为104.42%;N-去甲基西地那非的提取回收率分别为99.52%、103.41%和105.92%,内标提取回收率为104.14%。

基质效应在高、低2个质量浓度水平下，以空白人血浆提取样本加西地那非N-去甲基西地那非和内标的峰面积比值与以超纯水代替空白血浆经提取后的样本再加入西地那非N-去甲基西地那非和内标后测得的峰面积比值进行比较，计算基质效应。结果显示，西地那非内标归一化的基质因子的精密度分别为1.92%和4.31%;N-去甲基西地那非内标归一化的基质因子的精密度分别为2.10%和3.34%。

表1 用液相色谱-质谱法测定西地那非、N-去甲基西地那非精密度、回收率结果(n=6)

稳定性全血中分析物在室温和湿冰上放置2 h 稳定。血浆中分析物在湿冰放置24 h 稳定。处理过的样品在自动进样器温度(4 ℃)下存储125 h稳定。血浆中分析物储存在-20 ℃条件下50 d稳定，在-80 ℃条件下61 d稳定。

6 统计学处理

用WinNonlin 8.1软件进行非房室模型药代动力学参数的估算分析，对西地那非、N-去甲基西地那非的药代动力学参数AUC、Cmax和tmax进行统计分析。AUC和Cmax需进行对数转换后进行方差分析，tmax用非参数检验比较2组间差异，其他参数用SAS 9.4®软件进行分析，同时计算2种制剂的主要药代动力学参数的几何均值比的90%置信区间(confidence interval, CI),并进行等效性比较，Cmax、AUC0-t和AUC0-∞等效区间界值设定为80.00%～125.00%。

二、结果

1 试验入组和完成情况

空腹试验筛选100例受试者，餐后试验筛选受试者120例，均入组36例，且均完成试验。

2 血药浓度-时间曲线

健康受试者在空腹和餐后条件下单剂量口服受试制剂和参比制剂100 mg后枸橼酸西地那非片的西地那非、N-去甲基西地那非平均血浆浓度-时间曲线见图2。

3 药代动力学参数

受试者口服受试制剂和参比制剂100 mg后，西地那非、N-去甲基西地那非的平均药代动力学参数，见表2、表3。

4 生物等效性评价

在空腹试验中，受试制剂/参比制剂Cmax、AUC0-t和AUC0-∞几何均值比值(90% CI)分别为80.21%～102.63%、90.83%～102.42%和90.95%～102.32%;在餐后试验中，受试制剂/参比制剂Cmax、AUC0-t和AUC0-∞几何均值比值(90% CI)分别为82.78%～99.28%、93.61%～103.11%和93.47%～102.72%,均落在80.00%～125.00%内。2种制剂在空腹和餐后条件下单次口服给药均生物等效。

图2 健康受试者在空腹(A)和餐后(B)条件下单剂量口服枸橼酸西地那非片受试制剂(T)和参比制剂(R) 100 mg 后西地那非(Ⅰ)、N-去甲基西地那非(Ⅱ)的平均血浆浓度-时间曲线

表2 健康受试者口服枸橼酸西地那非片T和R 100 mg后体内西地那非的平均药代动力学参数

表3 健康受试者口服枸橼酸西地那非片T和R 100 mg后体内N-去甲基西地那非的平均药代动力学参数

5 安全性评价

空腹试验共有12例受试者发生14例次不良事件，不良事件发生率33.33%。餐后试验共有9例受试者发生11例次不良事件，不良事件发生率25.00%。试验过程中无受试者脱落，未发生严重不良事件。

三、讨论

随着年龄的增长，在多种因素的作用之下，很多男性都出现了ED阴茎勃起的生理机制涉及性刺激过程中阴茎海绵体内一氧化氮(nitric oxide, NO)的释放。NO激活鸟苷酸环化酶，导致环磷鸟嘌呤核苷水平增高，使得海绵体内平滑肌松弛血液流入。当性刺激引起局部NO释放时，西地那非抑制PDE5可增加海绵体内环磷鸟嘌呤核苷水平，松弛平滑肌，血液流入海绵体。

本临床试验以评价受试制剂华润赛科药业有限责任公司生产的枸橼酸西地那非片与参比制剂辉瑞制药有限公司生产的枸橼酸西地那非片在空腹口服给药后西地那非的药代动力学特征、生物等效性评价及安全性评估为试验目的。本试验采用液相色谱-串联质谱法分别测定36例健康受试者在空腹及餐后条件下单剂量口服受试制剂和参比制剂后西地那非、N-去甲基西地那非的血药浓度[4]。在空腹及餐后生物样品分析实验中，生物样品处置均在符合方法学验证的条件下进行分析。空腹及餐后生物样品分析实验检测结果精密可靠。

参考文献:

[1]姜辉,戴玉田,邓春华,等.枸橼酸西地那非(万艾可)20周年临床应用中国专家共识[J].中国性科学,2019,7(28):5-14.

[2]朱凤昌,王爱国,郑稳升,等.美国食品药品管理局(FDA)部分《特定药物的生物等效性指导原则》的介绍和分析[J].中国药学杂志,2016,51(18):1615-1621.

[4]国家药品监督管理局药品审评中心.以药代动力学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则[EB/OL].2021-09-08 [2022-09-01].

基金资助:辽宁省中药临床药物代谢动力学重点实验室基金资助项目;辽宁省教育厅课题资助项目(辽教办[2023]274号);

文章来源:李晓斌,陈璐,吴秀君等.枸橼酸西地那非片在中国健康受试者体内的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(03):430-434.