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TCP1在初诊急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

2025-03-26 20 上传者：管理员

摘要：目的：探讨初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中T复合多肽1(TCP1)的表达水平及其与患者临床特征和预后的相关性。方法：收集80例初诊AML患者和30例缺铁性贫血患者骨髓标本，采用实时荧光定量PCR法检测TCP1的表达水平。收集AML患者的临床资料，分析TCP1表达水平与临床特征及预后的关系。使用Kaplan-Meier曲线分析TCP1对AML患者总体生存时间(OS)的影响，Cox回归分析影响AML患者预后的因素。结果：与缺铁性贫血患者相比，TCP1在AML患者中表达明显升高(P<0.01)。与TCP1低表达组相比，TCP1高表达组年龄≥60岁患者和治疗后未缓解患者所占比例较高，患者多伴有TET2基因突变，且预后不良明显增多，而中位OS缩短(均P<0.05)。多因素Cox分析结果显示，年龄、染色体核型异常、疗效及TCP1表达量是影响AML患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论：TCP1在AML患者中明显上调，其表达与部分临床特征及不良预后相关，可作为判断AML患者预后的生物标志物和潜在的治疗靶点。

关键词：
AML
T复合多肽1
急性白血病
急性髓系白血病
恶性血液病
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急性髓系白血病(AML)是一种高度异质性的恶性血液病,约占成人急性白血病的80%[1]｡三分之一的AML患者在标准化疗后没有达到完全缓解,即使达到完全缓解,依然有约70%的AML患者在5年内复发[2-3]｡白血病细胞对化疗药物的耐药性是治疗失败的主要原因之一｡因此,迫切需要寻找新的生物标志物和治疗靶点以提高化疗疗效｡T复合多肽1(TCP1)是含伴侣蛋白的T复合物(CCT)的亚基之一,参与蛋白质折叠､细胞增殖､凋亡､细胞周期调节和耐药[4-7]｡研究表明,TCP1可以促进乳腺癌细胞的生长,TCP1过度表达与乳腺癌患者总生存率降低显著相关[8-9]｡在顺铂耐药的卵巢癌细胞系中发现TCP1高表达,TCP1表达减少会增加顺铂诱导的细胞凋亡以及细胞对顺铂的敏感性[10]｡Weng等[11]研究表明,TCP1通过PI3K/AKT/mTOR通路促进卵巢癌细胞的增殖,因此,TCP1是导致乳腺癌和卵巢癌耐药及发展的一个因素｡然而,TCP1在AML中的作用尚不明确,且未有报道｡本研究选择了80例初诊的AML患者作为观察对象,研究TCP1在初诊AML中的表达情况､临床特征及预后的相关性,探讨TCP1能否作为AML的监测及治疗靶点｡

一、资料与方法

1.患者资料

收集2019年1月至2021年12月蚌埠医科大学第一附属医院血液内科80例AML患者和30例缺铁性贫血(IDA)患者的骨髓标本,所有AML患者均接受1个周期以上的化疗,且经过骨髓细胞学检测评估疗效｡收集的初诊AML患者的临床资料包括性别､年龄､白细胞计数､血红蛋白､血小板计数､骨髓原始细胞比例､FAB分型､核型､基因突变､化疗方案､疗效判断和预后分层等信息｡所有参与者均签署了知情同意书,并得到蚌埠医科大学第一附属医院伦理审查委员会的批准｡

2.试剂与仪器

TRIzol试剂､M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒､2×SGFastqPCR预混液(低Rox)试剂盒､引物均购自中国上海生物工程公司｡AppliedBiosystemsPCR购自赛默飞世尔科技公司;TDZ5A-WS台式低速离心机购自常州金坛恒丰仪器制造有限公司;Eppendorf5415R小型高速冷冻离心机购自武汉爱斯佩科学仪器有限公司;VORTEX-5漩涡混合器购自上海巴玖实业有限公司｡

3.实时荧光定量PCR法检测TCP1表达水平

取骨髓血标本2ml并将其置于EDTA-K2管中,裂解,离心,洗涤,提取单个核细胞,随后使用TRIzol试剂､氯仿､异丙醇等进行总RNA的提取,使用超微量分光光度计SMA1000测量总RNA的纯度与浓度,并确保OD260/280比值在1.8-2.0之间,且浓度在30-70ng/μl之间｡按照M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒说明书反转录出cDNA,在PCR仪上扩增特定DNA片段｡每个样本均设置3个复孔进行对照,并计算其均值,以Actin作为内参基因,采用2-△△Ct法计算TCP1基因相对表达水平｡TCP1上游引物5′-AGTTGGAGATGGCACAAACTTT-3′,下游引物5′-TGGAGGTACGAAGTAGAGATGAG-3′;Actin上游引物5′-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT-3′,下游引物5′-AGGGCACGAAGGCTCATCATT-3′｡

4.基因突变检测

患者的骨髓标本被低温保存,并送至金域医学检验实验室进行二代测序[12],包括对30个基因全外显子序列的单核苷酸变异和小片段插入/缺失的检测,平均测序深度为2000×｡

5.染色体检查

骨髓标本送至合肥金域医学检验实验室进行染色体检查,使用细胞培养G显带方法｡

6.临床疗效评定及随访

本研究中AML患者的诊断､分类､治疗方案及疗效评估均参照2021年中国AML治疗指南[13]｡AML患者出院后均进行了随访,随访时间从确诊日期开始,至2023年8月31日为止｡这段时间被定义为患者的总生存时间(OS)｡

7.统计学分析数据处理和统计学分析应用SPSS22.0软件进行｡AML组和IDA组之间TCP1表达差异比较采用单样本t检验｡为了分析TCP1与临床病理特征的相关性,根据所有AML患者的TCP1相对表达中位数,将患者分为TCP1高表达组和TCP1低表达组,两组的临床特征比较采用Chi-Square检验或者Fisher精确检验｡采用Kaplan-Meier法评估TCP1对患者OS的影响,并采用Cox比例风险模型分析影响AML的预后因素,P0.05为差异有统计学意义｡

二、结果

1.AML患者TCP1的表达情况

实时荧光定量PCR法检测结果显示,TCP1在AML组中的表达水平显著高于IDA组,比较差异具有统计学意义(P<0.01)(图1)｡

2.TCP1的表达与AML患者临床病理特征之间的关系

根据TCP1中位数将AML患者分为TCP1高表达组及TCP1低表达组,比较两组临床特征差异,结果显示,TCP1高表达组中年龄≥60岁患者所占比例明显高于低表达组,比较差异有统计学意义(P<0.05),而性别､白细胞计数､血红蛋白､血小板､骨髓原始细胞比例､白血病FAB分型差异均无统计学意义(P>0.05)(表1)｡

60岁以下的AML患者大多选择伊达比星+阿糖胞苷(IA)方案化疗,不耐受化疗患者选择去甲基化药物(HMA)±包含阿糖胞苷的单药或者联合方案;60岁及以上患者选择使用去甲基化药物(HMA)±包含阿糖胞苷的单药或者联合方案,去甲基药物包括地西他滨及阿扎胞苷;包含阿糖胞苷的方案有:地西他滨+高三尖杉酯碱+阿糖胞苷+粒细胞刺激因子,阿糖胞苷+高三尖杉酯碱+阿糖胞苷+粒细胞刺激因子,地西他滨+阿糖胞苷,阿扎胞苷+阿糖胞苷;应用IA方案有36例,应用HMA±阿糖胞苷方案有44例｡疗效评价完全缓解24例,部分缓解19例,未缓解37例｡统计结果显示,TCP1高表达组未缓解患者所占比例明显高于低表达组(P<0.05),而两组应用化疗方案无差异(P>0.05)(表2)｡

80例AML患者中,核型正常44例,核型异常26例,复杂核型10例;伴有CEBPA､NPM1､FLT3-ITD､DNMT3A､IDH1/2､ASXL1､TP53等基因突变的患者31例;36例具有≥3个基因同时突变,12例具有2个基因同时突变,12例单基因突变,20例无基因突变;根据急性髓系白血病诊疗指南将患者分为预后良好8例,预后中等37例,预后不良35例｡与TCP1低表达患者相比,TCP1高表达患者多伴有TET2基因突变(P<0.05),且预后不良明显增多(P<0.05),而其他基因突变及染色体核型差异均无统计学意义(P>0.05)(表3)｡

3.TCP1表达水平与AML患者预后的关系

Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,TCP1高表达患者的中位OS较低表达患者明显缩短,差异具有统计学意义(P<0.01)｡TCP1高表达可作为判断患者预后不良的潜在指标｡TCP1表达水平对AML患者OS率的影响见图2｡

4.影响AML患者预后的多因素分析

将AML患者的临床资料,包括性别､年龄､FAB分型､骨髓原始细胞比例､白细胞､血红蛋白､血小板､化疗方案､染色体核型､预后风险分层及TCP1表达量等因素纳入多因素Cox风险回归模型中进行分析,结果显示,年龄､染色体核型异常､疗效及TCP1表达量是影响AML患者预后的独立危险因素(均P<0.05)(表4)｡

三、讨论

TCP1是伴侣素CCT/TRIC复合物的α亚基,又称CCT1｡CCT/TRIC复合物广泛存在于真核细胞的胞浆中,由8个不同的亚单位(α､β､γ､δ､ε､ζ､η和θ)组成[14]｡研究发现,TCP1表达水平的升高与肿瘤密切相关｡许多肿瘤都有TCP1表达,包括胃癌､结直肠癌､肺腺癌､肝癌及乳腺癌[15-19]｡Yin等[20]研究发现,CCT/TRIC复合物的θ亚基(CCT8)在大多数非霍奇金淋巴瘤组织中呈高表达,并且与Ki-67､国际预后指数和化疗疗效有关｡TCP1在AML中的研究极少,仅有研究表明在白血病细胞K562中,CCT/TRIC复合体通过帮助多肽正确折叠,促进细胞凋亡,维持细胞自我稳定的状态｡

本研究结果显示,与IDA患者相比,TCP1在初诊AML患者中表达明显增高;与TCP1低表达患者相比,TCP1高表达患者中位OS明显缩短,由于TCP1在AML中的研究极少,因此无法与其他研究结果相比较,但是此结果与TCP1在其他肿瘤中的研究结果相似[11,16],进一步研究发现TCP1可以通过调控P53的活性影响Wnt7b/β-catenin通路从而促进肿瘤的增殖及迁移,在肿瘤治疗中发挥不良影响[21]｡对AML临床特征进行比较发现,TCP1在年龄≥60岁的AML中表达增高,且与疗效不佳相关,推测可能因为≥60岁的AML患者体质较差､并发症多,且易出现多种基因突变,不宜接受强化疗,化疗疗效不佳｡有研究表明,TCP1可以通过激活AKT/mTOR信号传导抑制自噬来增加AML的耐药性[7]｡本研究结果显示,TCP1高表达患者易出现TET2基因突变,这同时证实TCP1高表达与预后不良相关,同时推测TET2抑制剂可能对TCP1高表达患者治疗有效｡多因素Cox回归结果分析显示,AML发病年龄､染色体核型异常､化疗疗效及TCP1表达量是影响AML患者预后的危险因素｡

本研究结果显示,TCP1在AML中高表达,TCP1与AML的部分临床特征具有相关性,且TCP1高表达患者具有较差的OS｡下一步仍需要扩大样本量以进行AML亚组分析和更长时间的随访以进一步证实TCP1对患者生存的影响｡目前对于TCP1在AML中的调控机制尚不明确,需要更进一步的深入研究｡本研究亦存在一定的局限性,如部分患者为M5亚型,还有部分患者年龄大于60岁,此类患者对化疗不敏感,易出现耐药;由于部分患者年龄较大,无法进行异基因造血干细胞移植,也就无法评估移植是否能够改善TCP1高表达的不良预后｡

综上所述,TCP1可能是AML患者新的预后生物标志物和潜在的治疗靶点,但本研究结果未来还需要更进一步的研究来验证,以确定TCP1在AML治疗中的临床应用价值｡

参考文献:

12曾秀凤,许振朋,黄辉,等.遗传病二代测序临床检测全流程规范化共识探讨(2)——样品采集处理及检测.中华医学遗传学杂志,2020,37(3):339-344.

13中华医学会血液学分会白血病淋巴瘤学组.中国成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)诊疗指南(2021年版).中华血液学杂志,2021,42(8):617-623.

基金资助:安徽省自然科学基金青年项目(2108085QH324);安徽省卫生健康科研重点项目(AHWJ2023A10059);

文章来源:李佳佳,伍燕平,刘林,等.TCP1在初诊急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义[J].中国实验血液学杂志,2025,33(02):339-343.