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家蚕受昆虫病原线虫(EPN)安全性影响讨论

2020-07-10 237 上传者：管理员

摘要：[目的]以家蚕为试虫,测定昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)对家蚕的安全性。[方法]EPN对家蚕的侵染试验参照《农药生物活性测试标准操作规范》(杀虫剂卷)所述鳞翅目幼虫喷雾法和浸叶饲喂法进行；EPN对家蚕安全性试验参照《化学农药环境安全评价试验准则》第11部分——家蚕急性毒性试验方法进行。[结果]当浓度为15亿线虫/hm2时,结果显示存在一定的风险。病原线虫喷施后6 h内取桑叶喂食,可显著影响家蚕虫的结茧率和化蛹率,存在一定的风险,但6 h后的桑叶喂食则对其没有显著影响。[结论]严格控制施药后的间隔时间,EPN制剂可在蚕桑地区使用。

关键词：
安全性评价
家蚕
寄生性天敌
昆虫病原线虫
植物保护
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昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)是昆虫的专化寄生性天敌，具有分布范围广、寄主种类多、能主动寻找寄主、对人畜及环境安全等优点，并能够人工大量培养繁殖，在欧美、澳大利亚、韩国、日本等地区得到广泛应用[1,2,3]。EPN主要通过寄生土壤中幼虫和蛹而达到防控害虫的效果[4]。线虫通常以感染期幼虫经害虫身体的自然孔口或节间膜侵入寄主体内，释放携带的共生细菌[5]，后者在昆虫血淋巴内增殖，杀死寄主昆虫。感染期幼虫是昆虫病原线虫生活史中唯一能自由存活的龄期，可使用普通的喷雾器进行喷施[6]。近年来，EPN制剂已成功用于防治地老虎、蛴螬、黄条跳甲等多种地下害虫[7,8,9]。随着EPN的推广应用，王宇坤等[10]研究了其对蚜茧蜂寄生的影响，除此以外，鲜见EPN对非靶有益生物的影响研究。

利用室内生物活性测定和田间试验比较了EPN对家蚕的急性毒性及其生产力的影响，评价其对家蚕的安全性，以期为科学使用EPN防治害虫及综合评估EPN对有益生物的影响提供数据。

1、材料与方法

1.1试验材料与设备

EPN制剂：绿保安昆虫病原线虫1亿尾/袋(小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae All，浙江绿神天敌生物技术有限公司)，使用时将海绵制剂浸泡在适量水中用力挤压，洗2～3次(海绵发白为止)成为母液，母液对水50 L均匀粗喷洒于桑叶表面。供试家蚕品种：秋丰×白玉，家蚕龄期2龄(4 d)；供试桑品种：农桑12号。Poter喷雾塔：英国Burkard。

1.2试验设计

1.2.1 EPN对家蚕的侵染试验

1)虫体喷雾直接侵染试验

将EPN制剂用无菌水分别稀释至约2000、1000、500尾/mL 3个密度的线虫悬浊液，供试。取孵化期一致的2龄期家蚕幼虫，至培养皿中，每皿20头幼虫，参照鳞翅目幼虫喷雾法[11]，用Poter喷雾塔喷雾处理。每个密度重复3次，并设空白对照。处理后，将试虫移至干净的桑叶上，置于25℃人工气候箱中，光周期设定为14 h/10 h(光/暗)，相对湿度85%。分别于处理后24、48、72 h检测试虫的状态，统计死亡数，并对死亡的幼虫进行解剖，统计体内的线虫数量[12]。72 h时终止试验，并对不同处理的试虫进行解剖，观察线虫对试虫的侵染，并统计线虫数。

2)桑叶喷雾间接侵染试验

按本节1)所述准备线虫悬浊液和家蚕幼虫，并将新鲜桑叶打成5 cm直径的圆片。用Poter喷雾塔喷雾将线虫分别喷到准备好的桑叶上，每处理3次重复，喷雾后，阴凉处避光晾30 min(桑叶上没有滞水)，将事先准备好的家蚕幼虫移到桑叶上，每个重复20头幼虫，然后移入人工气候箱中培养，随后处理同1)所述。

1.2.2 EPN对家蚕安全性试验

在田间用15亿尾/hm2EPN制剂悬浮液喷施桑树叶片，对水750 L/hm2喷雾，采用工农16 L型手动背负式农用喷雾器。EPN制剂喷施桑叶后，间隔0、6、24、48 h采收桑叶同时采收空白对照组的桑叶，分别饲喂家蚕，每个重复(EPN和空白)用蚕60头，每处理重复3次，每次饲喂均查看家蚕生命力相关的状况。48 h后，所有处理组均恢复饲喂正常的桑叶，按常规技术进行管理，直至家蚕吐丝结茧。

家蚕安全性试验观测指标：定时调查家蚕的死亡率(存活率)、化蛹率(结茧率)等指标，化蛹10 d后称量全茧量和茧层量，计算茧层率[13]，并采用DPS数据处理系统对防效数据进行Duncan′s新复极差法(DMRT)进行差异显著性分析，综合分析虫蛹生命力和茧质成绩等指标。

2、结果与分析

2.1 EPN对家蚕侵染试验

直接喷施，线虫可侵染家蚕幼虫(见表1)，试验结果显示侵染率和线虫密度没有线性关系，3个处理间的线虫侵染率在67%～75%之间，没有显著性差异(P<0.05),72 h后死亡率和处理密度也没有表现出线性关系。但幼虫体内的平均线虫数，3个处理间有显著差异，随着处理密度的增加，幼虫体内的线虫数显著增加。

喷洒桑叶的试验结果显示：线虫并不能侵染家蚕幼虫，试验期间各处理组的家蚕平均死亡率和对照组相当(均小于5%),72 h后对所有处理组的家蚕解剖发现，在幼虫体内没有发现目标线虫，表明该方法线虫并不能直接侵染家蚕。由于未进行消化道解剖，尚不能确定线虫是否通过口器进入虫体，并在虫体内存活。

表1 EPN对家蚕幼虫的侵染试验

2.2 EPN对家蚕安全性影响

EPN处理桑叶后马上(0 h)采集的桑叶喂食，家蚕的结茧率和化蛹率显著低于对照组；处理后间隔6 h采集的桑叶喂食，对家蚕结茧率没有明显影响，与对照比较没有显著差异；处理后24、48 h采集的桑叶饲喂家蚕，对其虫蛹生命力和茧质量没有显著影响(见表2)。

表2线虫处理对家蚕虫蛹生命力和茧质成绩的影响

3、小结与讨论

田间防效试验文献表明：昆虫病原线虫对叶菜上黄条跳甲具有较好的控制效应，连续施用2次后，综合防效与化学药剂相当，显著高于生物制剂[14,15]。本试验结果显示：直接喷施对家蚕有较大的影响，可导致60%供试家蚕的死亡；但是喷施于桑叶上的线虫，对家蚕的直接侵染力很差，试验结果显示并不能致死；桑园田间试验结果表明：昆虫病原线虫喷施桑叶后6 h内取桑叶喂食，对家蚕结茧率和化蛹率有较大影响，6 h以上(含6 h)喂食则对家蚕虫蛹生命力和茧质成绩没有显著影响，考虑到实际生产中一般是由于漂移至桑叶上，因此建议该线虫制剂对家蚕的安全间隔期为6 h，在蚕桑区推广要注重宣传，防止和减少对家蚕的毒副作用。

昆虫病原线虫作为一种有潜能的生物防治因子[4]，可直接取代部分化学农药的应用，减少化学农药的用量，为蔬菜病虫害绿色防控技术提供了新方法，具有非常广阔的应用前景。其对家蚕生命力的影响，尤其是其作用机制还有待于进一步研究。

参考文献:

[1]郝杰,杨晴,李天慧,等.一种新的昆虫病原线虫固体培养基及其参数优化研究[J].中国植保导刊,2017,37(6):14-18,65.

[3] GAUGLER R,许艳丽译.昆虫病原线虫学[M].北京:科学出版社,2017:325.

[5]张中润,曹莉,刘秀玲,等.昆虫病原线虫Steinernema longicaudum X-7增效药剂的筛选[J].昆虫知识,2006,43(1):68-73.

[6]范芳芳,徐成体.昆虫病原线虫应用及研究概况[J].青海畜牧兽医杂志,2014,44(2):37-39.

[7]颜珣,韩日畴.生物杀虫剂-昆虫病原线虫的培养技术[J].环境昆虫学报,2016,38(5):1044-1051.

[8]颜珣,郭文秀,赵国玉,等.昆虫病原线虫防治地下害虫的研究进展[J].环境昆虫学报,2014,36(6):156-162.

[9]王连华,胡辉,许峰.昆虫病原线虫防治黄条跳甲试验[J].上海蔬菜,2019(2):49-50.

[10]王宇坤,徐冰,王小平,等.昆虫病原线虫对烟草根结线虫及蚜虫病虫害以及蚜茧蜂寄生的影响[J].农业资源与环境学报,2017,34(3):293-298.

[11]顾宝根,刘学周.农药生物活性测试标准操作规范---杀虫剂卷[M].北京:化学工业出版社,2016.

[12]崔建臣,张建华,张桂娟.改进型线虫分离器分离线虫及计数方法比较[J].植物检疫,2004,18(5):275-276.