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动态定量检测巨细胞病毒抗体诊断宫内感染的临床研究

2025-03-17 4 上传者：管理员

摘要：目的：探讨巨细胞病毒（CMV）抗体动态定量检测在评估胎儿CMV感染风险中的意义。方法：以惠州市中心人民医院2019年8月至2022年3月171例孕妇CMV IgM抗体ELISA法筛查结果为阳性/弱阳性的孕妇为研究对象，采用电化学发光法（ECLIA）检测IgM和IgG水平，并在2～4周后复查；同时采用实时PCR荧光探针法进行CMV核酸检测，并跟踪随访胎儿结局。结果：171例病例中，CMV IgM抗体ELISA（+）/ECLIA（-）标本有135例，IgG抗体均为阳性，且2～4周后水平稳定，其中1例因胎儿诊断为重型β地中海贫血于19+5周引产，其余所产胎儿状况良好。IgM抗体ELISA（+）/ECLIA（+）标本有36例，1例为IgG抗体阴性；2～4周后复查IgM抗体仍为阳性、有35例IgG抗体水平稳定，所产胎儿状况良好；1例IgM抗体水平下降而IgG抗体水平明显升高，尿CMV DNA水平逐渐下降，胎儿引产病理诊断为播散性先天性CMV感染。结论：ELISA法检测CMV IgM抗体的假阳性率明显高于ECLIA法，动态定量检测可有效排除干扰。CMV IgM、IgG抗体和尿DNA水平变化明显的孕产妇宫内感染风险高，胎儿先天性CMV感染的概率高。

关键词：
先天性感染
动态定量检测
孕期筛查
宫内感染
巨细胞病毒
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巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）是引起胎儿先天性感染最主要的病原体之一，正常人群感染后，一般会发展为潜伏感染或长期带毒状态。妊娠妇女CMV活动感染一般无特异的临床症状，病毒可通过胎盘感染胎儿，引起先天性宫内感染及围生期感染。出生时无症状的新生儿有10%~15%会出现后遗症，如视力障碍、智力发育迟缓、先天性感音神经性耳聋等，甚至可导致胎儿早产、流产、死胎等严重后果［1-4］。目前，CMV IgM仍为优生优育检测项目之一，普遍用于孕期筛查。然而，IgM阳性并不都为急性感染期，由于检测方法与个体免疫差异，IgM抗体出现“假阳性”并不少见［5］。这不仅给孕妇带来心理负担，也给临床诊治带来困扰［6］。本研究对怀疑CMV感染的孕妇进行抗体动态定量检测，为胎儿是否感染提供诊断依据。

1、资料与方法

1. 1　资料　

1. 1. 1　一般资料　

选取惠州市中心人民医院2019年8月至2022年3月的171例妊娠期孕妇采用ELISA法进行CMV感染筛查，结果为IgM抗体阳性/弱阳性的孕妇为研究对象，年龄17~49岁，平均年龄（30±5）岁，孕9~15周，平均（12±2）周。本研究方案经惠州市中心人民医院临床科研伦理委员会批准，研究对象均知情同意。

1. 1. 2　试剂和仪器　

CMV IgM和IgG定量检测试剂盒购自罗氏诊断产品（上海）有限公司，检测仪器为罗氏cobase 602电化学发光免疫分析仪。CMV核酸检测采用广州中山大学达安基因股份有限公司试剂盒，检测仪器为美国ABI 7500荧光定量PCR仪。

1. 2　方法　

CMV IgM和IgG动态定量检测结果判读流程：孕期采用ELISA法进行CMV感染筛查结果为IgM抗体阳性/弱阳性的标本同时进行电化学发光法定量检测，间隔2~4周后复查1次。结合两次结果的变化情况，根据图1判断孕妇是否感染和感染类型。

2、结果

2. 1　两种方法检测171例孕妇血清CMV IgM抗体结果　

171例孕妇中，ELISA法检测结果46例为弱阳性（占26. 9%），其中41例ECLIA法为阴性（占23. 98%）、5例为阳性（占2. 92%）；ELISA法检测结果125例为阳性（占73. 1%），其中94例ECLIA法为阴性（占54. 97%）、31例为阳性（占21. 05%）；两种方法结果一致的有36例（占21. 05%），不一致的有135例（占78. 95%）。见表1。

2. 2 171例孕妇CMV感染状况与胎儿出生情况　

171例孕妇中，未感染1例（占0. 58%），所产胎儿状况良好；确诊CMV复发感染1例，复发感染率为0. 58%；IgM持续阳性共34例（占19. 88%），所产胎儿状况良好；135例（占78. 96%）孕妇为既往感染，其中1例因胎儿诊断为重型 β 地中海贫血于19+5周引产，其余所产胎儿状况良好。具体见表2、表3。

图1　母体感染类型判读流程图

表1　入组孕妇ELISA法与ECLIA法检测CMV IgM抗体结果

表2　入组孕妇CMV感染状况

表3　入组孕妇妊娠结局及新生儿出生情况

图2　患者孕期及引产后CMV IgM、IgG抗体和尿DNA水平变化情况

2. 3复发感染孕妇CMV抗体与DNA的变化情况及引产胎儿情况　

监测患者孕期及引产后CMVIgM、IgG抗体和尿DNA水平变化情况，IgM抗体和尿DNA水平逐渐下降；IgG抗体水平在感染早期呈翻倍升高，后期水平相对稳定。见图2。羊水DNA大于1×105拷贝/ml，引产胎儿病理诊断为播散性先天性CMV感染。

3、讨论

目前，针对孕妇CMV感染筛查主要为ELISA法检测血清抗体，阳性结果也无法判断胎儿是否发生感染。人体感染CMV后会产生特异性抗体，血清中IgM、IgG水平可反映病毒的存在。然而，CMV感染后IgM、IgG抗体为动态改变，IgM抗体阳性结果不能确定被检者是否感染或区分感染类型，难以评估预后。相关报道明确指出，抗体动态定量结果分析可有效排除假阳性结果干扰，避免过度干预和减少临床诊断困惑［7-9］。IgM抗体检测结果为阳性时，除了提示近期感染外，还需考虑是否存在IgM假阳性的情况。出现“假阳性”的常见原因主要有以下两个方面：检测技术的局限性；被检者个体免疫特性［5］。本研究171例标本中，有135例（占78. 95%）标本ELISA法为阳性或弱阳性，而ECLIA法为阴性，导致这种结果的影响因素主要考虑ELISA法检测技术的局限性。相关研究证实，ECLIA法阴性结果特异性明显高于其他方法［10］。首先，ECLIA法具有特异性好、灵敏度高的特点，其分子重组抗原与使用细胞裂解产物产生抗原的ELISA法相比，特异性重组抗原检测不存在干扰问题，不受类风湿因子、冷凝集素、天然血型抗体、自身免疫性抗体等干扰。其次，影响ELISA法结果的因素较多，导致室内质控变异系数较大。影响其结果判读的主要因素包括：微孔板包被的均一性和吸附性不同、加样时间、温育时间、反应时间、手工稀释倍数等。另外，在171例孕妇中，有34例（占19. 88%）为IgM持续阳性，考虑是受被检者个体免疫因素影响。TANIMUTRA等［11］报道提到，部分患者在CMV感染6~9个月后依旧能检测到IgM阳性，假阳性率为15%~20%。REVELLO等［12］研究显示，部分患者在CMV急性感染后IgM抗体仍会以低水平阳性持续存在于患者血清中。本研究通过ECLIA动态定量检测法有效地排除了ELISA法单次检测的干扰，从而减少了不必要的临床干预。有研究表明，先天性CMV感染的早期诊断和抗病毒药物治疗可改善有症状感染患儿的神经系统预后［11，13］。因此，寻找科学规范的先天性CMV感染产前检测方案，可以确保准确诊断、早期治疗，并降低婴儿出现严重后遗症概率［14］。

本研究采用ECLIA动态定量检测法对孕早期怀疑CMV感染的孕妇进行动态追踪，根据结果判定流程判断孕妇是否感染和感染类型，并随访至胎儿出生，为产前筛查和诊断提供参考依据。34例IgM、IgG同时阳性孕妇经孕前指导后选择继续妊娠，所产胎儿出生均正常。1例IgM阳性、IgG阴性孕妇经动态定量结果判断为假阳性，胎儿出生未见异常。值得关注的，1例孕妇IgM、IgG水平随着病情的发展变化明显，其IgM水平逐渐降低至阴性、IgG水平翻倍升高至相对稳定状态；检测尿液CMV DNA含量，DNA水平逐渐降低。羊水DNA大于1×105拷贝/ml确诊为宫内感染［15］，同时两次超声结果出现异常，该孕妇选择终止妊娠，引产胎儿病理诊断为播散性先天性CMV感染。该病例提示IgM、IgG水平发生明显变化时，CMV活动性感染风险较高，需进一步进行产前诊断。

综上所述，CMV IgM抗体作为诊断指标，不应根据单一的实验结果诊断患有感染性疾病，必须结合患者病史、临床检查和其他临床资料综合评估检测结果。ELISA法检测CMV IgM抗体的假阳性率明显高于ECLIA法，抗体动态定量检测可有效排除干扰。CMV IgM、IgG抗体和尿DNA水平变化明显的孕产妇宫内感染风险高，胎儿先天性CMV感染的概率高。

参考文献:

[3]张新艳,方峰.巨细胞病毒感染对细胞线粒体结构和功能影响的研究进展[J].中华实验和临床病毒学杂志,2019,33(1):103-107.

[5]朱宇宁,张龙.孕前及妊娠期TORCH血清学IgM阳性的实验室对策[J].中华检验医学杂志,2020,43(5):520-524.

[7]章锦曼,阮强,张宁,等. TORCH感染筛查､诊断与干预原则和工作流程专家共识[J].中国实用妇科与产科杂志,2016,32(6):535-540.

[8]全军计划生育优生优育专业委员会.妊娠期ToRCH筛查指南[J].解放军医药杂志,2014,26(1):102-116. DOI:10. 3969/j.issn. 2095-140X. 2014. 01. 031.

[9]朱宇宁,尚世强,陈英虎,等. TORCH实验室规范化检测与临床应用专家共识[J].中华检验医学杂志,2020,43(5):553-561.

[15]姚丽,张梅,郭先成.孕妇巨细胞病毒感染载量与胎儿宫内感染的相关性分析[J].中华医院感染学杂志,2015,25(15):3550-3552. DOI:10. 11816/cn. ni. 2015-142315.

基金资助:惠州市科技计划基金项目(2022CZ010047);

文章来源:邱佩绵,梁雪雁,温瑛梦,等.动态定量检测巨细胞病毒抗体诊断宫内感染的临床研究[J].中国免疫学杂志,2025,41(02):398-401.