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新疆部分地区猪群伪狂犬病毒的抗体检测探究
摘要：为调查2019年新疆部分地区猪群伪狂犬病毒（pseudorabiesvirus,PRV）免疫抗体水平和野毒感染情况，试验应用猪伪狂犬病毒gB、gE抗体检测试剂盒对采集的8个规模化猪场441份血清样品进行PRV-gB和PRV-gE两种蛋白的抗体检测。结果显示：8个规模化猪场PRV-gB平均抗体阳性检出率为90.93%，其中B、C、F场平均抗体阳性检出率均为100.00%,A场平均抗体阳性检出率最低，为16.00%。8个规模化猪场PRV-gE平均抗体阳性检出率为44.67%，其中B场平均阳性检出率最高，为92.47%。A场和D场平均阳性检出率最低，为0。对不同生长阶段的猪群分析，PRV-gB抗体阳性检出率最高为种公猪95.95%，最低为保育猪75.00%;PRV-gE抗体阳性检出率最高为后备母猪78.95%，最低为育肥猪11.43%。试验表明，新疆部分地区猪群存在野毒感染，各养猪场之间、不同生长阶段感染情况不一。该试验可以为新疆部分地区猪场PR防控与净化提供参考。
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猪伪狂犬病（pseudorabies,PR）是由猪伪狂犬病病毒（pseudorabiesvirus,PRV）引起的具有急性、热性、高度接触性的一种疫病，多在家畜和野生动物之间传播。该病在我国广泛存在，根除难度大，对我国养猪业危害严重[1]。目前PRV唯一的自然贮存宿主是猪[2]。健康猪被PRV感染后，可引起高热症状，易引起妊娠母猪流产，仔猪呼吸道综合征、生长发育受阻等，仔猪死亡率高[3]。世界动物卫生组织（OIE）已将猪伪狂犬病纳入必须报告的动物传染病，猪伪狂犬病也被我国列为Ⅱ类动物传染病之一[4]。疫苗的有效免疫是控制PR的有力保障。目前，gE基因缺失苗是防控猪伪狂犬病常用疫苗，并配套使用相应的PRV-gB和PRV-gE蛋白ELISA检测方法来监测猪群猪伪狂犬病的发病情况，试验证实此方法简单、快捷、灵敏性和特异性高，对预防猪群PR和及时净化猪场PRV起到一定的作用[5,6]。为调查新疆部分地区猪群PRV免疫水平和野毒流行的情况，于2019年1月至12月间从新疆境内的8个规模化猪场采集441份血清样品，应用PRV-gB、PRV-gEELISA检测方法对其进行抗体检测与分析，以期为新疆地区生猪养殖的PR防控提供参考。
1、材料与方法
1.1样品来源
样品采自新疆巴州、伊犁、塔城、阿克苏、奎屯、石河子6个地区共441份血清样品。其中，哺乳仔猪80份、保育猪44份、育肥猪35份、后备母猪38份、经产母猪170份、种公猪74份。
1.2材料和仪器
猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)ELISA检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)ELISA检测试剂盒均购自北京爱德士元亨生物科技有限公司，自动酶标仪购自BioTek公司。
1.3试验方法
1.3.1采集样品
在猪前腔静脉处使用一次性兽用采血器采血3～5mL/头，室温静置，待血清析出后，移取1mL血清于无菌的1.5mLEP管中，EP管依次对应标记，4000r/min离心10min，立即进行ELISA检测或放到-20℃冰箱保存备用。
1.3.2检测方法
根据猪伪狂犬病病毒gB、gE蛋白ELISA检测试剂盒说明书操作。室温下，待检血清、阳性对照、阴性对照均需要进行1∶1稀释处理。随后在抗原包被板的微孔中添加稀释的待检血清和阴、阳对照各100μL，常温孵育60min。经3次洗涤，注意第3次洗涤必须彻底去除微孔残余液体。相应微孔中加入100μL酶标抗体，孵育后20min，再经3次洗涤，每孔加入100μLTMB溶液，暗室放置15min，加入50μL终止液终止反应，测量各反应孔中的OD650nm值，进行结果判定。
1.3.3结果判定
判定本试验成立的条件是：NC-PC≥0.30，否则结果不成立。S为各样品OD650nm值，PC、NC表示阳性孔和阴性孔OD650nm值的平均数。若S/N>0.70，样品判定为gB或gE抗体检测阴性；若S/N≤0.60样品判定为阳性；若0.6
1.3.4数据统计与分析
用SPSS20.0统计软件进行试验数据的统计分析，P<0.05为差异显著。
2、结果与分析
2.1不同地区规模化猪场PRV-gB蛋白抗体水平（见表1和表2)
由表1可知，对新疆部分地区8个规模化猪场（A～H)441份血清进行检测发现，PRV-gB抗体阳性有401份，平均阳性检出率为90.93%。A～H场gB抗体的阳性检出率依次为16.00%、100.00%、100.00%、74.29%、99.00%、100.00%、94.32%、92.86%。其中，A场的阳性检出率最低，为16.00%。B、C、F场阳性检出率均为100.00%。A～H各猪场的S/N的均值依次为0.8727、0.0652、0.0649、0.3964、0.1169、0.0368、0.1828、0.2052。其中，A场的S/N值大于0.70，其余7场S/N值均小于0.60，最小值为0.0368，最大值为0.8727。
由表2可知，不同猪场之间猪伪狂犬病毒gB蛋白平均抗体水平存在差异，A场和B、C、D、E、F、G、H7个场差异显著（P<0.05);D场和B、C、E、F、G、H6个场差异显著（P<0.05);H场和B、C、E、F4个场差异显著（P<0.05);G场和B、E、F3场差异显著（P<0.05);E场和B、C、F3个场差异不显著（P>0.05）。
表1新疆部分地区猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体ELISA检测结果
表2猪场间猪伪狂犬病毒gB蛋白平均抗体水平多重比较
2.2不同地区规模化猪场PRV-gE蛋白抗体水平（见表3和表4)
由表3可知，经过对新疆部分地区8个规模化猪场（A～H)441份血清进行检测发现，PRV-gE抗体阳性有197份，平均阳性检出率为44.67%。A～H场gE抗体的阳性检出率依次为0.00%、92.47%、25.00%、0、19.00%、81.25%、38.64%、51.79%。其中，A、D场的阳性检出率均为0,B场的阳性检出率高为92.47%。A～H各猪场平均S/N的值为0.9689、0.1766、0.9371、0.9499、0.8296、0.2816、0.6906、0.6865。其中，B场平均S/N值最小，为0.1766;A场平均S/N值最大，为0.9689。
表3新疆部分地区猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体ELISA检测结果
表4猪场间猪伪狂犬病毒gE蛋白平均抗体水平多重比较
由表4可知，不同猪场之间猪伪狂犬病毒gE蛋白平均抗体水平存在差异，B场和A、C、D、E、G、H6场差异显著（P<0.05);F场和A、C、D、E、G、H6场差异显著（P<0.05);H场和A、C、D、E4场差异显著（P<0.05);G场和A、C、D、E4场差异显著（P<0.05);E场和A、C、D3场差异不显著（P>0.05）。
2.3不同类别猪群的PRV-gB、PRV-gE蛋白抗体水平（见表5和表6)
由表5可知，按照不同类别的猪群分别检测其gB抗体水平，在441份样品中检测出400份阳性血样，PRV-gB蛋白抗体平均阳性检出率为90.70%，平均S/N值为0.1882。哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的gB蛋白抗体阳性检出率分别为87.50%、75.00%、80.00%、94.74%、95.29%、95.95%。其中，种公猪抗体阳性检出率最高，为95.95%，其次是经产母猪，为95.29%，保育猪检出的阳性检出率最低，为75.00%。
表5试验猪场不同类别猪群的PRV-gB蛋白抗体水平
由表6可知，不同类别猪群的PRV-gE总体的gE蛋白抗体阳性检出率为44.67%，平均S/N值为0.6278。哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的gE蛋白抗体阳性检出率分别为31.25%、20.45%、11.43%、78.95%、56.47%、44.59%。不同类别猪群之间的猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体水平存在差异。其中，后备母猪阳性检出率最高，为78.95%，其次是经产母猪，为56.47%，育肥猪检出的阳性检出率最低，为11.43%。
表6试验猪场不同类别猪群的PRV-gE蛋白抗体水平
3、讨论
3.1各猪场及不同猪种间PRV-gB蛋白抗体水平
PR是一种急性、烈性传染病，也是威胁我国规模化猪场主要疫病之一，能够导致妊娠母猪流产或产死胎[7]。本试验对所采集的441份血样进行PRV-gB蛋白ELISA检测，分析可知，8个规模化猪场PRV-gB抗体阳性检出率为90.93%，其中B、C、F场抗体阳性检出率高为100.00%,A场阳性检出率较低为16.00%（该猪场属于伪狂犬非免疫场），表明调查猪场伪狂犬免疫效果良好。不同猪种间的PRV-gB蛋白抗体阳性检出率达到90.70%。种公猪、经产母猪的阳性检出率相对较高，分别为95.95%、95.29%，说明这两类猪群可能进行了多次伪狂犬疫苗免疫，抗体水平相对稳定而且抗感染能力较强。保育猪的抗体阳性检出率较低为，75.00%。由于仔猪离开母猪，进入保育期间无法从母乳中获取相关母源抗体，再由于免疫次数相对较少，致使该阶段的猪群抗体阳性检出率较低。因此，对仔猪及时进行免疫接种来弥补母源抗体摄入不足是防控该病的重要环节[8]。
3.2各猪场及不同猪种间PRV-gE蛋白抗体水平
除A场外，本试验的其他7个规模化猪场均使用PRV-gE缺失株疫苗。本试验检测的8个猪场中有6个场存在伪狂犬野毒感染情况。共检测出197份阳性血清样品，平均阳性检出率为44.67%。2005年，张鲁安[9]报道，PRV-gE抗体阳性检出率为10.1%。2014年，齐向涛[8]报道，新疆境内的7个规模化猪场PRV-gE抗体阳性检出率为27.8%。2016年，刘鸽等[10]检测新疆境内PRV-gE抗体阳性检出率为14.91%。2018年，魏其等[6]检测北疆地区6个规模化猪场PRV-gE蛋白抗体阳性检出率为45.14%。上述结果说明，PRV-gE蛋白抗体阳性水平较2018年前有较大升高。各猪场PRV-gE蛋白抗体阳性检出率差异显著，B场和F场感染野毒检出率较高，为92.47%和81.25%,D场感染野毒检出率较低，为0%，此差异可能与各猪场的饲养环境、管理人员专业素质、防疫防控意识等因素有关。
4、结论
综上所述，新疆部分地区规模化猪场PRV-gB蛋白抗体水平均达到国家标准，但PRV野毒感染在新疆部分地区规模化猪场呈普遍存在现象，各猪场之间、不同生长阶段防控水平层次不一，有待全面加强该病的防控。
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基金:国家自然科学基金项目(U1503283);八师石河子市农业科技攻关计划(2013NY04);石河子大学成果转化与技术推广计划(CGZH201908)
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主管单位：中华人民共和国农业农村部
主办单位：中国动物卫生与流行病学中心
出版地方：山东
专业分类：农业
国际刊号：1005-944X
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2020-10-14
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