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ZSWIM4在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及临床意义

2024-11-15 15 上传者：管理员

摘要：目的:探究ZSWIM4在卵巢组织中的表达情况及其与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理参数及预后的关系。方法:通过免疫组织化学染色法检测129例卵巢组织(恶性肿瘤组74例、交界肿瘤组17例、良性肿瘤组21例和正常组17例)中ZSWIM4的表达情况，分析其与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理参数及预后的相关性。结果:ZSWIM4主要定位于细胞核，细胞质中亦有一定表达。ZSWIM4在卵巢浆液性囊腺癌组织中的阳性、强阳性表达率为(87.8%&63.5%)明显高于交界肿瘤组(52.9%&23.5%)及良性肿瘤组(23.8%&4.8%)及正常组(11.8%&5.9%)(P<0.01)。ZSWIM4表达水平同患者的年龄、FIGO分期、肿瘤分化程度及淋巴结是否转移之间无显著相关性(P>0.05)。ZSWIM4高表达的患者生存期明显缩短(P<0.05),可作为患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:ZSWIM4在卵巢浆液性囊腺癌组织中高表达且影响患者生存预后，有望作为新的诊疗生物标志物，用以预后风险评估，作为临床治疗的潜在靶点。

关键词：
ZSWIM4
免疫组织化学
卵巢浆液性囊腺癌
卵巢癌
妇科恶性肿瘤
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卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，由于疾病早期缺少特异性症状及缺乏早期筛查手段，超过70%的卵巢癌患者诊断时疾病已进展至中晚期，丧失最佳诊疗机会[1]。卵巢浆液性囊腺癌是卵巢癌中最常见、最具侵袭性的亚型，约占卵巢癌所有组织学亚型的67.5%[2]。为开发更高效的卵巢浆液性囊腺癌诊治策略，其发生和发展的分子机制仍需进一步研究。

ZSIWM4是一种含有SWIM结构的新型大分子锌指蛋白，具有CxCxnCxH分子特征，研究人员基于其上的SWI2/SNF2及MuDR结构域和锌指结构对其家族进行了命名，并预测该家族蛋白具有蛋白质互作及DNA结合功能[3]。ZSWIM4在细胞中具有重要的调控功能。ZSWIM4能直接通过影响细胞核内Smad1的稳定性影响胚胎早期发育[4];在乳腺癌细胞ZSWIM4的高表达能拮抗JAK2抑制剂对肿瘤细胞的杀伤作用[5];ZSWIM4蛋白还能通过改变亚细胞定位，入核抑制KIT及BMAL1蛋白的表达，影响胃肠道间质瘤的发生[6]。越来越多的证据表明ZSWIM4参与肿瘤的发生和进展，但其在卵巢癌中的研究鲜有报道。本研究通过免疫组织化学染色技术，检测了ZSIWM4在卵巢组织样本中的表达水平，并进一步统计分析了ZSWIM4表达与浆液性囊腺癌患者临床病理参数的关系及其对患者生存预后的影响。

1、资料和方法

1.1 临床资料

本研究样本取自我院妇科2009年至2019年129例手术患者卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织石蜡包埋样本，样本包括：卵巢浆液性囊腺癌组织74例、卵巢浆液性交界性肿瘤组织17例、卵巢浆液性良性肿瘤组织21例和卵巢正常组织17例。所有患者平均年龄为51.8岁(24～85岁),其中恶性组病例平均年龄为53.4岁(25～77岁);交界组病理病例平均年龄42.9岁(28～80岁);良性组病例平均年龄为53.1岁(24～85岁);正常组病例平均年龄为52.4岁(43～68岁),各组患者间年龄不存在统计学差异(P>0.05)。纳入研究的74 例卵巢癌患者临床手术病理根据“2009年国际妇产科联盟(FIGO)”标准进行分期，其中I-II期17例，III-IV期57例；根据肿瘤分化程度分为低分化(poor)和中-高分化(well-moderate),其中低分化患者57例，中-高分化患者17例；按照盆腔和/或腹主动脉旁淋巴结有无转移分为：无转移者45例，有转移者27例，未知2例。对本研究中2009年至2019年手术的74例卵巢癌患者进行预后的随访调查，随访时间截至2024年09月。所有患者术前均未经过其他方案治疗(如放疗、化疗和激素治疗等)且具有完整临床资料。本研究中所有临床标本的采集和使用均已经过本院伦理委员会批准，纳入研究患者均签署知情同意书，伦理批号：2024PS1307K。

1.2 主要试剂

免疫组化试剂盒(KIT-9720,福州迈新生物技术开发有限公司);DAB显色剂试剂盒(DAB-0031,福州迈新生物技术开发有限公司);兔抗人ZSWIM4多克隆抗体(bs-16396R)购自北京博奥森生物技术有限公司；DAB显色试剂盒购自福州迈新生物公司；免疫染色通透液(Triton X-100,P0096)购自上海碧云天生物技术公司。其他试剂及仪器由我院中心实验室提供。

1.3 免疫组织化学染色方法

各组卵巢组织经固定(10%福尔马林)、常规石蜡包埋后，按5 μm厚连续切片。切片使用切片自动染色机脱蜡水化，随后免疫染色通透液继进行通透。利用柠檬酸盐缓冲液高压修复法进行抗原修复，随后按即用型免疫组化超敏SP检测试剂盒说明书操作染色。兔抗ZSWIM4按照1∶300进行稀释，DAB显色3 min后利用切片自动染色机进行苏木素复染并脱水至二甲苯。中性树脂封片后放入通风橱，片干后显微镜下观察、拍照。

1.4 染色结果判定标准

本研究中沿用本课题组既往评分方法[7]。光学显微镜下每张切片各自拍照记录5个视野(100倍、200倍、400倍),根据染色深浅分为0分(不着色)、1分(浅黄色)、2分(棕黄色)、3分(棕褐色);根据阳性染色细胞占比分为0分(<5%)、1分(6%～25%)、2分(26%～50%)、3分(51%～75%)、4分(76%～100%)。根据染色深浅×阳性染色细胞占比得到评分：0～2分为阴性(-),3～4分为低度表达(+),5～8分为中度表达(++),9～12分为高表达(+++)。3～12分(+/++/+++)为阳性表达，5～12分(++/+++)为强阳性表达。染色结果由2位观察者分别阅片控制误差。

1.5 统计学分析

采用SPSS26.0进行数据统计分析，R4.3.3进行生存曲线作图。等级资料使用频数/比例进行描述，计数资料采用卡方检验补充Fisher确切概率法。Kaplan-Meier及Log-rank用于生存分析和绘制生存曲线。通过Cox单因素回归分析确认影响预后因素，随后建立多因素Cox回归模型。P<0.05为差异具有统计学意义。生存曲线利用“survival”“ggplot2”“ggpubr”及“survminer”R语言程序包进行绘制。

2、结果

2.1 ZSWIM4在各组卵巢组织中的表达情况

染色结果显示，ZSWIM4主要分布于卵巢上皮细胞的细胞核中，细胞质中亦有一部分表达(图1)。卵巢癌浆液性囊腺癌组阳性表达率和强阳性表达率分别为87.8%(65/74) 和63.5%(47/74),高于交界组[52.9%(9/17)和23.5%(4/17),P<0.01]、良性组[23.8%(5/21)和4.8%(1/21),P<0.01]及正常组[11.8%(2/17)和5.9%(1/17),P<0.01],交界组阳性表达率52.9%(9/17)高于正常组11.8%(2/17)(P<0.05),见表1。

图1 ZSWIM4在各卵巢组织中的表达(SP×400,右上角SP×200)

表1 ZSWIM4在不同卵巢组织中的表达情况

2.2 ZSWIM4表达与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理参数的关系

74例卵巢浆液性囊腺癌中染色评分结果分为“-”阴性(0～2分)、“+”低度表达(3～4分)、“++”中度表达(5～8分)、“+++”高表达(9～12分)。“+/++/+++”(3～12分)为阳性表达，“++/+++”(5～12分)为强阳性表达。ZSWIM4蛋白表达情况与临床病理参数关系如表2所示。统计结果未发现ZSWIM4的表达同患者临床病理参数之间存在显著相关性(P>0.05)。

表2 ZSWIM4在卵巢浆液性囊腺癌患者组织中的表达与临床病理参数的关系

2.3 ZSWIM4的表达与卵巢浆液性囊腺癌患者生存预后关系

本研究纳入的74例卵巢浆液性囊腺癌患者，整体五年总生存率(overall survival, OS)为44.6%(33/74)。根据74例患者切片的ZSWIM4染色结果分为低表达组(0～6分，n=40)及高表达组(7～12分，n=34),其中低表达组五年总生存率为65%(26/40),高表达组五年总生存率为20.6%(7/34)。Kaplan-Meier 生存分析结果显示，ZSWIM4高表达组患者的5年生存率明显低于低表达组(图2)。经分析，本研究纳入患者的FIGO分期及淋巴结转移情况与其总生存期具有显著相关性(P<0.05),而患者年龄与肿瘤分化程度与总生存期无显著关联(P>0.05)(表3)。单因素Cox回归分析显示，FIGO分期、是否存在淋巴结转移及ZSWIM4表达高低与卵巢浆液性囊腺癌患者总生存期之间存在显著相关性(P<0.05)。进一步对三者建立多因素Cox回归分析模型，发现ZSWIM4高表达(P<0.01,HR=5.694,95%CI=2.528～12.826)是影响卵巢浆液性囊腺癌患者生存预后的独立危险因素(表4)。

图2 ZSWIM4的表达与卵巢浆液性囊腺癌患者总生存期(OS)的关系

3、讨论

在过去三十年，随着对于卵巢浆液性囊腺癌发生、发展和转移的分子机制探索，其诊疗策略取得了一定进展。但目前治疗靶点有限，靶向药物的获益多依赖于同源重组修复相关基因的缺陷，仍有接近50%卵巢癌患者的发病与同源重组修复缺陷无关，不能从中获益[8],现在迫切需要进一步的机制探索，为开发新的治疗靶点以及寻找新的筛查手段提供分子标志物。

表4影响卵巢浆液性囊腺癌预后的Cox回归模型分析

锌指蛋白最早于上世纪80年代末被发现，这类蛋白能通过其上的锌指结构域与特定的DNA序列结合，影响转录调控进而调节细胞发育、代谢、凋亡、自噬等诸多生物学过程[9]。ZSWIM蛋白家族，是一种新型锌指蛋白，由一个C2-CH型锌指结构域，及SWIM结构域等组成[3]。SWIM结构域则主要通过蛋白质之间的相互作用发挥生物学效应。在小鼠中，鼠MEKK1(MAPK kinase kinase 1)的SWIM结构域通过蛋白质-蛋白质的互作参与c-JUN的泛素化降解过程[10];除此之外，MARTÍN V等[11]在酵母菌中发现同样拥有ZSWIM结构的酵母Sws1蛋白参与同源重组修复，并预测人Sws1蛋白具有相似功能。

随着研究的深入，诸多陆续发表的新证据表明该家族蛋白参与调控各类生命活动。比如KO等[12]发现ZSWIM1在不同T细胞亚型中表达存在差异，可以作为T细胞分化标志物；ZSWIM6的突变会导致颅骨、大脑及四肢的各种发育障碍[13]。SHI等[14]通过CRISPR筛选发现ZSWIM8能影响microRNA降解，进一步研究发现ZSWIM8通过泛素连接酶功能促进AGO蛋白降解影响microRNA的降解。在肿瘤领域，ZSWIM家族通过各种机制影响肿瘤的发生与发展。在胰腺癌中，ZSWIM1通过STK38/MEKK2/ERK1/2轴影响肺腺癌细胞的增殖与转移[15]。XU等[16]发现ZSWIM5表达增高降低小细胞肺癌患者的生存预后，体外实验发现ZSWIM5能抑制小细胞肺癌细胞的增殖和集落形成以及增殖、侵袭和迁移能力。

ZSWIM4定位于19p13.12-p13.12,基于其锌指结构域和独特的SWIM结构域，它可以通过与核酸及蛋白互作发挥强大的调控作用，但目前有关其功能的研究尚少。在卵巢癌中，GONG等[17]通过在线数据库发现ZSWIM4在卵巢癌中表达增高，且高表达与不良预后相关，进一步研究发现敲低ZSWIM4表达能抑制卵巢癌细胞的甘氨酸代谢，从而增加卵巢癌细胞对铂类药物的敏感性。但其研究样本仅限于正常卵巢组织及卵巢癌组织，本研究进一步应用临床标本发现ZSWIM4蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织中过表达，表达水平高于交界组、良性组及正常组；交界组阳性表达率高于正常组，ZSWIM4表达的异常可能与卵巢浆液性囊腺癌的发生相关。除此之外本研究结果显示ZSWIM4高表达患者生存时间明显缩短，ZSWIM4表达水平可作为卵巢癌的独立危险因素。本研究中并未发现ZSWIM4表达量同临床病理参数之间的关系，这可能是因为样本数量的限制。

综上，本研究发现ZSIWM4在卵巢浆液性囊腺癌中的表达水平是影响患者生存预后的独立危险因素，ZSWIM4可作为风险预后评估指标，与其他现有标志物一起协同促进卵巢癌的诊治。

参考文献:

[7]王瑀璇,胡悦欣,刘鸥萱,等.CCT5在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学,2024,32(10):1893-1897.

基金资助:国家自然科学基金(编号:82173130);辽宁省科学技术计划(编号:2022JH2/20200047);

文章来源:曾凯,胡悦欣,范相成,等.ZSWIM4在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学,2024,32(24):4638-4643.