首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 肿瘤科论文 > 头颈肿瘤论文 > 头颈鳞癌中FOS样抗原1的表达及临床价值

头颈鳞癌中FOS样抗原1的表达及临床价值

2020-07-11 862 上传者：管理员

摘要：目的探讨FOS样抗原1（FOSL1）蛋白在头颈鳞癌中的表达及其与临床病理特点及患者预后的关系。方法使用UALCAN数据库预测FOSL1在头颈鳞癌（HNSC）中的表达情况，收集98例头颈鳞癌患者，采用免疫组化法检测头颈鳞癌及其癌旁正常组织中FOSL1蛋白的表达，并分析其表达与临床特征的关系。结果 UALCAN数据库及免疫组化结果均显示FOSL1蛋白在头颈鳞癌中的相对表达量明显高于癌旁正常组织（P<0.05）;FOSL1的表达与头颈鳞癌的大小、淋巴结转移、病理分级及HPV状态密切相关（P<0.05）。Kaplan-Meier分析显示FOSL1高表达组HNSC患者总积生存率明显低于低表达组HNSC患者（P<0.05）。结论 FOSL1蛋白参与头颈鳞癌的发生发展，FOSL1的表达水平有助于头颈鳞癌恶性程度的评价及预后的判断。

关键词：
FOSL1
临床病理特点
免疫组化
头颈肿瘤
头颈鳞癌
预后
加入收藏

头颈鳞癌（HNSC）位于全球最常见恶性肿瘤的第八位，每年新发病例超过55万[1]。HNSC具有局部复发率高，易发生淋巴结转移等特点，临床治疗多采用以手术为主，辅以放化疗或免疫疗法，然而头颈鳞癌患者的5年生存率仍低于50%[2,3]。FOS样抗原1(FOS-likeantigen1,FOSL1）是FOS家族蛋白的成员，FOSL1和JunB家族蛋白形成异质二聚体，共同组成肿瘤内重要的转录因子——活化蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)[4]。目前研究证实FOSL1具有多种功能，如沉默FOSL1抑制了骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭；FOSL1抑制了Ⅰ型干扰素对疟疾和病毒感染的反应[5,6]。然而，关于FOSL1蛋白在头颈鳞癌中的表达及其作用的报道尚未发现。本研究通过查询数据库及免疫组化等方法检测FOSL1在头颈鳞癌患者的表达水平，并分析其临床意义。

1、资料与方法

1.1一般资料

收集中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科2010年3月至2014年8月根治性手术切除的头颈鳞癌及其癌旁组织共98例。所有头颈鳞癌患者术前均未接受放疗或化疗等治疗。所有标本用4%多聚甲醛固定和石蜡包埋后制备4μm切片。所有患者均已被告知并签署由本院伦理委员会批准的知情同意书。

1.2UALCAN数据库分析

通过UALCAN数据库获取FOSL1基因在头颈鳞癌内的表达及预后情况，通过Expression选项中sampletype、tumorgrade、gender等分类预测FOSL1在HNSC中的表达情况；通过Survival模式，以中位数为cut-off，预测FOSL1表达与HNSC患者的生存曲线图。

1.3免疫组化

二甲苯及梯度酒精常规脱蜡，pH6.0枸橼酸微波修复20min，自然冷却至室温。3%H2O2避光孵育15min，滴加FOSL1一抗（SantaCruz公司，sc-28310,1∶500)4℃孵育过夜，PBS漂洗后滴加抗鼠IgG二抗（基因科技公司，GK500710)37℃孵育30min,PBS漂洗后滴加DAB显色剂，苏木素染核，脱水后树胶封片。光学显微镜下观察结果FOSL1的表达情况。

1.4免疫组化结果评判

FOSL1的表达主要位于细胞核内，在高倍镜下随机选取5个视野，计算阳性细胞的百分比：0分是阳性细胞数<5%,1分是阳性表达细胞数5%～24%,2分是阳性表达细胞数为25%～49%,3分是阳性表达细胞数为50%～74%,4分是阳性表达细胞数≥75%；同时评判染色深度：0分是不着色，1分是淡黄色，2分是棕黄色，3分是棕褐色。最后两项得分相乘，0～3分的标本判定为低表达，4～12分的标本判断为高表达。

1.5统计学方法

应用SPSS20.0统计软件，分析FOSL1蛋白表达与患者临床病理指标之间的关系采用卡方检验。采用Kaplan-Meier法进行生存分析，绘制生存曲线。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1UALCAN数据库获取FOSL1在头颈鳞癌中的表达

通过UALCAN数据库，我们基于sampletype、tumorgrade、HPVstatus和nodalmetastasisstatus等分类对比了FOSL1在HNSC组织的表达。我们发现FOSL1在头颈鳞癌中的表达显著高于癌旁组织（P=0.039）（图1A）。其次，不同病理分级HNSC中FOSL1的表达均比癌旁组织高，其中Grade2(intermediategrade）和Grade4(highgrade)HNSC中FOSL1显著升高（P<0.001）。不同病理分级HNSC组织内FOSL1的表达呈显著差异：Grade1-vs-Grade2(P=0.032),Grade1-vs-Grade4(P<0.0001),Grade2-vs-Grade3(P=0.0106),Grade2-vs-Grade4(P<0.0001),Grade3-vs-Grade4(P<0.0001）（图1B）。HPV阳性HNSC患者（p16&ISH检测）中FOSL1的表达显著低于HPV阴性患者（P<0.001）（图1C）。此外，数据显示与无淋巴结转移的患者（N0）相比，仅有N3组HNSC患者（>10个淋巴结转移）中FOSL1表达显著升高（P=0.0017），而N1组较N3组亦显著升高（P=0.0012）（图1D）。

2.2免疫组化检测FOSL1蛋白在头颈鳞癌标本中的表达

我们发现FOSL1蛋白主要定位于细胞核内。FOSL1在癌旁组织内的阳性率仅为8.1%(8/98），且FOSL1表达呈弱阳性，而大部分癌旁组织FOSL1表达为阴性。然而FOSL1在头颈鳞癌样本中均有表达，其中54例（55.1%）头颈鳞癌FOSL1呈高表达（强阳性），44例（44.9%）头颈鳞癌FOSL1呈低表达（弱阳性）（图2A～D）。

图1UALCAN数据库检测FOSL1蛋白在HNSC中的表达

图2头颈鳞癌及癌旁组织内FOSL1的表达

2.3FOSL1的表达与头颈鳞癌患者临床病理指标的关系

FOSL1表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、临床分期及病理分化程度显著相关（P<0.05），即高表达FOSL1的头颈鳞癌患者的肿瘤直径更大、分化程度更差、临床分级更高，易发生区域性淋巴结转移。而FOSL1表达水平与患者性别、年龄、远处转移等指标无明显相关性（P>0.05），结果见表1。

2.4FOSL1的表达对头颈鳞癌患者预后的影响

UALCAN数据库显示高表达FOSL1的HNSC患者较低表达HNSC预后差，两组之间具有显著差异（P=0.035）（图3A）。此外，我们通过KaplanMeier法分析FOSL1表达对98例HNSC患者（本院收集）预后的影响。结果发现其中FOSL1低表达组的头颈鳞癌患者中位生存时间为96个月，FOSL1高表达组的头颈鳞癌患者中位生存时间为42个月，差异有统计学意义（P<0.05），见图3B。

3、讨论

目前AP-1蛋白被认为调控肿瘤、哮喘和类风湿性关节炎等多种疾病的关键转录因子，它会响应细胞因子、激素和生长因子等各种外界刺激，调控下游基因的表达继而影响细胞的增殖、分化、凋亡等生物学过程[7,8]。AP-1是一种由Jun家族蛋白和Fos家族蛋白形成的高度保守的同源或者异源二聚体复合物，其中FOSL1属于FOS蛋白家族的一员，它与Jun家族蛋白形成异源二聚体是众多AP-1复合物中最为稳定的[8,9]。研究表明，AP-1主要通过FOSL1调控基质金属蛋白酶家族降解细胞外基质，进而肿瘤的转移和侵袭[7,8]。例如，在人结直肠癌细胞HT-29中AP-1结合在MMP7的DNA启动子区，促进肠癌的转移和侵袭[10]。此外，FOSL1的调控作用发生在转录和翻译后修饰的水平，而蛋白水平的磷酸化是FOSL1调控翻译后修饰的主要方式[8,9,10]。FOSL1主要由丝裂原活化蛋白激酶信号途径调控，并被泛素非依赖性蛋白酶体降解[11]。此外，FOSL1可影响肿瘤的增殖、分化、侵袭和凋亡等生物学功能[4,5,6,11,12]。研究表明，FOSL1在乳腺癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌、鼻咽癌等肿瘤中过表达，而在宫颈癌和卵巢癌中的表达降低，在头颈鳞癌中的表达仍存在争议[11,12,13,14]。

表1FOSL1蛋白表达与头颈鳞癌临床病理特征的相关性

目前生物大数据库在细胞生物学的研究中发挥了举足轻重的作用，UALCAN整合了TCGA和MET500来源的数据，用于比较某一基因在特定肿瘤和正常组织、不同病理分类的肿瘤之间和不同类型正常组织内的表达情况，同时还可以基因间的共表达分析、药物敏感性基因筛查等[15]。本实验中我们发现FOSL1在头颈鳞癌中显著高表达，且FOSL1高表达与HNSC患者预后差显著相关（P<0.05）。此外，FOSL1的表达与HNSC患者的病理分级、淋巴结转移和HPV状态密切相关（P<0.05）。

图3FOSL1的表达与头颈鳞癌患者的预后

随后我们通过免疫组化验证FOSL1蛋白在头颈鳞癌及癌旁组织中的表达情况。结果发现FOSL1在绝大多数头颈鳞癌中均有表达，且头颈鳞癌组织中FOSL1的表达显著高于癌旁组织。通过卡方检验分析，我们发现FOSL1的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、HPV状态及病理分化程度显著相关（P<0.05）。Kaplan-Meier分析表明高表达FOSL1的头颈鳞癌患者生存率明显低于低表达FOSL1的头颈鳞癌患者。以上结果与数据库预测的结果基本一致。本研究显示FOSL1蛋白在头颈鳞癌中显著上调，且与头颈鳞患者临床特征及预后密切相关，提示FOSL1可能在头颈鳞癌的发生发展过程中起到重要作用，它可以作为评估头颈鳞癌患者预后的指标。

高晓琳,修霞,邱萍萍,张杜合一,谢舒乐,林钊宇.FOS样抗原1在头颈鳞癌中的表达及临床意义[J].岭南现代临床外科,2020,20(03):319-323.

基金:国家自然科学基金青年项目(81602379,81903045)