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HPLC同时测定小儿氨酚黄那敏制剂中的4种甜味剂

2024-06-20 23 上传者：管理员

摘要：目的采用HPLC法同时测定制剂中4种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷)的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.02 mol•L-1磷酸二氢铵溶液(pH4.4),B为乙腈，梯度洗脱，流速1.0 mL•min-1,检测波长200 nm(糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷)、226 nm(安赛蜜),柱温30℃,进样量10μL。结果安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷均达到基线分离，分离度符合要求，各辅料均无干扰，线性范围分别为1.012～404.800μg•mL-1(r=0.9999)、1.117～223.400μg•mL-1(r=0.9999)、1.180～471.800μg•mL-1(r=0.9997)、0.605～605.200μg•mL-1(r=0.9999);检测限分别为19.7、8.0、11.2、25.4 ng•mL-1;定量限分别为65.7、26.0、37.5、84.7 ng•mL-1;平均加样回收率分别为97.81%、98.30%、98.00%、101.10%,RSD分别为1.84%、1.39%、0.71%、1.98%(n=9)。结论所用方法稳定性、重复性均较好，通过测定甜味剂含量可监控制剂生产过程中辅料投料是否与处方一致，为儿童用药中甜味剂的质量控制提供了参考。

关键词：
一测多评
安赛蜜
小儿氨酚黄那敏
甜味剂
甜菊苷
糖精钠
阿司帕坦
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小儿氨酚黄那敏颗粒(片)为对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、人工牛黄与适宜的辅料等组成的复方制剂，临床上主要用于治疗儿童感冒引起的头痛、发热、咽喉痛、鼻塞等症[1]。为改善儿童患者服药的顺应性，多数儿童用药会添加甜味剂(如安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷)来改善药品口感[2]。中国尚未有关于药品中甜味剂限度的相关规定，仅在《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定了甜味剂的使用范围和限量。适量摄入甜味剂能使人产生愉悦感，但过量摄入可能会引发肥胖、高血糖、糖尿病，并且会对肝脏和神经系统造成危害[3,4]。阿司帕坦在人体胃肠道酶作用下可分解为苯丙氨酸、天冬氨酸和甲醇，其代谢物具有一定的生理毒性，不适用于苯丙酮酸尿患者[5]。小儿氨酚黄那敏颗粒的现行标准中并未对甜味剂的含量进行限定。有文献测定了小儿氨酚黄那敏颗粒中的阿斯帕坦和糖精钠，但未见同时测定小儿氨酚黄那敏颗粒中4种甜味剂的报道[6]。现首次采用HPLC法同时测定小儿氨酚黄那敏制剂中阿司帕坦、甜菊苷、安赛蜜、糖精钠等甜味剂含量，所用方法简便、重复性好、灵敏度高，可为制剂中甜味剂的控制提供参考。

1、实验部分

1.1仪器与试药

LC-2030C3D型高效液相色谱仪(日本岛津)。糖精钠、阿司帕坦对照品(中国食品药品检验院，批号：520031-201501、420037-201902,含量均为100.0%);安赛蜜、甜菊苷对照品(上海源叶生物科技有限公司，含量均≥98.0%);23批小儿氨酚黄那敏制剂(市售，包括21批颗粒剂和2批片剂);乙腈为色谱纯；水为超纯水；磷酸二氢铵为分析纯。

1.2方法与结果

1.2.1色谱条件与系统适用性的试验

采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为0.02 mol·L-1磷酸二氢铵溶液(pH4.4,A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～7 min、95%A,7～35 min、95%→50%A,35～35.1 min、50%→20%A,35.1～45 min、20%A,45～45.1 min、20%→95%A,45.1～55 min、95%A),柱温30℃,流速为1.0 mL·min-1,检测波长200 nm(糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷)、226 nm(安赛蜜),进样量10μL。取混合对照品和阴性样品溶液分别进样测定，记录色谱图。在该色谱条件下，空白辅料无干扰，糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷与相邻峰能达到基线分离，分离度符合要求，其他成分对测定无干扰(图1)。

1.2.2溶液的制备

分别精密称取安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷等对照品20.24、11.17、23.59、30.26 mg,置同一10 mL量瓶中，加5%乙腈溶解并定容，制成分别含安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷2.024、1.117、2.359、3.026 mg·mL-1的混合对照品溶液。取10袋样品，研细，精密称取0.1 g,置10 mL量瓶中，加5%乙腈适量，振摇15 min,使溶解并定容，过滤，取续滤液，作为供试品溶液。按小儿氨酚黄那敏颗粒处方制成缺甜味剂的阴性样品，再按上述供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

图1混合对照品(A)和阴性样品(B)溶液的HPLC图(1.200 nm; 2.226 nm)

1.2.3线性关系、检测限与定量限的考察

分别精密吸取“1.2.2”项下对照品贮备液，用5%乙腈制成系列对照品溶液，在“1.2.1”项色谱条件下分别进样，记录峰面积。以峰面积为纵坐标、各对照品的浓度(μg·mL-1)为横坐标绘制标准曲线，结果见表1。配制适宜浓度的糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷、安赛蜜对照品溶液，测定检测限(S/N=3)和定量限(S/N=10)。

表1 4种成分的回归方程、线性范围、检测限和定量限

1.2.4精密度、稳定性与重复性的试验

精密吸取“1.2.2”项下的混合对照品溶液，连续进样6次，记录色谱图，计算得安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷峰面积的RSD分别为0.07%、0.05%、0.41%、0.09%(n=6),表明仪器的精密度良好。取混合对照品溶液适量，于室温下放置0、2、6、12、18、24 h后，分别进样测定，记录色谱图，计算得安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷峰面积的RSD分别0.16%、0.14%、0.22%、0.18%(n=6),表明溶液在室温下放置24 h内基本稳定。取同一批小儿氨酚黄那敏样品(批号：202000029),平行制备6份供试品溶液，分别进样测定，计算得安赛蜜的平均含量为5.057 mg·g-1,RSD=1.66%(n=6);糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷均未检出，表明方法重复性良好；取同一批小儿氨酚黄那敏样品(批号：202000011),平行制备6份供试品溶液，分别进样测定并计算含量，计算得阿司帕坦、甜菊苷的平均含量分别为15.555 mg·g-1、214.92μg·g-1,RSD分别为0.79%、2.23%(n=6),安赛蜜、糖精钠未检出，表明方法的重复性良好。

1.2.5加样回收率的试验

按小儿氨酚黄那敏颗粒处方和工艺制成缺甜味剂的空白辅料样品约0.1 g,平行操作9份，精密称定，置10 mL量瓶中，分别精密加入含安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷202.4、111.7、235.9、302.6μg·mL-1的混合对照品溶液0.1、2、10 mL,每个浓度各3份，加入5%乙腈适量，振摇使溶解，用5%乙腈稀释并定容，取续滤液，即得加样回收供试液。分别进样，测定4种甜味剂的含量并计算回收率。安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷的平均回收率分别为97.81%、98.30%、98.00%、101.10%,RSD分别为1.84%、1.39%、0.71%、1.98%(n=6),表明回收率良好(表2)。

1.2.6样品的含量测定

取23批小儿氨酚黄那敏制剂，分别按“1.2.2”项方法制备供试品溶液，再按“1.2.1”项色谱条件进样测定，记录响应值并按内标校正的标准曲线法计算样品中安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊素的含量，每批样品平行测定3次。由表3可知：11个厂家生产的21批小儿氨酚黄那敏颗粒中均未检出糖精钠，其余3种甜味剂的含量见测定结果；2个厂家生产的2批小儿氨酚黄那敏片剂中阿司帕坦的含量分别为15.42、14.78 mg·g-1,均未检出安赛蜜、糖精钠和甜菊素。

表2加样回收率试验的结果(mg, n=9)

表3小儿氨酚黄那敏制剂中4种甜味剂的含量测定结果(mg·g-1,n=3)

2、讨论

安赛蜜的最大紫外吸收波长为226 nm,甜菊苷为210 nm,糖精钠和阿司帕坦均为200 nm。综合考虑4种甜味剂在紫外区的检测灵敏度，文中选择双波长通道：即226 nm检测安赛蜜，200 nm检测其余3种甜味剂。曾选用乙酸铵溶液作为流动相缓冲液，但试验中发现乙酸铵对低波长检测有影响，基线波动很大；后采用乙腈-磷酸二氢铵缓冲液为流动相梯度洗脱时，在50 min内主成分对乙酰氨基酚能与4种甜味剂和其他辅料有效分离，峰型对称、无干扰，方法学验证表明该法稳定可靠。文中采用HPLC法首次较为系统的考察了小儿氨酚黄那敏制剂中4种甜味剂的添加情况，方法准确、简便，适用于该制剂中甜味剂的监控，防止非法添加，确保儿童用药安全。

参考文献:

[1]杨海源.小儿氨酚黄那敏颗粒中人工牛黄质量控制及抽验质量评价方法[J].中成药,2023,45(8):2690-2697.

[2]刘妍岭.人工甜味剂的应用及其对人体带来的影响[J].山东化工,2020,49(15):153-155.

[3]上官海燕,宋亚青,朱妙飞,等.过量摄入甜味剂会危害儿童身心健康[J].中国食品,2020,(22):104-107.

[4]朱泽兵,郭娅,张德伟.UPLC-MS/MS法同时测定甘草中6种人工合成甜味剂[J].华西药学杂志,2023,38(3):310-313.

[5]李薇,金薇,乐健,等.梯度洗脱HPLC法测定盐酸氨溴索口服溶液中甜味剂含量[J].药物分析杂志,2012,32(12):2208-2212.

[6]孙菲.HPLC法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中阿斯帕坦的含量[J].中国药师,2016,19(5):1013-1015.

文章来源:阿玉梅,魏文芝,陈学艳,等.HPLC同时测定小儿氨酚黄那敏制剂中的4种甜味剂[J].华西药学杂志,2024,39(03):333-336.