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顶空气相色谱法测定卡博替尼中的溶剂残留

2024-08-22 68 上传者：管理员

摘要：本研究建立了卡博替尼原料药经气相色谱-火焰离子化检测器检测13种有机溶剂残留的分析方法。13种有机残留溶剂在各自质量浓度范围内与对应峰面积的线性关系良好，相关系数均大于0.995；回收率在90.4%～107.8%%之间，9次测定结果的相对标准偏差为1.44%～5.04%。该方法操作简单，准确度高，灵敏度好，可用于检测卡博替尼原料药中有机溶剂残留。

关键词：
卡博替尼
小分子酪氨酸激酶抑制剂
有机溶剂残留
气相色谱法
质量控制
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卡博替尼是一种多靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI)[1]，对靶点血管内皮生长因子受体（VEGFR）、肝细胞生长因子受体（MET）及干细胞生长因子受体（KIT）等具有强效抑制作用，被称为靶向药中的“万金油”[2-4]。主要用于甲状腺髓样癌、肾癌、肝癌的治疗[5-8]，此外还可用于非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌等的治疗，属广谱抗肿瘤靶向药物，在抗癌领域具有很好的前景[9,10]。卡博替尼的合成需经多步反应进行，在合成过程中所涉及的起始物料及溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、氯苯等13种，这些溶剂虽可以提高收率或者控制药物的性质，但残留于原料药中的溶剂会对人体造成一定的危害，如苯、甲醇、乙醇等均有可能在原料药中残留，影响卡博替尼的品质及使用者的健康，因此，对卡博替尼原料药中残留溶剂的分析具有一定的意义[11]。本文依据《中国药典》（四部）[12]和ICH Q3C(R8）残留溶剂指导原则[13]，对上述溶剂进行控制，参考相关文献[14,15]，建立了测定卡博替尼原料药中13种有机溶剂残留的分析方法。

1、实验部分

1.1 仪器与试剂

7890B型气相色谱仪（美国Agilent公司），包括FID检测器和7697A顶空进样器；TB-215D型电子分析天平（精度0.01mg北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

甲醇、乙腈，色谱纯，北京伊诺凯科技有限公司；无水乙醇（色谱纯国药集团化学试剂有限公司）；丙酮、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、苯、正庚烷、甲苯、氯苯；均为色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；二甲基亚砜、乙酸乙酯，色谱纯，北京百灵威科技有限公司。

卡博替尼原料药（批号为20230204、20230213、20230228）。

1.2 样品处理

取甲醇1.5g、乙醇2.5g、丙酮2.5g、乙腈0.205g、异丙醇2.5g、二氯甲烷0.3g、叔丁醇1.75g、甲基叔丁基醚2.5g、乙酸乙酯2.5g、苯0.01g、甲苯0.445g、氯苯0.18g，分别置于20m L容量瓶中，用二甲基亚砜定容，作为各溶剂对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1.0m L、苯对照品贮备液0.1m L，置同一50m L容量瓶中，用二甲基亚砜定容，摇匀，精密量取上述溶液2.0m L置顶空瓶中，密封，作为混合对照品溶液。色谱级正庚烷中存在杂质峰，干扰苯的测定，所以实验过程中，对正庚烷对照品进行单独的配制。取正庚烷0.125g，精密称定，置50m L容量瓶中，用二甲基亚砜定容，摇匀，精密量取上述溶液2.0m L，置顶空瓶中，密封，作为正庚烷对照品溶液。精密称取样品1.0g置顶空瓶中，精密加入二甲基亚砜2.0m L，密封，作为供试品溶液（供试品浓度为0.5g·m L-1）。取二甲基亚砜2.0 m L置顶空瓶中，密封，作为空白溶液。

1.3 仪器工作条件

色谱柱：DB-624毛细管色谱柱（60m×0.320mm,1.80μm）；程序升温：起始温度50℃，维持3 min，以5℃·min-1升至100℃，以15℃·min-1升至200℃，维持5min；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；检测器温度：300℃；进样口温度：250℃；载气：N2；流速：2m L·min-1；分流比：10∶1；顶空进样，顶空平衡温度为100℃；顶空平衡时间为30min。

2、结果与讨论

2.1 残留溶剂限度及限度浓度

依据《中国药典》2020年版（四部）通则0861残留溶剂测定法[12]和ICH Q3C(R8）残留溶剂的指导原则[13]，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、氯苯限值分别为0.3%、0.5%、0.5%、0.041%、0.5%、0.06%、0.35%、0.5%、0.5%、0.0002%、0.5%、0.089%、0.036%。按供试品溶液浓度为0.5g·m L-1进行折算，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、氯苯的限制浓度分别为1500、2500、2500、205、2500、300、1750、2500、2500、1、2500、445、180μg·m L-1。

2.2 色谱条件的选择

分别考察不同极性色谱柱（DB-1、DB-5、DB-624、DB-FFAP）对13种有机溶剂的分离效果，发现DB-1、DB-5和DB-FFAP色谱柱对13种有机溶剂无法进行有效分离，而DB-624色谱柱分离效果较好，所以选择DB-624色谱柱作为13种溶剂分析色谱柱。由于乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚间的分离度较小（见表1），选择较长色谱柱可以适当增加分离度，考虑到方法的耐用性，故选择柱长为60m的色谱柱。

表1 各溶剂保留时间及分离度

由于该方法为13种有机溶剂测定方法，柱程序宜选择程序升温法。实验过程中考察了起始温度分别为50、60、70℃对13种溶剂的分离效果，其中初始柱温为60和70℃时，不利于乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇和甲基叔丁基醚的分离，而起始柱温为50℃时，以上几种溶剂的分离效果较好，故选择起始柱温为50℃。升高柱温可以使各有机溶剂保留时间提前，但同时也可能导致各溶剂无法进行有效分离，故升温速率不宜过大，本方法中通过实验最终确定柱程序以5℃·min-1的速率从50℃升温至100℃有利于以上几种溶剂的分离。

2.3 专属性实验

取1.2项下空白溶液、供试品溶液、混合对照品溶液、正庚烷对照品依据1.3项下色谱条件进行测定，各溶剂保留时间见表1，色谱图见图1。

由图1可见，空白溶液在与甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、氯苯对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，各溶剂峰与相邻色谱峰之间的分离度均不小于1.5，表明方法专属性良好。

图1 溶液色谱图

2.4 检测限、定量限及线性实验

以定量限为起始浓度，分别取1.2项下对照品贮备液适量，用二甲基亚砜稀释成混合线性系列溶液，其中正庚烷线性系列溶液单独配制，溶液浓度见表2。

按1.3项下色谱条件进行测定，以待测成分的质量浓度（μg·m L-1）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程及相关系数见表2。

分别取1.2项下对照品贮备液进行稀释，以信噪比（S/N)3∶1和10∶1分别计算检测限和定量限，结果同见表2。

表2 线性方程、检测限及定量限

由表2可见，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、苯、甲苯、氯苯线性相关系数均大于0.995，检测限均明显低于限度浓度，可满足卡博替尼中残留溶剂的测定。

2.5 准确度和精密度

取卡博替尼样品9份，按限度浓度50%、100%、150%定量加入甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、叔丁醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、氯苯对照品贮备液，其中正庚烷准确度实验溶液单独配制，每个浓度平行制备3份溶液。按1.3项下色谱条件进行测定，加标回收率和相对标准偏差见表3。