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MATN1-AS1在宫颈癌患者组织和血清中表达及临床意义

2024-08-13 92 上传者：管理员

摘要：目的分析长链非编码RNA MATN1反义RNA（MATN1-AS1）作为微小RNA-200b（miR-200b）的内源竞争RNA（ceRNA）在宫颈癌患者组织和血清中的表达及临床意义。方法选择2018年3月—2019年3月天津市第五中心医院收治的宫颈癌患者50例，所有患者均在该院进行手术切除癌组织，并留取宫颈癌癌组织和距离癌组织边缘2 cm以上癌旁组织。将宫颈癌患者作为研究组，另外选取良性子宫病变患者50例作为对照组，采用实时荧光定量PCR法检测宫颈癌组织、血清中MATN1-AS1、miR-200b表达量，分析MATN1-AS1、miR-200b相关性，分析MATN1-AS1、miR-200b与临床特征的关系，统计宫颈癌患者3年生存率。结果癌组织中MATN1-AS1、miR-200b表达量（13.14±2.35、1.24±0.22）高于癌旁组织（5.36±0.74、0.49±0.05）,差异均有统计学意义（t=22.330、23.510,均P<0.05）。研究组中MATN1-AS1、miR-200b表达量（12.05±2.27、1.17±0.20）高于对照组（4.85±0.55、0.38±0.04）,差异均有统计学意义（t=21.800、27.370,均P<0.05）。低分化、肿瘤≥4 cm、FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、发生淋巴结转移患者MATN1-AS1、miR-200b表达量较高（均P<0.05）。相关性分析显示，MATN1-AS1与miR-200b正相关（r=0.625,P<0.05）。沉默MATN1-AS1组中MATN1-AS1、miR-200b表达量（7.25±0.83、0.42±0.05）低于空白对照组（13.05±2.47、1.24±0.25）,差异均有统计学意义（t=7.039、10.170,均P<0.05）。随访3年，失访2例，48例宫颈癌患者3年生存率为66.67%（32/48）。MATN1-AS1高表达患者生存率低于MATN1-AS1低表达患者，miR-200b高表达患者生存率低于miR-200b低表达患者（χ2=4.251、5.244,均P<0.05）。结论 MATN1-AS1与miR-200b存在潜在结合点，MATN1-AS1、miR-200b在宫颈癌患者组织、血清中表达量升高，且两者呈正相关，沉默宫颈癌细胞株中MATN1-AS1,可使miR-200b表达降低，MATN1-AS1可调节miR-200b表达，参与宫颈癌的发生与发展。

关键词：
人乳头瘤病毒
内源竞争RNA
宫颈癌
微小NRA-200b
长链非编码RNA MATN1反义RNA
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宫颈癌在女性中较为常见，临床发病率、死亡率较高，主要由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起，且宫颈癌的发生与免疫、遗传及环境相关[1-2]。随着医疗技术的发展，宫颈癌手术、放疗及化疗手段进展较大，但宫颈癌患者预后较差，故寻找新的生物标志物、治疗靶点在宫颈癌的诊断、治疗中较为重要[3]。长链非编码RNA MATN1反义RNA(MATN1-AS1)为新发现的长链非编码RNA(lnc RNA),lnc RNA为长度大于200 nt的非编码RNA,可参与基因的调控，在机体的多种生理过程中具有重要作用，且lnc RNA可作为结构组件对mRNA的稳定、衰竭进行调控[4]。微小RNA(miRNA)为非编码单链RNA分子，可抑制靶基因mRNA的降解或翻译，对靶基因进行调控，微小RNA-200b(miR-200b)在宫颈癌的发展中作用较为重要，在前体miRNA序列中变异位点可对miRNA的剪切、成熟过程造成影响，使成熟miRNA的表达受到抑制，并影响靶基因与miRNA的结合，故miRNA基因变异在肿瘤的发生发展中作用较为重要[5]。内源竞争RNA(ceRNA)可通过miRNA反应元件与miRNA进行结合，使miRNA功能受到影响，并沉默miRNA表达[6]。临床暂未有研究显示MATN1-AS1、miR-200b存在调控关系，基于此，本文分析MATN1-AS1作为miR-200b的ceRNA在宫颈癌患者组织和血清中的表达及临床意义。

1、资料与方法

1.1资料来源

选择2018年3月—2019年3月天津市第五中心医院收治的宫颈癌患者50例，所有患者均在本院进行手术切除癌组织，并留取宫颈癌癌组织和距离癌组织边缘2 cm以上癌旁组织。将宫颈癌患者作为研究组，年龄42～55岁，平均年龄(48.25±3.17)岁；BMI 19.0～23.1 kg/m2,平均(20.89±1.07)kg/m2;绝经20例，未绝经30例；孕次0～5次，平均(3.19±0.37)次；产次0～3次，平均(2.05±0.06)次。另外选取50例良性子宫病变患者作为对照组。年龄40～55岁，平均(48.11±3.08)岁；BMI 19.5～23.4 kg/m2,平均(21.02±1.15)kg/m2;绝经15例，未绝经35例，孕次1～5次，平均(3.22±0.41)次；产次1～3次，平均(2.14±0.08)次。两组患者一般资料比较无明显差异(均P>0.05)。纳入标准：所有患者符合《子宫颈癌等人乳头瘤病毒相关疾病免疫预防专家共识》[7]中宫颈癌的诊断标准；均经病理学确诊。排除标准：术前接受抗肿瘤治疗；合并其他恶性肿瘤；合并血液系统疾病；预计生存期≤3个月；患有甲状腺疾病。本研究经医院伦理委员会讨论，且研究对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1实施荧光定量法检测组织、血清中MATN1-AS1、miR-200b表达量

所有受试者各抽取空腹静脉血6 ml,以离心半径5 cm、转速2 000 r/min离心处理15 min,分离上层血清，-80℃保存待检。取患者癌组织、癌旁组织制备为组织匀浆。通过实时荧光定量PCR法对MATN1-AS1、miR-200b进行检测，采用Trizol法提取组织中总RNA,使用Takara逆转录试剂盒将组织中的RNA逆转录为cDNA,采用Primer5.0软件设计引物序列，启动PCR仪，反应体系：0.4μl上下游引物、1μl cDNA模板、10μl SYBGreen,加蒸馏水至20μl。反应条件：95℃预变性1 s、95℃5 s、60℃31 s,共进行40个循环，采用2-△△Ct方法计算出MATN1-AS1、miR-200b的相对表达量。MATN1-AS1上游引物序列：5′-CCGGCCTTGTTGTATACAGTCATTACTCGAGTAATGACTGTATACAACAAGGTTTTTTG-3′,下游引物序列：5′-CCGGGCGCTCCTGTTTATGTACTTACTCGAGTAAGTACATAAACAGGAGCGCTTTTTTG-3′,miR-200b上游引物序列：5′-UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA-3′,下游引物序列：5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′,内参基因U6上游引物序列：5′-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3′,下游引物序列：5′-AGTCCTTCCACGATACCAAAG-3′。

1.2.2资料收集与随访

对宫颈癌患者病情资料(病理类型、分化程度、肿瘤大小、FIGO分期及淋巴结转移)进行统计记录，对所有患者进行随访，随访方式包括门诊复查、电话等方式，随访3年中共失访2例。

1.2.3细胞转染

转染前1 d将一定量细胞铺于6孔板，放入完全培养基进行培养，24 h后，细胞融合至80%～90%,采用Lipofectamine 3000试剂对宫颈癌细胞进行转染，空白对照组不进行任何处理，沉默MATN1-AS1组转染MATN1-AS1沉默质粒，质粒转染浓度为1μg/L,将其放入体积为2 ml的2%培养血清中，5 h后更换培养基，48 h提取细胞RNA,进行后续试验。

1.3统计学分析

使用SPSS 19.0软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差

描述，多组间比较采用方差齐性检验，两组间比较采用独立样本t检验，采用Pearson相关性分析MATN1-AS1、miR-200b之间的相关性，Kaplan-Meier曲线进行生存分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 MATN1-AS1、miR-200b在宫颈癌组织中的表达量比较

与癌旁组织比较，癌组织中MATN1-AS1、miR-200b表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

表1MATN1-AS1、miR-200b在宫颈癌组织中的表达量比较

2.2 MATN1-AS1、miR-200b在宫颈癌血清中的表达量比较

与对照组相比，研究组中MATN1-AS1、miR-200b表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

2.3癌组织中MATN1-AS1、miR-200b表达与临床特征关系

见表3。

表2MATN1-AS1、miR-200b在宫颈癌血清中的表达量比较

表3癌组织中MATN1-AS1、miR-200b表达与临床特征关系

MATN1-AS1、miR-200b表达与病理类型无关，MATN1-AS1、miR-200b表达与分化程度、肿瘤大小、FIGO分期及淋巴结转移有关；低分化、肿瘤≥4 cm、FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期及发生淋巴结转移患者MATN1-AS1、miR-200b表达量较高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

2.4宫颈癌组织中MATN1-AS1与miR-200b相关性

相关性分析显示，MATN1-AS1与miR-200b正相关(r=0.625,P<0.05)。见图1。

2.5宫颈癌3年生存率

随访3年，失访2例，48例宫颈癌患者3年生存率为66.67%(32/48)。MATN1-AS1高表达患者生存率低于MATN1-AS1低表达患者，miR-200b高表达患者生存率低于miR-200b低表达患者(χ2=4.251、5.244,均P<0.05)。见图2。

图1MATN1-AS1与miR-200b相关性

图2生存曲线

2.6沉默MATN1-AS1宫颈癌细胞中MATN1-AS1、miR-200b表达量比较

与空白对照组比较，沉默MATN1-AS1组中MATN1-AS1、miR-200b表达量降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。沉默MATN1-AS1宫颈癌细胞中MATN1-AS1、miR-200b表达量比较见表4。

表4沉默MATN1-AS1宫颈癌细胞中MATN1-AS1、miR-200b表达量比较

3、讨论

宫颈癌为女性肿瘤中发病率最高的恶性肿瘤之一，死亡率较高，临床对于宫颈癌的治疗主要为手术、放疗，手术可用于早期宫颈癌患者，放疗可损伤患者卵巢、阴道，对年轻患者生活质量造成较大影响[8-9]。宫颈癌的发生与HPV感染具有一定相关性，HPV可对患者上皮组织、黏膜造成侵犯，并使患者子宫颈、肛门发生感染，因宫颈癌恶性程度、发生率较高，故寻找其分子机制，对深入研究肿瘤发展具有重要意义[10-11]。

研究显示[12-13],多种lnc RNA异常表达在宫颈癌的发生、发展中具有重要作用，lnc RNA在不同水平上可对基因表达进行调控，参与选择性剪接、核导入、表观遗传学等多种生理过程。多种研究显示，lnc RNA为宫颈癌发生过程中的重要组成部分，可使宫颈癌细胞的迁移、增殖及侵袭受到影响。本文研究发现，在宫颈癌患者组织、血清中，MATN1-AS1表达升高，会导致患者不良预后的发生，沉默MATN1-AS1表达，可使MATN1-AS1表达降低，抑制肿瘤的发展。相关学者研究表明[14-15],MATN1-AS1可调节细胞干细胞多能性、细胞分化及凋亡，并可影响上皮间质转化、细胞侵袭转移及生长，在肿瘤的发展中具有重要作用，与本文研究保持一致，表明MATN1-AS1为促癌基因，沉默MATN1-AS1表达，可使细胞的增殖受到抑制，并抑制肿瘤的生长。

miRNA为内源性RNA,进化较为保守，可对转录后基因进行调控[16]。研究显示[17],miRNA相关蛋白的形成进行干扰，并参与细胞的侵袭、迁移，其表达水平异常可导致多种疾病的发生，多种miRNA基因位于肿瘤相关基因区域，且不同RNA具有不同作用，在肿瘤的发生、转移及侵袭中具有不同作用。本文研究发现，miR-200b在宫颈癌患者中表达较高，为促癌因子，可促进肿瘤细胞的增殖、迁移，且抑制宫颈癌细胞中MATN1-AS1表达，可使miR-200b表达降低，生存曲线分析显示，miR-200b与患者预后负相关。相关研究学者表明[18],miR-200b在肿瘤组织中的异常表达，可抑制或促进肿瘤的发生、发展，miR-200b可对上皮间质转化进行调节，并可靶向于FoxG1,促进宫颈癌的发展，与本文研究一致，表明miR-200b为类癌基因，可促进宫颈癌的发展。

研究显示[19],miRNA与lnc RNA可形成ceRNA调控网络，lnc RNA可通过miRNA反应元件竞争性结合miRNA,对miRNA及下游基因进行调控。研究显示[20-21],细胞质中lnc RNA可作为ceRNA结合miRNA,使miRNA对靶mRNA的调控进行阻碍，细胞中miRNA可与lnc RNA相互作用，对肿瘤的发展造成影响。本文研究发现，MATN1-AS1与miR-200b存在潜在作用关系，MATN1-AS通过海绵化miR-200b促进宫颈癌细胞的增殖，抑制其凋亡，抑制宫颈癌细胞中MATN1-AS表达，可降低miR-200b表达，且两者存在相关性，与患者预后相关，表明MATN1-AS1可作为miR-200b的ceRNA促进宫颈癌的发生、发展。

综上所述，MATN1-AS1、miR-200b高表达于宫颈癌患者，且两者为正相关，可对患者预后造成影响，MATN1-AS1可作为miR-200b的ceRNA促进宫颈癌的发生、发展，为临床治疗宫颈癌的新靶点，但因样本量过少，且未对其作用机制进行分析，因此还需后续进一步分析MATN1-AS1作为miR-200b的ceRNA参与宫颈癌发生、发展的具体机制，造福于更多的宫颈癌患者。

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