清热解毒口服液中黄芩苷的含量测定方法建立

2020-08-11 653 上传者：管理员

摘要：目的：建立清热解毒口服液中黄芩苷的含量测定方法。方法：高效液相色谱法，采用AgilentZORBAXSB-C18（250×4.6mm,5μm）色谱柱；以甲醇-水-磷酸（50:50:0.3）为流动相；流速0.8mL/min；检测波长为276nm。结果：在4.0259μg/mL～80.5176μg/mL浓度范围内黄芩苷的浓度和峰面积具有良好的线性关系，R=0.99999；平均回收率为99.99%,RSD=0.57%（n=9）。结论：本方法准确、可靠、重复性好，适用于清热解毒口服液中黄芩苷的含量控制。

关键词：
中药学
清热解毒口服液
高效液相色谱法
黄芩苷
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1、使用试剂和仪器

仪器为岛津20A高效液相色谱仪。

试剂磷酸为分析纯，甲醇色谱纯。

对照品为黄芩苷（批号：110715-201821，中国药品生物制品检定所，含量95.4%）。

清热解毒口服液（自制）。

2、测定方法和结果

2.1色谱条件（高效液相）

色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18(250×4.6mm,5μm）为色谱柱。

流动相：甲醇-水-磷酸（50:50:0.3）。

276nm为测定波长。

流速为0.8mL/min。

进样量为10μL。

2.2对照品溶液的配制

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇适量溶解后，用70%甲醇稀释制成每ml约含20μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3供试品溶液的配制

精密量取本品2ml，放置100ml容量瓶中，加70%甲醇适量，超声20分钟，放冷，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，用0.45微米滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4线性关系考察试验

对照品溶液的配制：称取约10mg黄芩苷对照品，置50ml容量瓶，加70%甲醇适量溶解后，用70%甲醇稀释至刻度。然后置适当的容量瓶中，精密量取不同体积对照品溶液，用70%甲醇稀释制成不同浓度的对照品溶液，采用上述色谱条件，注入液相色谱仪，分别精密量取10μL，并记录色谱图。进行线性回归，并计算R，纵坐标是峰面积（A）为，横坐标是浓度（C），表1为测定结果。

表1线性试验结果

结果表明，黄芩苷在4.0259μg/mL～80.5176μg/mL范围内有很好的线性关系。

2.5精密度试验

取黄芩苷对照品溶液（线性下浓度为20.1294μg/mL)10μL注入液相色谱仪，考察色谱图峰面积，重复进样6次测定，表2为结果。

表2测定结果（精密度试验）

结论，相对标准偏差小于2%（测定6次峰面积），有很好的精密度。

2.6重现性试验

采用上述方法，测定一批样品，在不同实验室由不同分析人员、不同色谱柱、使用不同仪器，表3为结果。

表3测定结果（重现性）

结果表明，RSD小于2%，本方法重现性较好。

2.7回收率试验

对照品贮备液的配制：精密称定约36mg黄芩苷对照品，置25ml容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至25ml容量瓶中。供试品溶液低、中、高浓度：置已精密加入1.0ml样品的100ml容量瓶中，精密量取1.6ml、2.0ml、2.4ml对照品贮备液各3份，加70%甲醇适量，超声20分钟，放冷，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，用0.45微米滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；对照品溶液：称取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇适量溶解并稀释制成每ml约含20μg的溶液，即得；采用上述色谱条件，注入液相色谱仪，峰面积记录，分别精密量取各10μl对照品溶液与供试品溶液，计算回收率以色谱图峰面积按外标法，表4为测定结果。

表4测定结果（回收率试验）

结果表明，各浓度下的平均回收率均在98%～102%之间，回收率的RSD小于2%，黄芩苷的回收率在98.97%～100.86%之间，该方法测定结果误差在允许的范围内，比较准确。

2.8结论

作为本品的含量测定方法经验证表明该方法可以，方法学验证结果具有良好的精密度、准确度和线性关系。

3、讨论

3.1研究流动相

研究过的流动相有(1)甲醇-水-磷酸（50:50:0.3)[1];(2)甲醇-水-冰醋酸（50:50:1)[2];(3)甲醇-水-冰醋酸（46:54:1)[3]；结果发现以(1)作为流动相效果最佳。

3.2试验比较了不同的甲醇-水-磷酸系统，发现甲醇-水-磷酸（50:50:0.3）分离效果最好，保留时间适宜。以70%甲醇、乙醇、70%乙醇为溶剂，考察了出峰面积，结果相同条件下70%甲醇最大、乙醇较大、70%乙醇出峰面积最小。是由于黄芩苷在乙醇中的溶解度较差。可以增强黄芩苷分离效果通过适当增加水和磷酸的比例后，溶剂改为70%甲醇可以有效地测定黄芩苷含量，该方法可以作为清热解毒口服液的含量测定方法。

参考文献：

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