首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 肿瘤科论文 > 肺癌论文 > 乳酸受体GPR81表达水平与晚期肺腺癌吉非替尼获得性耐药的相关性

乳酸受体GPR81表达水平与晚期肺腺癌吉非替尼获得性耐药的相关性

2023-07-10 138 上传者：管理员

摘要：观察乳酸受体(GPR81)在晚期肺腺癌(LUAD)组织中的表达水平，分析其与临床病理参数及吉非替尼获得性耐药的相关性。方法:通过免疫组织化学方法检测GPR81在65例LUAD患者组织中的表达情况，采用χ2检验分析其与患者临床病理参数的关系。影像学观察65例LUAD患者中有42例出现耐药，免疫组化检测其耐药后病理组织中GPR81的表达水平，采用配对χ2检验分析其与吉非替尼获得性耐药的关系。采用Kaplan-Meier生存分析法分析GPR81表达与患者无进展生存期(PFS)的关系，并采用Cox模型分析多因素与患者PFS的关系。结果:GPR81在LUAD患者肿瘤组织中的表达水平与肿瘤N分期及远处转移正相关(P<0.05)。42例LUAD患者吉非替尼耐药后肿瘤组织中GPR81表达水平高于用药前(P<0.05)。Kaplan-Meier单因素分析结果显示GPR81高表达患者的PFS明显低于GPR81低表达患者(P<0.05),Cox比例风险模型多因素分析结果显示GPR81的表达水平是影响晚期LUAD患者预后的危险因素。结论:GPR81高表达与肿瘤N分期、远处转移及PFS有关，表明其可能促进了LUAD的发生发展；GPR81在LUAD患者吉非替尼耐药后组织中高表达，表明其与吉非替尼靶向治疗耐药密切相关。

关键词：
GPR81
吉非替尼
癌
肺腺癌
获得性耐药
加入收藏

2022年全国癌症报告显示，肺癌仍位居我国发病率和死亡率之首，肺癌分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)和小细胞肺癌[1,2]。相关研究报道，肺癌患者中85%左右为NSCLC,在NSCLC的患者中肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)又是其最常见的亚型[2]。肺癌传统的治疗方法主要有化疗、放疗及外科的手术治疗等[3]。目前靶向治疗已成为晚期LUAD治疗的重要手段，LUAD中最常见的基因突变位点为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)基因突变，吉非替尼是一种靶向EGFR的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI),目前已经成为具有EGFR突变的NSCLC患者的一线治疗用药[4]。尽管其具有良好的初始疗效，但几乎所有患者在治疗一段时间后最终会发生耐药，目前已知的耐药机制有T790M、MET扩增、HER2扩增，以及向小细胞肺癌转化等[5],但仍约10%耐药机制未被阐明，因此进一步探讨耐药机制意义重大。

乳酸受体(G protein-coupled receptor 81,GPR81)主要存在于脂肪细胞和骨骼肌细胞中，在包括结肠癌、乳腺癌、宫颈癌、胰腺癌以及肺癌等多种肿瘤细胞中高表达[6]。研究发现，肿瘤细胞产生的乳酸以自分泌或者旁分泌的方式通过GPR81参与肿瘤的发生发展及耐药形成，并且GPR81介导免疫逃避、化疗耐药和促血管生成[7]。但目前关于GPR81与LUAD患者吉非替尼耐药的相关性鲜有报道。本研究通过探讨GPR81的表达水平与LUAD患者临床病理参数及吉非替尼获得性耐药的相关性，为解决吉非替尼耐药寻找新的治疗靶点。

1、资料与方法

1.1标本来源

回顾性收集2018年01月至2021年12月于我院诊断为晚期LUAD,并接受吉非替尼治疗的手术或穿刺活检标本65例。纳入标准：①经我院病理科诊断为LUAD组织并进行EGFR基因检测，发现具有EGFR突变(包括19号外显子缺失和21号外显子L858R突变);②给予吉非替尼标准化治疗，期间规律行影像学检查评估疗效；③所有临床患者均同意参与本研究，并已签署相关知情同意书。排除标准：①患者合并其他恶性肿瘤或存在严重的基础疾病，生存状态极差；②因随访丢失或患者死亡等原因导致的临床病历资料不完整。本研究已通过本院伦理委员会批准(批准号：2018011)。

1.2主要试剂与仪器

主要试剂：兔抗人GPR81多克隆抗体(1∶70)(美国Sigma-Aldrich公司),山羊抗兔二抗(1∶500)(美国Bioworld公司);牛血清蛋白(bovine serum albumin, BSA)(上海博士德生物科技有限公司);二氨基联苯胺(diaminobenzidine, DAB)显色试剂盒、苏木素染色液(北京中衫金桥生物技术有限公司)。主要仪器：倒置显微镜(日本Nikon公司)。

1.3方法

1.3.1免疫组化染色

将LUAD组织切片进行常规烤片、脱蜡，然后采用梯度乙醇进行脱水，并用柠檬酸钠缓冲液进行抗原的修复，3%H2O2消除内源性过氧化物酶活性，5%BSA封闭，加入一抗(1∶70)后置于4℃冰箱孵育过夜，室温放置约30分钟复温后使用PBS冲洗，加入山羊抗兔二抗孵育60分钟，PBS冲洗后DAB显色，苏木素液复染，中性树胶封片，最后于倒置显微镜下观察。

1.3.2结果判断

GPR81阳性表达定位于细胞质，棕褐色或棕黄色颗粒为阳性表达。免疫组化计分[8]为染色强度得分与阳性细胞百分比得分之积，0分为阴性表达，≥1分为阳性表达，其中0～4分为低表达，>4分为高表达。染色强度得分：无色记为0分，淡黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分；阳性细胞百分比得分：无表达记0分，6%～25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记3分，>75%记4分。

1.4疗效评价

患者口服吉非替尼治疗期间，以胸部CT为主要的影像学检查进行疗效评价，按照RECIST 1.1标准将疗效进行定义：①完全缓解：所有靶病灶和非靶病灶均消失，且肿瘤标志物水平正常；②部分缓解：所有靶病灶长径总和低于基线≥30%;③疾病稳定：病灶减小未达到部分缓解，增加未达到疾病进展水平，1个或多个非靶病灶和/肿瘤标志物水平异常；④疾病进展：基线值长径和增加至少20%或出现新病灶，或/和非靶病灶明确进展。以疾病进展视为耐药。随访患者的无进展生存期(progression-free survival, PFS)指患者开始口服吉非替尼治疗至患者耐药或末次就诊时间。随访方式包括电话随访、门诊及住院复查，随访时间截止至2022年06月，失访作为截尾数据。

1.5统计学方法

采用SPSS 26.0软件对数据进行分析，组间比较采用卡方检验。应用Kaplan-Meier方法进行单因素分析并绘制生存曲线，应用Cox比例风险模型进行多因素分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1肺腺癌组织中GPR81的表达水平及其与患者临床病理参数的关系

免疫组织化学结果显示，在LUAD组织中，GPR81阳性表达主要定位于细胞质，其中GPR81高表达25例，低表达40例。肿瘤N分期、远处转移与GPR81的表达密切相关，其组间差异经统计学分析具有统计学意义(P<0.05);而性别、年龄、是否吸烟、EGFR突变位点类型以及肿瘤T分期等与GPR81的表达无明显相关性，其组间差异经统计学分析均无统计学意义(P>0.05)(表1)。

2.2 GPR81的表达水平与吉非替尼获得性耐药的关系

65例LUAD患者规范行吉非替尼靶向治疗，其中有42例患者在用药过程中出现疾病进展，获取其病理组织切片，将其定义为耐药后，通过免疫组化法显示，耐药后肺癌组织中GPR81的表达水平高于用药前(图1)。将用药前与耐药后采用配对卡方检验统计学分析，结果显示GPR81在耐药后肿瘤组织中的表达水平明显高于用药前，组间差异经统计学分析具有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表1 GPR81的表达水平与肺腺癌患者临床病理参数的关系

2.3 GPR81的表达水平与肺腺癌患者预后的关系

通过Kaplan-Meier单因素生存分析，结果显示GPR81表达、肿瘤N分期以及远处转移与患者的PFS相关，组间差异经统计学分析具有统计学意义(P<0.05,表3),GPR81高表达组PFS明显低于GPR81低表达组(图2)。其中有统计学意义的变量采用Cox比例风险模型行多因素分析，结果显示GPR81的表达水平与LUAD的PFS相关，差异有统计学意义(P<0.05)(表4)。

表2 GPR81的表达水平与吉非替尼获得性耐药的关系n

3、讨论

肿瘤细胞需要产生足够的能力以维持细胞增殖的需要，其在有氧的情况下将摄取的葡萄糖经糖酵解代谢生成大量乳酸，这个过程被称为“瓦伯格效应”[9]。乳酸长久以来被认为是新陈代谢的废物，然而，越来越多的证据证明其可充当能源物质被肿瘤细胞所利用，参与细胞的增殖、迁移，以及血管生成、免疫逃避和化疗抵抗等[10]。在肿瘤的发生发展中，GPR81作为乳酸受体一直扮演着重要的角色。在宫颈癌中，相较于正常宫颈组织来讲，GPR81在宫颈鳞癌组织中的表达增加，并且与肿瘤分期有关[11]。在乳腺癌中，GPR81在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中表达上调，抑制细胞凋亡，同时促进血管生成[12]。此外，GPR81可通过促进乳腺癌1型易感蛋白的表达，增加肿瘤细胞的DNA修复率，参与化疗药物的耐药[13]。

图1 GPR81在用药前及耐药后肺癌组织中的表达情况(SP×200)

A、C:GPR81在用药前肺癌组织中的表达；B、D:GPR81在耐药后肺癌组织中的表达。

图2 GPR81表达水平对肺腺癌患者PFS的影响

本研究通过免疫组化法，检测了65例使用吉非替尼靶向药物前的LUAD患者的病理组织中GPR81的表达情况，发现GPR81的表达水平与肿瘤的N分期以及远处转移正相关，此外，Kaplan-Meier单因素分析及Cox比例风险模型多因素分析显示GPR81高表达的LUAD患者的PFS低于低表达患者，表明GPR81可能是LUAD患者PFS的独立危险因素。

在肝癌组织中，GPR81表达水平显著上调，并且与患者的治疗效果差和预后不良密切相关，敲低GPR81增强了肝癌细胞对索拉非尼的敏感性[14]。在肺癌细胞中GPR81高表达，并通过调节乳酸使得肺癌细胞中程序性细胞死亡蛋白1(PD-L1)表达增加，沉默GPR81导致PD-L1蛋白水平降低和PD-L1启动子活性失活[15]。研究发现[16],肿瘤相关成纤维细胞通过吸收肿瘤微环境的乳酸，以NF-κB通路促进肝细胞生长因子的分泌，从而诱导对多种靶向药物的获得性耐药。目前鲜有关于GPR81与吉非替尼耐药的相关性研究，本研究65例患者在用药过程中有42例发生耐药，获取其耐药后病理组织，通过配对卡方检验分析显示，GPR81在耐药后病理切片中的阳性表达高于用药前，表明GPR81表达水平与吉非替尼获得性耐药正相关。

表3肺腺癌患者PFS的单因素分析结果

表4肺腺癌患者PFS的多因素分析结果

综上，GPR81在LUAD组织中的表达情况与肿瘤N分期、远处转移及PFS密切相关；且GPR81高表达可能是吉非替尼获得性耐药的原因之一，但是GPR81影响吉非替尼耐药具体机制尚不明确，后续我们将进一步深入研究。

参考文献:

[3]赵梦梦,狄文玉,康小红肿瘤代谢异常与靶向药物耐药[J]医学研究生学报,2022,35(07):

[8]许良中,杨文涛免疫组织化学反应结果的判断标准[J] .中国癌症杂志,1996(04):2

基金资助:国家自然科学基金(编号:82074231,81874392);河南省重点研发与推广项目(科技攻关)(编号:212102310209);河南省海外英才研修项目(编号:HWYX2019085);

文章来源:赵梦梦,康小红.乳酸受体GPR81表达水平与晚期肺腺癌吉非替尼获得性耐药的相关性[J].现代肿瘤医学,2023,31(16):3028-3031.