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PDCD4和miR-107在阴茎癌组织中的表达及与患者预后的关系

2024-06-21 57 上传者：管理员

摘要：目的:探究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)及微小RNA-107(miR-107)在阴茎癌组织中的表达水平及与患者预后的关系。方法:选取2018年01月至2020年06月经本院确诊阴茎癌并行手术治疗患者32例，术中分别取患者阴茎癌组织(研究组)及癌旁正常阴茎组织(对照组)各32对，应用实时定量PCR(quantitative reverse transcription-PCR)检测两组PDCD4和miR-107的表达水平并分析其与临床病理参数及预后的关系，并采用Kaplan-Meier进行生存曲线分析及Logistic回归分析影响阴茎癌患者预后的因素。结果:研究组PDCD4表达量明显低于对照组，miR-107表达量明显高于对照组(P均<0.05);PDCD4和miR-107的表达与阴茎癌患者淋巴结转移、组织分级相关(P均<0.05),与年龄、吸烟史、饮酒史、肿瘤部位无关(P均>0.05);应用Kaplan-Meier法对生存率进行分析，miR-107低表达组生存率显著高于miR-107高表达组，PDCD4低表达组生存率低于PDCD4高表达组(P均<0.05)。多因素分析结果显示，TNM分期高、淋巴结转移、PDCD4低表达和miR-107高表达均是影响阴茎癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论:阴茎癌患者miR-107呈异常高表达，PDCD4呈低表达，二者均是影响阴茎癌的独立危险因素且有望作为预测阴茎癌患者预后的重要指标。

关键词：
实时定量PCR
微小RNA-107
程序性细胞死亡因子4
阴茎癌
预后
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阴茎癌是一种发生在阴茎区域的恶性肿瘤[1]。据统计，该病在男性人群中的发生率为3%～5%,多见于50岁以上有长期吸烟史和长期酗酒的男性患者[2]。其临床表现为进行性增大的病变及包膜形成，晚期可出现皮肤坏死、溃疡和淋巴结转移，临床主要以手术治疗为主如部分阴茎切除术、全阴茎切除术和腹股沟淋巴结清扫术。早期阴茎癌患者的5年生存率可达90%以上，而晚期阴茎癌患者5年生存率仅为10%左右[3]。近年来，免疫联合靶向治疗效果逐渐显现优势，但仍有部分患者预后较差，个体疗效差异显著。因此，选择一种合适的基因靶点显得尤为重要。

程序性细胞死亡因子4(programmed cell death factor 4,PDCD4)是一种广泛表达的转录共刺激分子的多功能蛋白，与细胞周期调节、细胞凋亡和肿瘤发生发展有关，在多种死亡细胞中表达并发挥着调节作用[4]。研究表明与其它蛋白相比，PDCD4可在多种肿瘤细胞系中表达，并与其生存和恶性进展有关。目前，关于PDCD4的研究主要集中在其对前列腺癌、胃癌等上皮细胞恶性转化的影响上[5]。另外，微小RNA-107(miR-107)作为miRNA的一种功能类似物，通过与其3'-UTR区碱基互补配对来调控 miRNA的表达，进而发挥调控作用[6]。有研究表明其在胃癌细胞系T24中可抑制细胞增殖，下调miR-107表达，进而发挥抗肿瘤作用[7]。但目前关于miR-107在阴茎癌中的研究还比较少，其具体作用机制尚不清楚。故本文通过分析PDCD4和miR-107的表达水平对阴茎癌患者预后影响，以期为肿瘤免疫治疗提供新的思路及靶点。

1、资料与方法

1.1 一般资料

本研究经我院医学伦理委员会批准，选取2018年01月至2020年06月经我院病理活检确诊阴茎癌并行手术的患者32例，术中分别取患者阴茎癌组织(研究组)及癌旁正常阴茎组织(对照组)32对，本次研究对象的临床资料完整，见表1。本研究获得患者及其家属同意并签署知情同意书。

1.1.1 纳入标准

(1)经病理学检测，均符合《中国泌尿外科疾病诊断治疗指南(2019 版)》[8]中的诊断标准，且首次确诊为阴茎癌并行部分阴茎切除术、全阴茎切除术和腹股沟淋巴结清扫术；(2)均为男性，年龄44～62岁，平均年龄(53.29±7.36)岁；(3)TNM分期均符合国际抗癌联盟发布的第7版TMN分期标准[9];(4)组织分级根据Broders分级分为高分化(G1)、中分化(G2)、低分化(G3)。

1.1.2 排除标准

(1)接受过放化疗治疗者；(2)多发肿瘤者；(3)伴有严重肝肾功能损伤者；(4)合并其他感染性疾病者。

表1 临床基线资料n

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器

兔抗人PDCD4 多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，PCR试剂盒购于上海邦景实业有限公司，逆转录试剂盒采购于上海优科唯生物科技有限公司，miRNA引物与内参采购于上海联祖生物科技有限公司，Trizol试剂购于爱必信上海生物科技有限公司，酶联免疫法(ELISA)仪器型号为LD-96A全自动酶标仪，试剂盒购于青岛普泽仪器科技公司，高速冷冻离心机型号Eppendorf 5424R购于南京伊诺达仪器设备有限公司。

1.2.2 组织RNA提取及反转录

入组后，用干净试管收集所有受试者清晨空腹静脉血10 mL,凝固30 min后采用3 000 r/min离心10 min, 分离后取血清，立即检测或置于-80 ℃下冷冻待测。术中分别取患者阴茎癌组织及癌旁正常阴茎组织行Trizol法按说明书提取出总RNA,加入3 μL逆转录酶按说明书进行混合反应，反应条件：室温下20 min、80 ℃延伸30 min、95 ℃灭活逆转录酶5 min。

1.2.3 采用实时定量(quantitative reverse transcription-PCR)法检测PDCD4和miR-107的表达水平PDCD4上游引物：5'-CCTGAACGTCTGGGRACTCCACA

C-3',下游引物：5'-CCGGTGCTCCTTGATGAGA-3',miR-107上游引物：5'-GCCGCAGCAGCATTGTACAGGG-3',下游引物：5'-CTAGTATGCAGGGTCCGACGACTT-3'。反应条件：96 ℃ 15 min, 随后95 ℃ 25 s, 60 ℃ 15 s和 72 ℃延伸30 s为一个循环，共重复35个循环。经公式2-ΔΔCt计算出PDCD4和miR-107的表达水平，并将患者分为低表达组和高表达组，严格按照说明书由同一人操作完成。

1.3 观察指标

(1)PDCD4和miR-107的表达水平与临床病理参数之间的关系，分别以PDCD4和miR-107表达水平中位数为标准分为高、低表达组，大于中位数为高表达，等于或小于中位数为低表达。(2)分析两组PDCD4和miR-107的表达水平。(3)PDCD4和miR-107表达水平与阴茎癌患者预后的关系。采用 Kaplan-Meier 进行生存曲线分析。(4)采用Logistic 回归分析影响阴茎癌患者预后的因素。

1.4 随访

所有患者自出院后采用门诊、电话等形式随访3年。其中，1～3个月随访1次，随访截至2023年06月或患者死亡时间，未出现脱落。记录所有患者生存情况，计算3年总体生存率。

1.5 统计学处理

所有资料采用SPSS 21.0软件处理，正态分布的计量资料以均数±标准差

表示，采用单因素方差分析，以t表示；计数资料以例数(n)和构成比(%)表示，采用卡方检验；生存分析采用 Kaplan-Meier法曲线分析血清PDCD4和miR-107表达水平与阴茎癌患者预后的关系；采用多因素Logistic回归分析可能影响阴茎癌患者预后危险因素，以P<0.05评价为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1 两组PDCD4和miR-107表达水平比较

研究组PDCD4表达量明显低于对照组，miR-107表达量明显高于对照组，组间差异具有统计学意义(P均<0.01),见表2。

表2 两组PDCD4和miR-107水平比较

表3 PDCD4和miR-107的表达与临床病理参数之间的关系n(%)

2.3 PDCD4和miR-107表达水平与阴茎癌患者预后的关系

经过3年随访，32例阴茎癌患者生存27例，死亡5例，应用 Kaplan-Meier 法对32例患者进行生存分析，miR-107低表达组生存率90.55%,显著高于miR-107高表达组63.48%(χ2=13.908,P=0.000),PDCD4低表达组生存率61.95%,低于PDCD4高表达组89.67%(χ2=17.607,P=0.000),差异有统计学意义(P<0.001),见图1。

2.4 影响阴茎癌患者预后的多因素Logistic 回归分析

多因素分析结果显示，TNM分期高、淋巴结转移、PDCD4低表达和miR-107高表达均是影响阴茎癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05),见表4。

图1 不同miR-107及PDCD4 表达水平阴茎癌患者的生存曲线

3、讨论

PDCD4是一种促生长因子，与细胞凋亡息息先关，可以与肿瘤细胞共培养形成的一种促肿瘤特性的细胞凋亡现象[10,11]。研究证实，PDCD4与多种疾病相关，如炎症性肠病、系统性红斑狼疮、神经退行性疾病等有密切联系或相互影响，也与肿瘤的发生发展相关[12,13,14]。PDCD4在机体免疫应答中起着重要作用，有希望成为肿瘤免疫治疗靶点的分子。研究发现，miR-107与人类基因启动子区域重叠程度较高，说明可能对人类疾病发生起到重要作用，可以作为研究人类疾病发生发展的生物标志物进一步研究[15]。因此，miR-107可能成为阴茎癌治疗的靶点。然而，国内关于这两种联合检测在肿瘤预后研究中未曾有过报道。

故本文分析PDCD4和miR-107的表达水平对阴茎癌患者预后影响，结果显示，PDCD4和miR-107的表达与阴茎癌患者淋巴结转移、组织分级相关，提示PDCD4和miR-107的表达水平与临床病理参数之间的关系密切，这与于忠浩[16]等人认为PDCD4表达水平与前列腺癌组织分级存在紧密相关的结果类似。进一步分析二者在癌组织及癌旁组织的表达水平，结果显示研究组(癌组织)的PDCD4表达量明显低于对照组(癌旁组织),miR-107表达量明显高于对照组。表明阴茎癌的发生与高表达的miR-107和低水平的PDCD4息息相关。也有研究表明，miR-107在多种肿瘤中表达异常，其中乳腺癌是最常见的，在miR-107表达异常增高时可导致靶基因的激活而出现细胞增殖抑制[17]。究其原因，如下：其一，分子学指标如抑癌基因与肿瘤的发生发展密切相关已经得到越来越多的研究证实。PDCD4作为一种新型的抑癌基因，在受到不同信号通路的调控后调整表达水平，随之调整细胞的生存周期。研究发现，PDCD4呈高表达可以抑制细胞的恶变，抑制肿瘤的转录、进展和翻译过程，从而起到抑制肿瘤发生发展的作用[18]。其二，miR-107在人类正常细胞中表达不明显，但在肿瘤组织中表达增加。miR-107通过与人类正常表达的 miR结合以抑制或促进其靶基因(mRNA)的表达和翻译。经学者研究明确提出，阴茎癌患者的癌组织与正常组织相比，miR-107表达显著，提示可能与阴茎癌的发生发展存在重要的关联。

本研究进一步绘制生存曲线图发现，miR-107低表达组生存率显著高于miR-107高表达组，PDCD4低表达组生存率低于PDCD4高表达组。这与张嘉宜[19]等人认为阴茎癌患者中miR-107升高，生存率降低这部分研究结果一致。提示PDCD4高表达、miR-107低表达的患者生存率较高，表明其可能成为阴茎癌患者预后的有效标志物。PDCD4基因位于染色体的10q25.2,其在细胞内合成并进行转运与多种蛋白激酶结合后降低其活性，从而抑制肿瘤细胞翻译的过程，增加患者的生存时间[20]。miR-107是一种在真核生物中高度保守的非编码 RNA,可以通过抑制靶基因 mRNA的稳定性来调节其翻译，影响细胞增殖、分化、凋亡和生长[21]。进一步通过多因素分析结果显示，年龄、饮酒史、吸烟史、肿瘤部位与阴茎癌患者预后不相关，而TNM分期高、淋巴结转移、PDCD4低表达和miR-107高表达均是影响阴茎癌患者预后的独立危险因素。表明PDCD4低表达和miR-107高表达可能是阴茎癌患者预后的一个重要的标记物。本研究为回顾性分析，纳入研究的例数相对较少，仍需进一步补充研究样本，增加研究方法，提高检验数据结果的准确性，以更有利的论证。

综上所述，阴茎癌患者miR-107呈异常高表达，PDCD4呈低表达，二者有望作为预测阴茎癌预后的重要指标。

参考文献:

[1]唐朝朋,周凯,盛正成,等.远处转移性阴茎癌的临床特征及预后影响因素分析[J].中华男科学杂志,2023,29(2):151-157.

[4]李红英,张会军,王军,等.lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响[J].中国医科大学学报,2023,52(10):904-909,916.

[5]巴赫,彭强,朱耀东.胃癌组织中PDCD4基因的表达和甲基化水平及其临床意义[J].肿瘤防治研究,2020,47(12):942-946.

[6]徐卫强,关翰,陈志军.miR-107靶向肿瘤蛋白D52抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭[J].蚌埠医学院学报,2022,47(10):1347-1351.

[7]李剑锋,蒋军林.miRNA-107､肿瘤坏死因子α及血清胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ联合检查对胃癌的诊断价值[J].国际老年医学杂志,2023,44(5):597-600.

[8]黄健.中国泌尿外科和男科疾病诊断治疗指南(2019版)[M].北京:科学出版社,2019:252-255.

[11]余伟,张志标,张能平,等.PDCD4促进吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究[J].现代肿瘤医学,2019,27(20):3571-3576.

[12]贺文珍,任建平,王海瑞,等.皮肤鳞状细胞癌组织中miR-421､PDCD4 mRNA的表达及意义[J].山东医药,2023,63(10):21-25.

[13] 姜艳,杨大群,王聪洋,等.抑癌基因PDCD4与肿瘤关系的研究进展[J].现代肿瘤医学,2015,23(22):3363-3366.

[14]冯春来,刘峰.miR-21和PDCD4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2015,23(22):3255-3258.