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OPN和VEGF的表达在老年乳腺癌复发转移中的意义

2020-09-21 109 上传者：管理员

摘要：目的探讨骨桥蛋白(OPN)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达在老年乳腺癌复发转移中的意义。方法回顾性收集2009年1月至2014年12月在遵义市第一人民医院行乳腺癌手术且获得随访的62例乳腺癌患者临床资料,根据5年内是否发生复发,将其分为5年内复发转移组37例(A组)及无瘤生存5年及以上组25例(B组);另收集2015年1月至2019年1月遵义市第一人民医院接收的正常乳腺组织(良性肿瘤旁组织)15例患者临床资料,将其设为C组。对比三组OPN、VEGF的水平,并分析OPN和VEGF的表达在老年乳腺癌复发转移中意义。结果A组血清中OPN、VEGF水平明显高于B组、C组,B组血清中OPN、VEGF水平明显高于C组(均P<0.05);A组OPN、VEGF阳性表达率均明显高于B组、C组,且B组OPN、VEGF阳性表达率明显高于C组(均P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,血清OPN、VEGF用于预测乳腺癌患者复发转移的曲线下面积分别为:0.723、0.707,预测价值好;且病理组织中OPN和VEGF用于预测乳腺癌患者复发转移的曲线下面积分别为:0.711、0.706,预测价值好。结论OPN及VEGF在乳腺癌中具有较高表达,阳性表达率高可能与乳腺癌的复发转移相关,可有效提示乳腺癌的预后情况。

关键词：
乳腺癌
复发转移
病理组织
良性肿瘤旁组织
血管内皮生长因子
骨桥蛋白
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乳腺癌好发于老年女性,发病率呈不断上涨趋势,具有较高死亡率,严重影响老年女性的身心健康及生命安全[1]。早期发现、诊断、治疗乳腺癌是提高生存率的关键。目前临床治疗乳腺癌虽然以综合治疗为主,但手术治疗仍不能忽视,且手术可有效清除病灶,对于手术患者进行定期随访、监测仍至关重要,可为复发转移的防治提供重要依据[2]。近年来,临床对乳腺癌复发转移的检测方法较多,不少学者认识到,肿瘤的发生是多基因参与及多步骤发生的过程,肿瘤标志物可能与乳腺癌的复发转移具有密切关系。近期有学者发现骨桥蛋白(OPN)在乳腺癌的发展过程中起到十分重要作用,但关于此项研究仍在初步阶段[3]。此外,血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤生成过程中特异性最高的促血管生长因子,对肿瘤血管的生成起到重要诱导作用[4]。目前临床常常将OPN、VEGF关系应用在肝癌、肺癌研究中,对乳腺癌的研究尚不多见,尤其是其联合表达在乳腺癌复发转移中的意义。本研究旨在探讨OPN、VEGF表达在老年乳腺癌复发转移中的意义。

1、资料与方法

1.1一般资料

回顾性收集2009年1月至2014年12月在遵义市第一人民医院行乳腺癌手术且获得随访的62例乳腺癌患者临床资料,根据5年内是否发生复发,将其分为5年内复发转移组37例(A组)及无瘤生存5年及以上组25例(B组)。另收集2015年1月至2019年1月期间遵义市第一人民医院接收的正常乳腺组织(良性肿瘤旁组织)15例患者临床资料,将其设为C组。患者均为女性,年龄60～75岁,平均(68.56±5.32)岁。纳入标准:①所有患者符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范》[5]中诊断标准;②入院之前未进行放化疗等相关治疗。③年龄60～75岁;④所有患者临床资料完整且影像学资料清晰;⑤复发或转移时进行活检经病理证实为乳腺癌复发或者转移。排除标准:①合并严重心、肝、肾等重要脏器病变者;②合并其他恶性肿瘤者;③合并感染性疾病或免疫系统疾病;④精神疾病患者或认知功能障碍者。3组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表13组一般资料对比(x¯±s)

1.2方法

1.2.1检测血清中OPN和VEGF水平

采集所有患者当日清晨空腹静脉血5ml,2500r/min离心15min,取上清液,放置在-20℃的冰箱中保存待检,血清中OPN(美国R&D公司提供试剂盒)、VEGF水平(上海西塘生物科技有限公司提供试剂盒)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定。不同水平检测均严格按照各自试剂盒说明书进行。

1.2.2检测病理组织中OPN和VEGF表达

仪器:北京中杉金桥生物科技有限公司提供的ZM-0174型兔抗人OPN多克隆抗体;兔抗人VEGF单克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司,BA0407);试剂:武汉博士德生物工程有限公司提供的SP-9001型免疫组织化学染色试剂盒;北京博奥森生物技术有限公司提供的二氨基联苯胺染色试剂;上海之信仪器有限公司提供的YD-1508R石蜡切片机;光学显微镜(南京江南光电集团股份有限公司,XS-200)。病理组织中的OPN、VEGF表达通过免疫组织化学法检测,取组织标本,通过甲醛溶液进行固定,对其进行脱水,透明1min(二甲苯中),给予常规包埋;对石蜡标本连续切片(厚4μm);对其进行脱蜡及水化;并放入到磷酸盐缓冲液(PBS)中冲洗3次,3min/次;通过在乙二胺四乙酸95℃下进行修复抗原15min,使得抗原充分暴露;置于3%H2O2室温下孵育10min,以消除内源性过氧化物酶活性;滴加封闭用正常山羊血清工作液15min,以减少组织中非特异性染色,倾去余液;加入一抗工作液(OPN、VEGF的浓度分别为1∶100、1∶150),置于4℃冰箱湿盒内过夜,PBS冲洗3次,3min/次;滴加生物素化二抗工作液,在37℃下孵育10min,PBS冲洗3次,3min/次;再次进行滴加SP试剂,并孵育15min,采用PBS进行冲洗,3次,3min/次;并通过二氨基联苯胺显色10min,用蒸馏水进行冲洗,通过苏木精进行复染,给予常规脱水、透明及封片等处理;在光学显微镜下进行观察并拍照。

1.3OPN和VEGF免疫组织化学评定标准[6]

评估方法为双盲法,当结果不一致时,可由2名以上的高资历医师共同商讨,最终确定结果。OPN染色主要定位在肿瘤细胞质,呈现棕黄色、弥漫状、间质少有染色;VEGF染色主要定位在癌细胞质,呈棕黄色,弥漫状,间质少有染色。在高倍显微镜下(×400),采用随机方式选择5个视野,200个肿瘤细胞/视野,将阳性细胞所占的比例计为a,染色强度计为b,根据a和b两方面进行分别计分,将a与b的乘积进行半定量分析。其中a计分如下:0分:无阳性细胞、1分:1%～10%、2分:11%～25%、3分:26%～50%、4分:51%～75%、5分:≥76%;b计分如下:0分:无着色、1分:淡黄色或黄色、2分:棕黄色、3分:棕褐色。以a与b的乘积作为最终得分,其中分数>3分为阳性,≤3分为阴性。

1.4统计学方法

采用SPSS20.0软件进行χ2检验,t检验;绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC)值。

2、结果

2.1血清中OPN和VEGF水平对比

A组血清中OPN、VEGF水平明显高于B、C组,B组血清中OPN、VEGF水平明显高于C组(均P<0.05)。见表2。

2.23组病理组织中OPN和VEGF阳性表达比较

A组OPN、VEGF阳性表达率均明显高于B组、C组,且B组OPN、VEGF阳性表达率均明显高于C组(P<0.05)。见表3。

2.3血清OPN和VEGF水平用于预测乳腺癌患者复发转移的价值分析

血清OPN、VEGF用于预测乳腺癌患者复发转移的AUC分别为0.723、0.707,预测价值好。见表4,见图1。

表23组血清中OPN和VEGF水平对比(x¯±s)

表33组病理组织中OPN和VEGF阳性表达率比较[n(%)]

表4血清OPN和VEGF水平用于预测乳腺癌患者复发转移的价值

图1血清中OPN、VEGF预测乳腺癌复发转移的ROC曲线

2.4病理组织中OPN和VEGF阳性表达用于预测乳腺癌患者复发转移的价值分析

病理组织中OPN和VEGF阳性表达用于预测乳腺癌患者复发转移的曲线下面积分别为0.711、0.706,预测价值好。见表5,见图2。

表5病理组织中OPN和VEGF阳性表达用于预测乳腺癌患者复发转移的价值

图2病理组织中OPN、VEGF表达预测乳腺癌复发转移的ROC曲线

3、讨论

乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤第一位[7]。该病多发于中老年女性群体,乳腺癌术后复发及转移是造成患者死亡的重要原因之一,可见,给予乳腺癌患者早期科学有效的诊断,对降低术后复发、转移,提高生存率具有十分重要的作用。学者认为[8]年龄、病理分期、组织学分级、手术方式等因素与乳腺癌患者的预后具有重要关系,但在临床上医师常发现,患者年龄、分期及病理类型等情况基本相近的乳腺癌患者,其预后也不尽相同,分析其原因在于,恶性肿瘤的发展受到多基因、多步骤等影响,故寻求更多影响乳腺癌患者预后的因素,成为临床目前研究的重点,这对提高无瘤生存率起到至关重要的作用。最近研究发现OPN是一种带负电荷且具有亲水性的糖蛋白,其可通过巨噬细胞、骨细胞等多种肿瘤细胞分泌,参与多种病理生理过程,且在乳腺癌发展过程中起到重要作用,但是OPN与VEGF联合及单独表达与乳腺癌复发转移相关性类研究仍处于初涉阶段[9,10]。

OPN基因的表达具有组织细胞特异性,受到多种生长因子、激素等的调控,在特定病理条件下,OPN能够与多种整合素受体及CD44相互结合,不仅能够促进肿瘤血管形成,也可使得肿瘤细胞发生增殖、侵袭,对抑制细胞凋亡等起到十分重要的作用[11,12]。近年来,有研究显示,乳腺癌发生受到OPN表达的影响,其在乳腺癌的发展、病变过程中起到至关重要的作用,临床可通过检测OPN水平,判断患者预后[13]。本研究结果表明OPN在乳腺癌组织中具有较高表达,可评价乳腺癌患者复发情况。很多学者与本实验具有相似的结论,高金亮等[14]研究认为OPN对评估乳腺癌生物学行为及患者预后具有一定的价值,OPN的表达强弱与乳腺癌恶性程度具有密切关系,正常患者OPN值为14～46μg/L,若与该值差异较大,则提示乳腺癌已发生转移。VEGF是一种可以由多种细胞分泌的糖蛋白,具有较高的血管渗透性,VEGF为肿瘤细胞的生长、新生毛细血管网的建立提供十分重要的营养基础;此外,VEGF也是一种具有高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂原,对肿瘤细胞的快速生长具有一定促进作用[15,16]。本研究结果可见VEGF对乳腺癌的预后具有显著影响,可评价乳腺癌复发情况。分析其原因在于,VEGF是重要的血管内皮生长因子,具有较高特异性,在肿瘤血管生成中起到重要作用,可诱导肿瘤血管生成,而乳腺癌的生长、复发及转移是依赖血管生成[17,18]。绘制ROC曲线结果显示,血清、病理组织中OPN和VEGF用于预测乳腺癌患者复发转移的预测价值好。

参考文献：

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