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乳腺癌miR-4500、NGF表达与术前磁共振征象的研究

2024-01-31 94 上传者：管理员

摘要：目的分析乳腺癌患者中miR-4500、神经生长因子（NGF）表达与术前磁共振（MR）征象的相关性。方法选取我院收治的乳腺癌患者105例，通过qRT-PCR法检测患者乳腺癌组织及癌旁组织中miR-4500、NGF mRNA表达水平，免疫组化法测定乳腺癌组织及癌旁组织中NGF的阳性表达率。分析乳腺癌组织中miR-4500、NGF表达与患者临床病理特征及MR征象的相关性。生物信息网站预测miR-4500与NGF的靶向关系，并分析二者表达的相关性。结果与癌旁组织相比，乳腺癌组织中miR-4500表达水平降低（P<0.05）,NGF mRNA水平、NGF阳性表达率升高（P<0.05）。年龄、病理类型、肿瘤分型、实质背景、表观弥散系数、强化曲线在不同miR-4500表达及NGF表达间差异无统计学意义（P>0.05），组织学分级、淋巴结转移、肿瘤直径、肿瘤形态、环形强化、瘤周水肿与miR-4500表达及NGF表达有关（P<0.05）。生物信息网站预测显示，miR-4500与NGF存在结合位点，乳腺癌组织中miR-4500表达与NGF mRNA表达呈负相关（r=-0.576,P<0.05）。结论乳腺癌组织miR-4500低表达，NGF高表达，二者与患者术前MR征象具有相关性，为MR征象提供了分子学依据。

关键词：
miR-4500
MR征象
乳腺癌
神经生长因子
靶向药物治疗
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乳腺癌是女性人群多发恶性肿瘤，由乳腺上皮细胞在各种刺激下异常增殖引发，发病率居女性恶性肿瘤之首，且有升高趋势，严重威胁患者生命[1,2]。乳腺癌治疗以手术为主，放化疗、分子靶向药物治疗为辅[3]。miR-4500可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移[4]及血管生成[5]，属于抑癌因子。TargetScanHuman数据库分析显示，miR-4500与神经生长因子（nerve growth factor,NGF）存在结合位点，NGF属于多功能生长因子，其可通过促进细胞膜上络氨酸激酶活化促进癌细胞的增殖[6]。Bruno等[7]研究显示，NGF由乳腺癌细胞合成及释放，促NGF信号传导与乳腺癌细胞侵袭和转移有关。医学影像学技术发展迅速，磁共振（magnetic reso‐nance,MR）征象可为临床提供无创、清晰的信息，反映乳腺病理变化，在乳腺疾病中有较好的应用[8]。生物学分子水平变化与MR征象的相关性对临床乳腺癌诊治有一定作用，但miR-4500、NGF表达与MR征象是否具有相关性尚不清楚。基于此，本研究通过分析乳腺癌患者术前MR征象与miR-4500、NGF的相关性，探讨MR征象与乳腺癌分子生物学特性的关系，以期为该病的诊治提供参考。

1、资料与方法

1.1 临床资料

选取本院2020年1月至2022年1月收治的乳腺癌患者105例，分析其术前MR及临床资料。纳入标准：①术前MR检查资料完整；②行手术治疗，术后留存癌组织及癌旁组织样本；③MR检查与手术间隔期在2周及以上。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②MR检查前接受过手术治疗或放化疗。

1.2 术前MR扫描

患者取仰卧位足先进，通过3.0T MR仪行双侧乳腺扫描。层厚/层间距为4 mm/0.5 mm;T1WI参数：TE为500 ms,TR为20 ms;T2WI参数：TE为5 300 ms,TR为80 ms;DWI参数：TE为8 400 ms,TR为90 ms，扩散敏感梯度场参数b为0、800 s/mm2。

增强扫描：视野280 cm×340 cm，矩阵280×340，层厚/层间距为1 mm/0 mm，以2.5 mL/s的流速注入钆喷酸葡甲胺盐显影剂（0.15 mL/kg）。采集MR征象，包括乳腺实质背景强化、腺体类型、表观弥散系数、强化曲线、环形强化、瘤周水肿等。

1.3 qRT-PCR法检测miR-4500、NGF mRNA表达

收集乳腺癌组织及其癌旁组织标本，通过RNA试剂盒提取组织RNA，将部分RNA逆转录为cDNA,qRT-PCR仪进行扩增：94℃预变性10 min,94℃15 s,60℃30 s,72℃30 s，循环35次。miR-4500以U6为内参，NGF以GAPDH为内参，2-△△Ct法测定组织中miR-4500、NGF mRNA表达水平。引物序列见表1。

1.4 免疫组化法检测NGF阳性表达

将石蜡保存的乳腺癌与癌旁组织标本脱蜡、切片、修复抗原，然后室温封闭；加入兔抗人NGF（稀释比1∶500),4℃过夜孵育；添加羊抗兔二抗IgG（稀释比1∶1 000)37℃孵育30 min,DAB染色试剂盒进行染色。染色强度评分：无染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞率评分：<25%为0分，25%～50%为1分，51%～75%为2分，>75%为3分。由2名专业人员进行评分，两项评分相乘，≤3分为阴性表达，>3分为阳性表达。

表1 引物序列

1.5 观察指标

收集患者年龄、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、肿瘤分型、肿瘤直径、肿瘤形态等临床资料及MR征象。生物信息网站预测miR-4500与NGF的靶向关系，并分析二者表达的相关性。

1.6 统计学分析

使用SPSS 22.0软件进行统计学分析，计数资料以率（%）表示，行χ2检验；计量资料以均数±标准差表示，行t检验。相关性分析采用Pearson法。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 乳腺癌组织与癌旁组织中miR-4500、NGFmRNA水平

与癌旁组织相比，乳腺癌组织中miR-4500水平降低（P<0.05),NGF mRNA水平升高（P<0.05），见表2。乳腺癌组织中NGF阳性表达率为76.3%，高于癌旁组织的23.8%，差异有统计学意义（χ2=57.619,P<0.001）。

表2 乳腺癌组织与癌旁组织中miR-4500、NGF mRNA水平比较

2.2 乳腺癌组织中miR-4500、NGF表达与临床特征及MR征象的关系

NGF阳性表达80例，阴性表达25例。以乳腺癌患者组织中miR-4500表达的均值（0.35）为界，将其分为miR-4500低表达组（<0.35,52例）与miR-4500高表达组（≥0.35,53例）。年龄、病理类型、肿瘤分型、实质背景、表观弥散系数、强化曲线在不同miR-4500表达及NGF表达间差异无统计学意义（P>0.05），组织学分级、淋巴结转移、肿瘤直径、肿瘤形态、环形强化、瘤周水肿与miR-4500表达及NGF表达有关（P<0.05），见表3～4。

表3 患者miR-4500、NGF表达与临床特征的相关性[例（%）]

表4 患者miR-4500、NGF表达与MR征象的相关性

2.3 乳腺癌组织中miR-4500与NGF mRNA的相关性

生物信息网站预测显示，miR-4500与NGF存在结合位点（图1）。乳腺癌组织中miR-4500与NGF mRNA表达呈负相关（r=-0.576,P<0.05），见图2。

图1 生物信息网站预测miR-4500、NGF结合位点

图2 miR-4500与NGF mRNA表达的相关性

3、讨论

乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一，2020年有226万例乳腺癌病例，该疾病是全球女性癌症死亡的主要原因[9]。MR等影像学技术为乳腺癌提供了直观图像，为临床患者的诊治提供参考。影像学成像机制建立在临床病变基础上，而分子变化会导致临床病变的发生，因此影像学检查的研究具有重要的意义[10]。了解特异性分子异常表达与影像学变化的相关性，可为影像学特征的指向性提供参考，有助于临床治疗方案的制定。

NGF是神经营养素因子家族成员，其受体包括p75 NTR，而p75 NTR属于肿瘤坏死因子受体家族，在机体正常组织、病变组织中均可存在，NGF可与p75NTR受体结合调节肿瘤的生长[11]。Vera等[12]研究显示，NGF/原肌球蛋白激酶通过上调血管内皮生长因子与cMYC表达，促进卵巢癌细胞增殖、血管生成。Mazaki等[13]研究显示，乳腺癌细胞中NGF可促进脊髓转移模型大鼠轴索生长和降钙素基因相关肽的表达。本研究生物信息学分析显示，miR-4500与NGF存在结合位点。miR-4500在非小细胞肺癌[14]、结直肠癌[15]、膀胱癌[16]中均发挥抑癌作用。呙月等[4]的研究显示，miR-4500可通过转录后下调LIN28B基因表达抑制乳腺癌的进展与转移。本研究乳腺癌组织中NGF mRNA与蛋白阳性表达率均高于癌旁组织，而miR-4500水平低于癌旁组织，且NGF、miR-4500表达与患者淋巴结转移、组织学分级相关，提示NGF在乳腺癌中发挥促癌作用，而miR-4500发挥抑癌作用；miR-4500与NGF mRNA表达呈负相关，且二者存在靶向结合位点，推测miR-4500可能通过调控NGF发挥作用。miR-4500、NGF可能通过激活患者体内相关信号通路，促进癌细胞的快速增殖与扩散，肿瘤浸润能力增强，从而导致癌症进展。瘤周水肿是乳腺癌恶性程度的重要MR参数，癌细胞增殖迅猛时通常伴新生血管生成，而新生血管较薄，通透性高，容易在肿瘤周围形成水肿[17]。研究发现，瘤周水肿也是乳腺癌预后不良的重要参数[18]。本研究中miR-4500、NGF表达与瘤周水肿相关，提示NGF可作为反映乳腺癌进展的重要指标，患者出现瘤周水肿征象时，可能病理表现为NGF高表达，miR-4500低表达。MR环形强化是乳腺癌侵袭过程中新生血管在对比剂填充下呈环状带，可反映疾病的进展，是乳腺癌患者复发及预后不良的危险因素[19]。本研究还发现，NGF、miR-4500表达与MR环形强化亦具有相关性，进一步提示了NGF、miR-4500参与乳腺癌的进展，也为MR环形强化的形成提供了分子依据。

综上所述，乳腺癌组织中miR-4500低表达、NGF高表达与患者术前MR征象具有一定相关性，为MR征象提供了分子学依据。但本研究参数单一，且病例数相对较少，后续将展开多参数及大样本的研究进一步验证结论。

参考文献:

[4]呙月,刘诗月,黄玉琴,等. miR-4500通过转录后下调LIN28B表达抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖[J].山西医科大学学报,2020,51(2):119-123. doi:10. 13753/j. issn. 1007-6611. 2020. 02. 003.

[8]朱景航,高小玲. MR征象与乳腺癌VEGF表达的相关性分析[J].影像诊断与介入放射学,2021,30(4):261-265. doi:10. 3969/j.issn. 1005-8001. 2021. 04. 004.

[13] Mazaki A,Yamauchi K,Orita S,et al. Nerve growth factor in breast cancer cells

[17]岳叶洼团,熊春来.磁共振T2WI序列瘤周水肿征象用于润性乳腺癌早期复发诊断的价值分析[J].影像研究与医学应用,2021,5(21):44-46. doi:10. 3969/j. issn. 2096-3807. 2021. 21. 021.

[19]黎冠峰. MR动态增强对不同组织类型乳腺癌的诊断及预后评价[J].现代医用影像学,2019,28(2):240-243.

基金资助:河北省2021年度医学科学研究课题计划(20210136);

文章来源:赵琦,付莉莉,刘晓云等.帕瑞昔布钠用于乳腺癌改良根治术超前镇痛的临床研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(01):7-11.