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miR-23a和APAF-1在子宫内膜癌中的表达及意义

2024-08-01 66 上传者：管理员

摘要：目的观察子宫内膜癌组织中微小RNA-23a(miR-23a)与凋亡蛋白酶活化因子-1(APAF-1)的表达变化并分析其临床意义。方法选取2018年5月至2020年5月于我院进行子宫内膜癌切除手术的123例标本为子宫内膜癌组，另选取其癌旁组织为正常组。检测子宫内膜组织中miR-23a与APAF-1的表达情况；分析miR-23a和APAF-1与患者临床病理的关系及二者的相关性，Kaplan-Meier法分析两指标对患者的生存情况的影响。结果与正常组相比，子宫内膜癌组miR-23a的表达升高，APAF-1 mRNA及蛋白表达降低（P <0.05）;miR-23a、APAF-1均与临床分期、组织分化程度及肌层浸润显著相关（P <0.05）;miR-23a与APAF-1呈显著负相关（P <0.05）;Kaplan-Meier曲线显示miR-23a低表达组与APAF-1阳性表达组中的PFS、OS显著高于miR-23a高表达组和APAF-1阴性表达组（P <0.05）。结论子宫内膜癌中miR-23a表达升高，APAF-1降低，二者与子宫内膜癌的发展及患者预后相关，有望成为临床上评估早期患者疾病进展及预后的生物标记物。

关键词：
临床意义
凋亡蛋白酶活化因子-1
发病率
子宫内膜癌
微小RNA-23a
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子宫内膜癌是常见的妇科恶性肿瘤，发病率逐年增加，严重危害女性身体健康[1-2]。由于大部分子宫内膜癌时被确诊时已处于中晚期且患者治愈率低、预后差，因而明确其发病机制并进行早期诊断及治疗具有重要意义[3]。目前子宫内膜癌的发病机制尚未完全清楚，而随着分子生物学技术的发展发现微小RNAs(mi RNAs）表达谱的异常与子宫内膜癌的发生发展及临床治疗效果等密切相关[4-5]。其中mi R-23a可调控细胞中靶基因的表达，并参与多种癌症的发生和发展[6-7]。抑癌基因APAF-1也在多种癌症的进程中起着重要角色[8-9]。但目前尚未有关于miR-23a与APAF-1在子宫内膜癌组织中表达变化及临床意义的报道。因此本研究旨在分析mi R-23a与APAF-1在子宫内膜癌组织及癌旁组织中的表达，及其与疾病发展的关系，期望为临床上早期疾病的诊断及预后提供数据支撑。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取我院2018年5月至2020年5月期间共123例进行子宫内膜癌切除术患者作为研究对象，将患者切除的癌组织标本作为子宫内膜癌组，同时将其癌旁组织（>癌组织边缘3 cm）作为正常组。研究对象年龄52～70岁之间，平均（61.25±7.56）岁。收集研究对象的临床病理资料，并根据相关分期标准对患者进行临床分期[10]。纳入标准：（1）通过病理确诊；（2）未经过化、放疗治疗的患者；（3）病灶无明显坏死区；（4）临床资料完整者。排除标准：（1）自身免疫性疾病者；（2）癌旁组织具有炎性细胞浸润；（3）严重肾脏损伤者合并其他恶性肿瘤者。本研究已获得本院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1 q RT-PCR法检测子宫内膜组织中mi R-23a与APAF-1 m RNA表达量

从-80℃冰箱中取出保存好的子宫内膜组织样本，按照试剂盒说明提取组织总RNA，并反转录为c DNA，然后按照PCR试剂盒说明书（北京恩硕科技有限公司）进行PCR反应检测mi R-23a和APAF-1表达。引物由上海生工合成，序列见表1。每个样本均做3个重复，通过2-ΔΔCt算法计算二者相对表达量。

表1 q RT-PCR引物序列

Tab.1 q RT-PCR primer sequences

1.2.2免疫组化法检测子宫内膜组织中APAF-1蛋白表达

组织经石蜡切片后通过SP法染色，并使用DAB进行显色，苏木素复染、梯度乙醇脱水后进行封片，随后在400倍镜下进行观察。

1.3结果判定

从每个切片中随机挑选5个视野，统计阳性染色细胞数。观察并记录视野中阳性细胞的百分比与染色程度。无色记为0分，淡黄色记为1分，棕黄色记为2分。阳性细胞百分比，<5%记为0分，5%～25%记为1分，26%～50%记为2分，>50%记为3分。两项得分相乘后，≤1分为阴性组，≥2分为阳性组。

1.4随访

对所有患者进行3年随访，统计患者无生存进展期（PFS）和总体生存时间（OS）。

1.5统计学方法

数据经SPSS 25.0软件分析，符合正态分布的计量资料表示为，行t检验；计数资料用例（%）表示，行χ2检验；相关性分析通过Pearson法进行；采用Kaplan-Meier对患者生存情况进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组mi R-23a与APAF-1 m RNA表达水平的检测结果

与正常组比较，子宫内膜癌组mi R-23a升高，APAF-1 m RNA水平降低（P<0.05）。见表2。

表2两组mi R-23a与APAF-1 m RNA表达水平的检测结果

2.2子宫内膜癌及癌旁组织中APAF-1蛋白表达情况

免疫组化结果表明，APAF-1在癌组织中的细胞质或胞膜中表达。子宫内膜癌组患者的癌组织中APAF-1蛋白阳性表达率66.67%(82/123）低于正常组30.89(38/123）（χ2=42.678,P<0.05）。见图1。

2.3 mi R-23a、APAF-1表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系

通过mi R-23a检测结果的中位值，将所有患者分为两高低组，其中高表达组83例，低表达组40例。结果显示mi R-23a与临床分期、淋巴结转移、组织分化程度及肌层浸润相关，APAF-1与临床分期、组织分化程度及肌层浸润相关（P<0.05）。见表4。

图1子宫内膜癌及癌旁组织中APAF-1蛋白表达情况（400×）

2.4 mi R-23a与APAF-1表达水平的相关性分析

mi R-23a与APAF-1表达水平相关性分析结果表明，mi R-23a与APAF-1呈显著负相关（P<0.05）。见图2。

2.5子宫内膜癌组织中mi R-23a与APAF-1表达与患者预后的关系

Kaplan-Meier法分析结果表明mi R-23a低表达组的PFS(23.03%）、OS(39.25%）均高于高表达组（18.26%、16.34%)(P<0.05),APAF-1阳性表达组的PFS(21.23%）、OS(41.28%）均高于阴性表达组（9.09%、17.26%)(P<0.05）。见图3、4。

图2 mi R-23a与APAF-1表达水平的相关性分析

表4 mi R-23a、APAF-1表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系

图3子宫内膜癌患者mi R-23a表达与PFS、OS的关系

3、讨论

子宫内膜癌占女性生殖系统恶性肿瘤的25%以上，随着现代生活节奏的加快促使其发病率逐年增加且开始趋于年轻化。目前其发病机制尚未阐明，流行病学显示绝经后子宫内膜息肉可转变为子宫内膜癌前病变而增加子宫内膜癌的风险，且代谢综合征及子宫内膜增生等均可能引发子宫内膜癌[11-13]。子宫内膜癌严重影响女性健康，因此，寻找可检测早期子宫内膜癌并能评估其预后的生物标志物具有重要的意义。大多数mi RNAs可直接发挥致癌或抑癌基因进而调控肿瘤细胞的增殖、分化及凋亡，且异常表达的mi RNAs可调节基因的表达影响子宫内膜癌的进程[14]。

mi R-23a作为mi R-23的亚型可参与细胞增殖、凋亡等过程，研究表明mi R-23a常发挥癌基因的作用并可作为多种肿瘤的标志物[15-16]。相关研究发现mi R-23a可通过调控转移抑制因子1蛋白的表达而呈高表达趋势，其能增强结肠癌细胞的侵袭转移能力，并与结肠癌患者临床分期及浸润深度紧密相关[17]。本研究发现子宫内膜癌中miR-23a表达明显升高，说明其在子宫内膜癌组织中呈上调表达且可参与疾病发生发展。相关研究报道指出mi RNAs与子宫内膜癌患者的病理分期、肌层浸润深度等有关[18]。另外本研究发现mi R-23a高水平表达与患者预后不良有关，提示高表达的mi R-23a在子宫内膜癌发生及转移过程中可能发挥癌基因的作用，其具有评估患者预后的潜力。

图4子宫内膜癌患者APAF-1表达与PFS、OS的关系

APAF-1基因是一种分子量为130 k D的蛋白质分子，研究表明APAF-1可在多种恶性肿瘤中发挥抑癌基因的作用并参与癌症的发生、发展[19]。APAF-1是线粒体凋亡途径中的促凋亡因子，研究发现APAF-1在化疗耐药卵巢癌患者中表达水平显著降低且与患者克服耐药性及预后密切相关[20-21]。相关研究表明前列腺癌组织中APAF-1呈低表达并可通过作用于细胞凋亡途径参与结肠癌的发生发展，对患者预后具有一定的预测价值[6]。子宫内膜癌的发生与细胞凋亡过程有关，由此本研究发现组APAF-1表达水平在子宫内膜癌组织中降低，提示其可能参与子宫内膜癌的发生，推测APAF-1降低导致其介导的细胞程序性死亡过程受到抑制，进而促使大量突变细胞生成导致肿瘤的发生。另外，本研究结果显示APAF-1与临床分期、分化程度及肌层细胞浸润呈显著相关性，且Kaplan-Meier曲线表明APAF-1的阴性表达与患者治疗后的预后不良紧密相关，提示APAF-1可能介导子宫内膜癌的发生及发展，其可作为一个辅助指标来评估患者预后。研究发现mi R-23a可在结肠癌中发挥致癌基因的作用并促其靶基因APAF-1下调表达进而促进胰腺癌细胞增殖、分化导致病情加重[22]。本研究发现mi R-23a与APAF-1呈负相关，提示mi R-23a可能通过抑制APAF-1表达而影响癌细胞的增殖与凋亡并参与子宫内膜癌的发生、发展。本研究结果提示子宫内膜癌中mi R-23a可通过抑制APAF-1表达而发挥癌基因的作用并加快肿瘤细胞的增殖分化及迁移从而参与癌症的发生与发展，二者均与评估患者早期疾病进程及预后具有重要意义。

综上所述，子宫内膜癌中mi R-23a呈高表达，APAF-1呈低表达，且二者共同参与癌症的进程并与患者预后密切相关。本研究为子宫内膜癌的诊治提供新的研究方向，但本研究样本量较少，且未能深入探究二者在子宫内膜癌中的作用机制，后续将继续扩大样本量，进一步验证本研究结果，并深入探究二者具体作用机制。

参考文献:

[10]沈铿,彭澎,吴鸣.国际妇产科联盟妇科肿瘤2009年分期的解读[J].中华妇产科杂志,2010, 45(10):721-724.

[14]李松,董莉丽,孙丽,等.微小RNA-191通过靶向调节TET1影响子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭[J].实用医学杂志,2021, 37(8):1014-1018.

基金资助:江苏省妇幼健康科研项目(编号:F202134);

文章来源:张琼,何素丽.miR-23a和APAF-1在子宫内膜癌中的表达及意义[J].实用医学杂志,2024,40(15):2116-2120.