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急性髓系白血病患者血清HDAC2的表达及其临床意义

2024-10-08 59 上传者：管理员

摘要：目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者血清组蛋白去乙酰化酶2 (HDAC2)的表达及其临床意义。方法:纳入2017年4月-2019年4月在本院接受治疗的150例AML患者为AML组,并进一步按生存情况分为生存组108例、死亡组42例。另纳入同期健康体检者100例为对照组。采用实时定量PCR检测患者血清HDAC2表达水平;采用Cox回归分析患者不良预后的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清HDAC2对患者不良预后的预测效能。结果:与对照组相比,AML组患者血清中HDAC2、白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、C反应蛋白(CRP)的表达显著上升(均P<0.05)。与生存组相比,死亡组患者血清中HDAC2的表达亦显著上升(P<0.05)。AML患者血清HDAC2与IL-6、TNF-α、IL-1β和CRRP水平呈正相关(r=0.567、0.559、0.623、0.537)。Cox回归分析结果显示,IL-6、TNF-α、IL-1β、HDAC2均是影响AML患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。ROC分析结果显示,AML患者血清HDAC2水平预测AML不良预后的AUC值为0.862。结论:AML患者血清HDAC2表达水平升高,与IL-6、TNF-α、IL-1β和CRP水平呈正相关,是AML患者不良预后的独立危险因素,对AML患者不良预后的预测价值较高。

关键词：
AML
急性髓系白血病
恶性增殖性疾病
组蛋白去乙酰化酶2
预测价值
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急性髓系白血病（AML）是恶性增殖性疾病，具有高度异质性[1]。其特征为增殖失控、分化抑制、白细胞凋亡阻断和正常造血细胞减少，是最常见的成人白血病类型[2]。虽AML在基因组水平上诊断和治疗的效果较好，但其易进入复发期和难治期、累及多个器官而导致预后不良，且据美国癌症协会预测，至2020年，美国将有21 040例新的AML患者，其中11 180人将死于该疾病[3]。因此，亟待寻找新的有效生物因子。组蛋白去乙酰化酶（HDAC）家族是一组维持组蛋白和非组蛋白乙酰化/脱乙酰化平衡的蛋白质，通过改变染色质的结构和调节转录因子对其靶DNA序列的可及性来控制基因的转录，调控基因表达的表观遗传，在慢性粒细胞白血病实验中发现HDAC2敲除后可显著诱导癌细胞凋亡[4]。HDAC2在AML中虽有研究，但未见HDAC2对预测AML预后的报道[5]。本研究旨在探讨AML患者血清中HDAC2的表达及对AML预后的预测情况，以期为防治AML提供依据。

一、资料与方法

病例资料

纳入2017年4月-2019年4月在本院接受治疗的150例AML患者为AML组。纳入标准：临床首次诊断为AML[6]；未进行相关治疗；无白血病、遗传代谢性疾病史；预计生存期≥6个月；患者临床资料完整。排除标准：合并心、肝、肾等重要脏器功能不全者；合并其他血液系统疾病者；合并恶性肿瘤者。另纳入同期健康体检者100例为对照组。纳入标准为心、肝、肾等重要脏器功能完善；无免疫系统疾病；无血液系统疾病。排除标准为合并贫血人群。本研究经医院伦理委员会审核批准。

HDAC2 m RNA表达检测

取所有受试者早晨空腹静脉血5 ml，保存于-80℃待测。使用RNeasy Mini Kit(QIAGEN,Hilden，德国）纯化血清中的总RNA，并用Prime Script RT-PCR试剂盒（上海嘉楚生物工程有限公司）反向转录。计算A260/280比率以评估RNA质量和纯度。在推荐的热循环设置下，使用Rotor-Gene6000系统（Corbett Life Science,QIAGEN）上使用Sensi FAST™SYBR®No-ROX试剂盒（Bioline）进行q PCR。以β-actin为内参。基因相关序列见表1。反应结束后采用2-ΔΔCt法计算HDAC2 m RNA的相对表达量。

血清细胞因子的检测

白介素-1β(IL-1β）、白介素-6(IL-6）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α）、C反应蛋白（CRP）的检测根据相关试剂盒（武汉博士德生物公司）说明书进行操作。依据程序加入样品后，使用酶标仪进行读数，进而计算血清中上述因子水平。

随访

术后通过电话访问、门诊复查等形式对全部患者进行为期3年的随访，全部病例无失访，统计随访期间患者生存情况。中位随访时间24(14-36）个月。按生存情况将患者分为生存组和死亡组。

统计学分析

所有数据均使用SPSS 25.0软件完成统计分析。计量资料用（±SD）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用百分比表示，比较采用χ2检验；采用Cox回归分析AML患者不良预后的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价血清HDAC2对AML患者不良预后的预测效能。P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

AML组与对照组基础资料及血清中HDAC2、细胞因子水平的比较

与对照组相比，AML组患者血清中HDAC2、IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP的表达显著上升（P<0.05），而两组的年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史以及文化程度之间无显著性差异（P>0.05）（表2）。

不同预后AML患者血清HDAC2水平比较

生存组与死亡组患者血清中HDAC2水平分别为1.45±0.32和1.73±0.56，与生存组相比，死亡组患者血清中HDAC2的表达显著上升，比较差异有统计学意义（P<0.001）。

HDAC2表达水平与AML患者临床特征的关系

AML患者HDAC2表达与年龄、性别、吸烟史、糖尿病、高血压、慢性肾脏病以及FAB分型无关（P>0.05）（表3）。

HDAC2表达水平与炎症因子的相关性

AML患者血清HDAC2表达与IL-6、TNF-α、IL-1β和CRP水平呈正相关（r=0.567、0.559、0.623、0.537）（图1）。

AML患者预后影响因素的Cox回归分析

以IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP、HDAC2水平为自变量，以预后（死亡=1，生存=0）为因变量，进行Cox回归分析，结果显示，以上5个因素均对AML患者预后有影响（P<0.05）。多因素分析发现，除CRP外，IL-6、TNF-α、IL-1β、HDAC2均是影响AML患者预后的独立危险因素（表4）。

AML患者HDAC2表达水平预测不良预后的价值分析

以AML患者血清HDAC2水平为检验变量，以AML预后结果为状态变量（生存=0，死亡=1）绘制ROC曲线，结果显示，AML患者血清HDAC2水平预测AML不良预后的AUC、灵敏度、特异度分别为0.862、83.33%、76.85%，临界值及95%CI分别为1.58、0.796-0.912(P=0.000）（图2）。

三、讨论

AML是一种血液系统恶性肿瘤，临床表现包括贫血、出血、感染以及肝、脾和淋巴结浸润，特征是克隆增殖异常以及骨髓造血干/祖细胞分化停滞，骨髓中原始和未成熟细胞（白血病细胞）的异常增殖损害正常的造血功能[7-8]。虽然大多数AML患者最初对化疗有反应，但AML疾病化疗后易复发，是导致患者发病率增加和生存率降低的主要原因[9]。据估计，AML患者2年和5年的总生存率分别为32.0%和24.0%，明显低于其他白血病亚型[10]。因此，需要寻求更有效的生物标志物对AML疾病进行早识别、早预防。

HDAC是组蛋白修饰过程中一类重要的酶，催化并调控组蛋白去乙酰化，在癌症的进展中起着关键作用[11]。研究发现，HDAC2在结直肠癌中高表达，与较差的总生存期相关，HDAC2敲低可防止癌细胞的迁移和侵袭[11]。Shan等[12]发现，在乳腺癌患者中，HDAC2过表达与肿瘤分级高、淋巴结阳性、预后不良显著相关，且HDAC抑制剂已成为一类很有前景的新型多功能抗癌剂。Hu等[13]报道，通过上调micro RNA-34a抑制HDAC2的表达来靶向诱导细胞凋亡和外泌体脱落，进而促进AML干细胞的死亡。Zhao等[14]也发现，抑制HDAC1和HDAC2可降低BRCA1、CHK1和RAD51的表达，增强阿糖胞苷或柔红霉素诱导的DNA损伤和凋亡，以及对消除阿糖胞苷或柔红霉素诱导的AML细胞中的细胞周期检查点激活有重要作用。本研究AML患者血清中HDAC2表达水平显著高于对照组，死亡组的HDAC2表达水平显著高于生存组，提示HDAC2对AML疾病进展有促进作用，与AML预后有关。与上述研究结果一致，Vitkevičienė等[15]也发现，HDAC2在难治性AML患者中有更高的表达，可能对AML预后有一定的诊断作用。进一步统计分析显示，HDAC2是AML不良预后的危险因素，预测AML不良预后的AUC为0.862，提示HDAC2对AML不良预后的预测价值较好，有望成为AML疾病不良预后的预测因子，同时也进一步证实HDAC2参与了AML的发生、发展。

AML对免疫系统的影响使患者对感染性并发症的易感性更高[16]。CRP是急性期蛋白，对感染的特异性较低，是临床实践中最常用的炎症标志物，在炎症和传染病中水平上升[17]。本研究结果显示，AML患者血清中CRP水平显著高于对照组。Gradel等[16]发现，AML组CRP水平随着WHO表现评分（PS）的提高而增加，本研究结果与文献报道一致。IL-6是一种重要的细胞因子，参与炎症、免疫调节和癌症（促进增殖、减少细胞凋亡、促进转移和癌细胞代谢）的多种调节途径[18]。TNF-α是一种具有广泛功能的细胞因子，参与白血病的所有阶段，包括细胞增殖、转化、血管生成、炎症和髓外浸润等[19]。在IL-1中，IL-1β的过量产生导致下游效应物NF-κB的激活，在多达73%的AML患者中发现NF-κB的活化增加，并导致细胞凋亡抵抗、持续增殖和化疗难治性[20]。本研究结果显示，AML患者血清中IL-6、TNF-α、IL-1β表达水平显著高于对照组，且均是影响AML患者预后的独立危险因素，提示AML患者机体处于高度炎症的状态。Stevens等[21]发现，AML患者的IL-6、TNF-α、MIP-3a和IL-1β有助于诊断AML疾病的进展。进一步统计分析显示，AML患者血液中CRP、IL-6、TNF-α、IL-1β水平均与HDAC2水平呈正相关，表明HDAC2可能通过调节AML相关炎症反应，影响AML疾病进展。NF-κB信号通路的激活可导致IL-1β、TNF-α等炎症细胞因子急剧上调[20,22]。研究发现，HDAC2可参与并促进NF-κB通路活化[23]。因此，本研究推测HDAC2在AML疾病中可能通过激活NF-κB通路调节机体免疫炎症，促进CRP、IL-6、TNF-α、IL-1β等炎症因子的释放，促进疾病的进展，然而具体机制还需进一步研究。

综上所述，AML患者血清中HDAC2水平较高，是AML疾病不良预后的预测因子，可能通过促进IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP等炎症因子的释放，加重疾病进展。本研究只探讨了AML患者血清HDAC2的表达以及HDAC2水平对AML疾病预后的预测效能，并未深入机制研究，AML疾病的具体机制还需后续进一步探索。

参考文献:

6中华医学会血液学分会白血病淋巴瘤学组.中国成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)诊疗指南(2021年版).中华血液学杂志,2021,42(8):617-623.

基金资助:湖州市科技计划项目(2015GYB28);

文章来源:黄静,杨晶晶,徐彦超,等.急性髓系白血病患者血清HDAC2的表达及其临床意义[J].中国实验血液学杂志,2024,32(05):1317-1322.