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EBP50和EGFR在透明细胞性肾细胞癌组织中表达及临床意义

2024-02-22 23 上传者：管理员

摘要：目的:探究ERM结合磷酸化蛋白50(ERM-binding phosphoprotein-50,EBP50)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)及正常肾组织中的表达及相关性，并分析二者与患者临床病理特征之间的关系。方法:用免疫组化检测原发ccRCC、转移ccRCC和正常肾组织中EBP50及EGFR的表达，并在原发ccRCC中检测EBP50和EGFR的相关性及两者与ccRCC临床病理特征的关系。结果:EBP50在原发和转移ccRCC中的阳性表达率低于正常肾组织，EGFR在原发和转移ccRCC中的阳性表达率高于正常肾组织；原发ccRCC中，EBP50的表达差异在年龄、Fuhrman分级中具有统计学意义，EGFR的表达差异在肿瘤最大径、Fuhrman分级中具有统计学意义；EBP50与EGFR的表达在原发ccRCC中呈负相关。结论:在ccRCC中，EBP50低表达，EGFR高表达，EBP50可能发挥抑癌作用，EGFR可能发挥致癌作用；EBP50可能通过抑制EGFR的表达和功能来发挥作用；EBP50和EGFR可辅助病理医师判断ccRCC的分级。

关键词：
ERM结合磷酸化蛋白50
手术切除
肾肿瘤
表皮生长因子受体
透明细胞性肾细胞癌
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肾细胞癌起源于肾小管上皮细胞[1],是成人最常见的肾肿瘤，其中透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)是肾癌最常见的组织学类型[2]。ccRCC大多恶性程度较低[3],早期临床症状不明显，就诊时约25%的患者已转移[4]。且ccRCC的主要治疗方式是手术切除，其他有效手段较少，因此，充分研究ccRCC的发病机制、探索早期诊断标志物及新的治疗靶点是非常有必要的。

ERM结合磷酸化蛋白50(ERM-binding phosphoprotein-50,EBP50)由位于染色体17q25.1[5,6]上的基因编码，是一个由358个氨基酸组成的蛋白质，含有两个PDZ结合结构域(PDZ-Ⅰ、PDZ-Ⅱ)和1个ERM结合结构域，其通过PDZ和ERM结构域可与多种蛋白质相互作用[7],发挥抑癌作用。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一种受体型的酪氨酸激酶，与肿瘤的细胞增殖、侵袭性生长和转移均密切相关[8]。有研究报道EBP50可以与EGFR相互作用[9],阻止EGFR磷酸化及其下游的信号传导，从而抑制相关的细胞增殖[10]。EBP50与EGFR的相关性已在宫颈癌[11]和胆管细胞癌[12]中被证实，但在ccRCC中还未见报道。

本研究用免疫组化的方法检测EBP50和EGFR在正常肾组织和ccRCC中的表达，并分析其与ccRCC临床病理特征的关系，分析EBP50和EGFR在ccRCC中的相关性，为ccRCC的诊断及治疗提供新的理论依据。

1、资料与方法

1.1标本来源

收集河北医科大学第三医院2019年至2021年病理诊断为ccRCC的标本86例，其中64例为肾组织的原发灶，22例为肾组织以外的其他部位转移灶(3例分别为十二指肠、肺和椎管内转移，其他均为骨转移)。将原发灶归为原发组，转移灶归为转移组，且原发组与转移组中无同一病例。收集距肿瘤边缘约2 cm[13]的癌旁正常肾组织46例，归为正常组。收集原发组患者的年龄、性别、肿瘤最大径、Fuhrman分级、TNM分期及是否累及肾周脂肪等资料并进行分组[14,15,16]。ccRCC的分期依据2018年AJCC的TNM分期，分级采用Fuhrman分级。所选标本均经10%的中性福尔马林固定。该研究经河北医科大学第三医院医学伦理委员会批准。

1.2实验方法

将石蜡切片脱蜡至水，用柠檬酸盐抗原修复液高温高压修复抗原，3%的H2O2溶液室温下孵育10分钟阻断内源性过氧化物酶，于37℃温箱中用正常小牛血清封闭非特异性抗原30分钟。分别加EBP50(1∶200)和EGFR(即用型工作液)抗体，4℃冰箱过夜。滴加MaxVisionTMHRP试剂，37℃孵育20分钟，加100～200微升新鲜配制的DAB显色液，室温下孵育5分钟，苏木素染液复染，脱水透明，中性树胶封固。用已知EBP50阳性的人正常肾组织做EBP50的阳性对照，已知EGFR阳性的肺腺癌组织做EGFR的阳性对照，用PBS溶液代替一抗做EBP50、EGFR的阴性对照。兔抗人EBP50单克隆抗体购自美国Abcam公司，兔抗人EGFR单克隆抗体购自上海杰浩公司。

1.3结果判读

由两位病理医师对切片运用半定量积分方法进行双盲判读。EBP50主要表达于胞浆，EGFR主要表达于胞浆和胞膜。每张切片随机选取5个400倍视野，观察阳性细胞的占比和染色强度。将阳性细胞占比分为5个等级：0分(<5%)、1分(5%～25%)、2分(26%～50%)、3分(51%～75%)、4分(>75%);染色强度分为4个等级：0分(细胞无着色)、1分(浅黄色)、2分(棕黄色)、3分(棕褐色)。阳性细胞占比与染色强度得分相加，总分≥4分为阳性(+),<4分为阴性(-)[17]。

1.4统计学分析

所有数据应用SPSS 21.0进行分析。用卡方检验和Fisher确切概率法分析EBP50和EGFR在正常肾组织、原发和转移ccRCC中的差异，并分析EBP50和EGFR与原发ccRCC临床病理特征的关系。在原发ccRCC中用Spearman秩相关分析EBP50和EGFR的相关性。P<0.05时差异具有统计学意义。

2、结果

2.1 HE染色结果

对所选的每例标本进行常规HE染色观察，具体结果见图1。

图1 HE染色结果

2.2 EBP50在正常肾组织、原发及转移ccRCC中的表达

结果表明(见图2),三者的阳性表达率差异有统计学意义(P=0.000,见表1)。EBP50在原发ccRCC中的阳性表达率低于正常肾组织(P=0.000),在转移ccRCC中的阳性表达率低于正常肾组织(P=0.000),但其在原发和转移ccRCC中的阳性表达率差异无统计学意义(P=0.540)。

2.3 EGFR在正常肾组织、原发及转移ccRCC中的表达

结果表明(见图3),三者的阳性表达率差异有统计学意义(P=0.000,见表2)。EGFR在原发ccRCC中的阳性表达率高于正常肾组织(P=0.000),在转移ccRCC中的阳性表达率高于正常肾组织(P=0.004),但其在原发和转移ccRCC中的阳性表达率差异无统计学意义(P=1.000)。

图2 EBP50的表达情况

表1 EBP50在正常肾组织、原发及转移ccRCC中的表达n(%)

表2 EGFR在正常肾组织、原发及转移ccRCC中的表达n(%)

图3 EGFR的表达情况

2.4 EBP50在原发ccRCC中的表达与临床病理特征的关系

结果表明，年龄≤50岁的患者EBP50阳性表达率明显高于年龄>50岁者(P=0.001,见表3);Fuhrman分级为Ⅰ、Ⅱ级者EBP50阳性表达率明显高于Ⅲ、Ⅳ级者(P=0.001,见表3);EBP50的表达与性别、肿瘤大小、TNM分期及是否累及肾周脂肪等指标均无相关性(P均>0.05,见表3)。

2.5 EGFR在原发ccRCC中的表达与临床病理特征的关系

结果表明，最大径<5 cm的肿瘤EGFR阳性表达率明显低于最大径≥5 cm者(P=0.007,见表4);Fuhrman分级为Ⅰ、Ⅱ级者EGFR阳性表达率明显低于Ⅲ、Ⅳ级者(P=0.014,见表4);EGFR的表达与性别、年龄、TNM分期及是否累及肾周脂肪等指标均无相关性(P均>0.05,见表4)。

2.6 EBP50与EGFR表达在原发ccRCC中的相关性

将原发ccRCC中EBP50和EGFR的表达水平进行Spearman秩相关分析，结果显示，EBP50与EGFR的表达呈负相关(rs=-0.726,P=0.000,见图4)。

3、讨论

ccRCC目前主要的治疗方式是手术切除，约30%的患者术后会复发或转移[18],因此，探索ccRCC的发病机制、发现ccRCC的早期诊断标志物及更丰富的治疗方法是非常重要的。

EBP50发挥抑癌作用是通过与其他蛋白质相互作用实现的，如血小板衍生生长因子受体[19]、β-连环蛋白[9]等。其可以抑制乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌及胆管癌等的进展[5]。有研究表明，EBP50表达的下调与乳腺癌较差的组织学分级、较强的侵袭性有关，所以EBP50在乳腺癌中发挥抑癌作用[20]。上调乳腺癌细胞系中EBP50的表达会降低细胞增殖能力和肿瘤的侵袭力[21],进一步表明EBP50在乳腺癌中发挥抑癌作用。

表3 EBP50表达与各项临床病理指标间的关系

表4 EGFR表达与各项临床病理指标间的关系

图4原发ccRCC中EBP50与EGFR表达的相关性

EGFR是一种受体型的酪氨酸激酶，可以促进细胞的增殖、迁移[8],其过度激活与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，如肺癌、结肠癌、宫颈癌等[10],EGFR抑制策略一直在宫颈癌的治疗中进行[22]。在乳腺癌中EGFR通路的过度激活会导致癌细胞的增殖和迁移[20]。有研究发现，EGFR的过度激活在ccRCC中也很常见[23]。

本研究通过免疫组化技术分析了原发ccRCC中EBP50及EGFR的表达水平与临床病理特征的关系，发现年龄>50岁、Fuhrman分级为Ⅲ、Ⅳ级者EBP50的阳性表达率较年龄≤50岁、Fuhrman分级为Ⅰ、Ⅱ级者低，表明EBP50的表达与年龄、Fuhrman分级有密切的联系。而EGFR的阳性表达率在肿瘤最大径≥5 cm、Fuhrman分级为Ⅲ、Ⅳ级的标本中较肿瘤最大径<5 cm、Fuhrman分级为Ⅰ、Ⅱ级者高，表明EGFR的表达与肿瘤最大径、Fuhrman分级有密切的联系。

分析EBP50和EGFR在原发ccRCC、转移ccRCC及正常肾组织中的表达，发现与正常肾组织相比，原发或转移ccRCC中EBP50的表达水平均显著降低，EGFR的表达水平均显著升高，提示在ccRCC中EBP50可能发挥肿瘤抑制因子的作用，而EGFR可能会促进肿瘤的发生。在原发和转移ccRCC中EBP50和EGFR的表达水平差异均没有统计学意义，表明EBP50和EGFR的表达可能与ccRCC的转移无关，EBP50和EGFR的表达水平不能有效地评估ccRCC的转移潜能和预后。在与临床病理特征的分析中发现，EBP50和EGFR的表达水平均与TNM分期、是否累及肾周脂肪无关，进一步表明EBP50和EGFR的表达与ccRCC的转移无关。

神经纤维瘤病2(neurofibromatosis 2,NF2)是一种抑癌蛋白，EBP50可以与EGFR和NF2形成复合物，阻止EGFR下游的信号转导，从而起到肿瘤抑制因子的作用[24]。EBP50还可以消耗细胞膜上EGFR的数量[12]。CLAPÉRON等人发现在宫颈癌、乳腺癌等癌症中EBP50可以抑制EGFR介导的信号通路[10,11,12,20]。本研究对原发ccRCC的EBP50和EGFR表达水平进行相关性分析发现，EBP50和EGFR的表达水平呈负相关，提示二者在ccRCC的临床进展中可能发挥了相反的作用，在ccRCC中EBP50也可能通过抑制EGFR的数量和功能来发挥抑癌作用，但还需要进一步研究。

综上，与正常肾组织相比，ccRCC中EBP50的表达水平减弱，EGFR的表达水平增强，且二者的表达呈负相关，提示在ccRCC中EBP50可能有抑癌作用，EGFR可能有致癌作用，且EBP50可能通过抑制EGFR来发挥作用，这为寻找ccRCC新的治疗靶点提供了理论依据；EBP50和EGFR的表达水平均与Fuhrman分级有较大联系，提示二者可作为ccRCC分级的辅助手段。

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基金资助:河北省医学科学研究重点项目(编号:20230668);

文章来源:肖雪兰,王晓梅,吴丽萍等.EBP50和EGFR在透明细胞性肾细胞癌组织中的表达及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2024,32(06):1101-1105.