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TFF3和HER2在食管胃交界部腺癌中的表达及临床意义

2023-07-25 44 上传者：管理员

摘要：探讨三叶因子3(TFF3)及人表皮生长因子受体2(HER2)在食管胃交界部腺癌(AEG)组织中的表达及临床意义。方法选取140例行手术切除的AEG患者，采用免疫组化法检测AEG组织中TFF3的表达情况，免疫组化法及免疫荧光法检测HER2的表达情况，分析二者表达的差异及其与临床病理特征和预后的关系。结果在AEG组织中，TFF3的阳性表达率为51.43%,HER2的阳性表达率为15.00%。TFF3阳性多见于Laurén分型为弥漫型、出现淋巴结转移的患者。HER2阳性多见于Laurén分型为肠型的患者。HER2阴性患者TFF3阳性表达率高于阳性患者(χ2=5.167,P=0.023)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，TFF3表达会影响AEG患者生存率，TFF3阳性的AEG患者生存率明显低于TFF3阴性患者。Cox回归分析结果显示，淋巴结转移、TNM分期较晚及TFF3阳性表达是AEG独立预后的危险因素(P<0.05)。结论 TFF3阳性提示患者预后差，是影响AEG预后的独立危险因素；HER2的表达不影响AEG的预后。TFF3及HER2是AEG发生发展的重要因子，二者可能在AEG的发生发展中相互作用，是否可以作为治疗靶标有待进一步研究。

关键词：
Her2
TFF3
临床意义
临床病理特征
腺癌
食管胃交界部
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近年来，食管胃交界部腺癌（adenocarcinoma of esophagogastric junction,AEG）的发病率迅速增加，严重威胁人们的生命健康[1]。AEG进展迅速，发现时多为晚期，肿瘤的异质性较大，治疗方法包括传统的手术、化疗、放疗及新型的免疫治疗，目前AEG患者的5年生存率仍不高，仅20%左右[2]。故亟需寻找新的AEG预后生物标志物及治疗靶点。三叶因子家族成员三叶因子3(trefoil factor-3,TFF3）是一种小分子多肽，主要由消化道黏膜中的杯状细胞分泌，在多种恶性肿瘤中高表达。TFF3对消化道黏膜损伤有修复和保护作用，并参与多种恶性肿瘤的发生、发展及转移[3]。人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)是一种酪氨酸激酶受体，通过形成二聚体激活下游MAPK信号通路和PI3K/Akt信号通路，二者共同作用于肿瘤细胞，从而促进肿瘤的生存、增殖、侵袭、转移、血管生成及抗肿瘤细胞凋亡等[4]。因此，TFF3及HER2有望成为AEG免疫治疗的靶点或预测预后的标志物。本研究通过检测TFF3及HER2在AEG组织中的表达并分析其与预后的关系，探讨二者在AEG发生发展中的作用，以期为AEG的治疗提供理论依据。

1、材料与方法

1.1标本来源

收集邯郸市中心医院2016年1月至2017年3月未经放疗及化疗的AEG患者的手术标本。纳入标准：所有标本均经2名副高级职称以上病理医师鉴定为腺癌；有完整的临床资料和随访记录。排除标准：合并小细胞癌、鳞状细胞癌及其他类型肿瘤；肿瘤多发。符合标准的病例共140例，其中女24例，男116例；年龄52～82岁，中位年龄66岁；肿瘤最大径0.8～11.0 cm;Laurén分型：肠型36例，混合型73例，弥漫型31例；T分期：T1～T2期9例，T3～T4期131例；淋巴结转移101例，未转移39例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期41例，Ⅲ～Ⅳ期99例。本研究经我院医学伦理委员会批准（202102-002）。

1.2实验方法

所有标本均经10%福尔马林固定24 h，石蜡包埋、4μm切片，以PBS代替一抗为阴性空白对照，正常结肠黏膜作为阳性对照。行HE染色和免疫组化Elivi⁃son两步法染色检测TFF3和HER2表达，若HER2检测结果不确定，进一步行免疫荧光原位杂交。分析AEG组织中TFF3、HER2表达与患者年龄、性别、肿瘤最大径、Laurén分型、T分期、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征的关系。

1.3结果判断

1.3.1 TFF3免疫组化检测结果判断

对免疫组化结果进行半定量分析，测量染色强度和程度。每个样本选取5个视野，对每个视野中的阳性细胞进行计数。细胞染色强度：无染色计0分，黄色计1分，棕黄色计2分，棕色计3分。肿瘤细胞数<25%、25%～<50%、50%～<75%、≥75%,阳性细胞数评分分别计1分、2分、3分、4分。两者评分相乘,得分0～4分为阴性，5～12分为阳性。

1.3.2 HER2免疫组化检测结果判读

HER2阳性定位于细胞膜，无反应或<10%肿瘤细胞膜染色为0；≥10%肿瘤细胞微弱或隐约可见膜染色或仅有部分细胞膜染色为1+；≥10%肿瘤细胞有弱到中等的基底侧膜、侧膜或完全性膜染色为2+；≥10%肿瘤细胞基底侧膜、侧膜或完全性膜强阳染色为3+。0、1+为阴性，3+为阳性，2+为不确定，进一步行免疫荧光原位杂交检测[5]。

1.4统计学分析

应用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验；Kaplan-Meier生存曲线分析TFF3及HER2对预后的影响；Cox回归分析影响AEG患者预后的危险因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 AEG组织中TFF3、HER2表达及与临床病理特征的关系

在140例AEG标本中，TFF3阳性表达72例（51.43%),HER2阳性表达21例（15.00%）,见图1。AEG中TFF3的阳性表达与Laurén分型及淋巴结转移有关（P<0.05），与患者性别、年龄、肿瘤最大径、T分期及TNM分期无关（P>0.05），见表1。AEG中HER2的阳性表达与肿瘤Laurén分型有关（P<0.05），肠型腺癌中阳性表达率最高（33.33%），弥漫型最低（3.23%）。HER2表达与患者性别、年龄、肿瘤最大径、T分期、淋巴结转移及TNM分期无关（P<0.05），见表1。

图1 TFF3、HER2在AEG组织中的表达

表1 AEG组织中TFF3及HER2的表达与临床病理特征的关系[例(%)]

2.2 AEG组织中HER2与TFF3表达的关系

在140例AEG标本组织中，72例TFF3阳性，21例HER阳性；6例HER2与TFF3同时阳性，53例同时阴性。HER2阳性标本中TFF3阳性率为28.57%,HER2阴性标本中TFF3阳性率为55.46%，二者TFF3阳性表达率比较差异有统计学意义（χ2=5.167,P=0.023），提示TFF3的表达与HER2表达相关。

2.3 AEG组织中HER2的表达与预后的关系

AEG患者的中位总生存期为35.5个月，5年生存率为34.3%。HER2阴性及阳性表达患者的5年生存率分别为（32.8±4.3）%、（42.9±10.8)%;TFF3阴性及阳性表达患者的5年生存率分别为（42.6±6.0）%、（26.4±5.2)%,Kaplan-Meier生存曲线分析显示，TFF3的表达会影响患者生存率。TFF3阳性患者与阴性患者生存率有统计学差异（P=0.012），见图2。

图2 HER2、TFF3表达与总生存率的关系

2.4影响AEG患者预后的单因素及多因素分析

采用Cox回归模型对AEG患者预后进行单因素和多因素分析。单因素分析发现，入组患者的预后与肿瘤最大径、T分期、淋巴结转移、TNM分期及肿瘤TFF3的表达相关（P<0.05）；将以上5项具有统计学意义的指标纳入Cox多因素分析，结果显示，淋巴结转移、TNM分期较晚及TFF3阳性表达为影响AEG患者预后的独立危险因素（P<0.05），见表2、3。

表2影响AEG患者预后的单因素

表3影响AEG患者预后的多因素分析

3、讨论

AEG为肿瘤中心位于食管胃交界部上下5 cm以内的腺癌，并跨越/接触食管胃交界部，在生物学行为和预后方面，AEG有别于真正意义上的食管癌和胃癌，是一种独特的临床病理类型[6]，男性多于女性。肿瘤中心位于食管胃交界部以下2 cm（含2 cm）内的AEG遵循食管癌分期标准；肿瘤中心位于食管胃交界部以下2 cm以远的AEG应遵循胃癌分期标准[7]。目前，手术切除仍是AEG的主要治疗手段[2]，随着医疗技术的提高，AEG的近期预后有了一定提升，但远期效果仍不理想，因此亟需寻找新的治疗方案，以提升AEG的整体预后。

TFF3是三叶因子家族的成员之一，家族其他成员还有TFF1和TFF2，均主要由黏液分泌上皮细胞表达，TFF3主要由小肠及结肠的杯状细胞分泌，在正常胃黏膜中几乎不表达[8]，当消化系统黏膜受到机械性/化学性刺激、损伤（如幽门螺杆菌感染、胃食管反流等）时，消化道黏膜上皮细胞迅速分泌TFF3以应对刺激及损伤[9]。TFF3除了参与损伤的修复和保护机制外，在多种恶性肿瘤的发生、发展过程中也具有非常重要的作用,目前认为TFF3通过促进肿瘤的侵袭和转移从而导致肿瘤的进展[10]。食管胃交界部在正常黏膜-癌旁组织-高分化腺癌-低分化腺癌中，TFF3的阳性表达率逐步升高[11]。Rivat等[12]研究发现，TFF3和VEGF能够激活STAT3信号通路，促进肿瘤细胞的增殖、分化及凋亡，通过RNA干扰等方式阻断STAT3信号途径后，能够抑制TFF3和VEGF诱导的肿瘤细胞侵袭以及裸鼠移植瘤的生长，提示TFF3通过STAT3信号通路促进肿瘤进展。顾建春[13]纳入92例胃癌患者进行研究，结果显示，TFF3阳性表达率为42.7%,TFF3阳性多见于肿瘤浸润深、TNM分期晚的胃癌患者，并且TFF3阴性的胃癌患者的生存期明显长于TFF3阳性患者，其5年总体生存率分别为（42.6±6.0）%、（26.4±5.2）%，提示TFF3表达与胃癌患者的预后密切相关，且为胃癌患者生存期的独立预测因素[12]。本研究发现，AEG组织TFF3的阳性表达率为51.43%，与以往研究结果相似[12]，并且TFF3阳性表达与肿瘤Laurén分型、淋巴结转移有关，说明在AEG中TFF3的表达与肿瘤的进展密切相关；Kaplan-Meier生存曲线分析显示，TFF3表达会影响AEG患者的生存率，TFF3阳性患者生存率低于TFF3阴性患者。

HER2是EGFR家族的第2号成员，是一种跨膜酪氨酸激酶受体，由胞外区、跨膜区和胞内区三个部分组成。胞外区为配体结合区，胞内区具有内源性酪氨酸激酶活性，HER2不能与任何已知的配体相结合，其通过与自身或EGFR家族的其他成员形成二聚体，然后连接相应的配体，使胞内区的酪氨酸残基发生自身磷酸化，从而激活下游信号通路，包括PI3K/AKT/m TOR和Ras/Raf/MAPK等途径，参与细胞的增殖、凋亡、黏附、迁移和分化[14]，并在乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌及鼻咽癌等癌组织中高表达，与恶性肿瘤的发生发展密切相关[15]。以往研究表明，HER2在AEG的阳性表达率高于远端胃腺癌[16]。本研究140例AEG标本中，HER2阳性表达率为15.00%，与以往研究相似[17]；同时在肠型AEG中表达率最高（33.33%），与相关研究结果一致[18]，但由于HER过表达使肿瘤更易出现浸润、化疗药物不敏感，导致预后较差[15,19]。本研究结果显示，HER2阳性与淋巴结转移及肿瘤TNM分期无明显相关性，这与雷瑞雪等[16]的研究结果不一致，有待进一步探讨。

本研究结果显示，HER2多表达于Laurén分型为肠型的AEG，而TFF3多表达于Laurén分型为弥漫型的AEG，且二者表达呈负相关。顾建春[13]的研究显示，同时表达HER2、TFF3的患者预后较其他患者差，而TFF3和HER2同时阴性者预后相对较好，TFF3阳性为影响预后的危险因素。针对HER2阳性的AEG，目前可以采用曲妥珠单抗、拉帕替尼等抗HER2药物靶向治疗[19]。本研究中，51.43%的AEG患者存在TFF3过表达，HER2阴性患者的TFF3阳性表达率高于HER2阳性患者，对于HER2阴性，无法应用抗HER2药物靶向治疗的患者，TFF3是否能成为AEG治疗的靶点，还需进一步研究。

综上，TFF3的阳性表达与AEG患者的Laurén分型和淋巴结转移情况有关，TFF3阳性患者的生存率低于阴性患者；HER2的阳性表达与患者的Laurén分型有关，与患者的生存率无关；TFF3与HER2表达呈负相关。检测TFF3及HER2有助于判断患者的预后，并有望在治疗方面提供帮助。

参考文献:

[2]李飞,宋媛,李芳,等食管胃交界部腺癌Siewert I型和I型胸外科手术治疗效果及预后研究[J]中国癌症杂志,2021,31(2):143

[4]吕晓双,罗斌抗HER-2治疗的耐药机制及对策的研究进展[J].现代肿瘤医学,2022,30(3

[5]《胃癌HER2检测指南(2016版)》专家组.胃癌HER2检测指南(2016版) [J].中华病理学杂志,2016.45(8):

[7]李浩淼,孙海波,郑燕,等. AJCC/UICC第八版食管及食管胃交界部癌TNM分期解读及中文版主要内容[J].中国胸心血管外科临床杂志,2017,24(2):

基金资助:2021年度河北省医学科学研究课题计划(20211536);

文章来源:张小辉,王海伟,田云霄等.TFF3和HER2在食管胃交界部腺癌中的表达及临床意义[J].局解手术学杂志,2023,32(07):628-632.