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广西全州县市售猫、狗华支睾吸虫感染调查分析
摘要：目的 了解广西全州县猫、狗华支睾吸虫感染现状，进一步探明华支睾吸虫病狭义非流行区是否存在流行，为华支睾吸虫病综合防控提供依据。方法 采用分层随机抽样方法，从全州县东、南、西、北、中5个方位各选择1家农贸市场按季度开展调查。采样总量为猫107只、狗84只。收集猫、狗的完整肝脏、胆囊，观察并记录肝脏病变情况，同时收集可疑虫体进行鉴定、测量、分类并计算感染率。对收集到的不同形态虫体进行COX1基因扩增和测序，通过BLAST比对分析确定虫体种类。采用χ2检验、t检验对华支睾吸虫感染情况的影响因素进行分析。结果 本次调查中，41.12%的猫、57.14%的狗来源为本地，其余均来源于外地(湖北)。分别检查107只猫、84只狗的肝脏和胆囊，猫华支睾吸虫感染率为61.68%(66/107)，单只猫华支睾吸虫虫体数量最多达1 070条；狗华支睾吸虫感染率为2.38%(2/84)，均为本地感染。虫体的分布位置在不同感染度猫、狗之间的差异有统计学意义(χ2=47.353,P<0.001)；随着感染度增加，虫体异位寄生在胆囊的概率也增加。有大体病理改变(肝表面黄染或肝胆管壁增厚、扩张等)与无大体病理改变的猫、狗感染率间的差异均有统计学意义(χ_猫2=49.509,P_猫<0.001;P_狗<0.001)。猫、狗华支睾吸虫阳性组的肝脏重量(g)与阴性组的肝脏重量(g)间差异均有统计学意义(t_猫=3.537,P_猫<0.01;t_狗=4.185,P_狗<0.001)。从本地猫、狗，外地(湖北)猫肝脏中分离到3种不同来源的虫体，其大小和睾丸存在较大差异；经形态学和COX1基因鉴定，均为华支睾吸虫。结论 广西全州县虽为华支睾吸虫病狭义非流行区，但市售猫、狗均可检出华支睾吸虫，尤其是猫的感染率较高，今后应进一步加强非流行区动物华支睾吸虫病的调查和防控。
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华支睾吸虫成虫寄生于人或哺乳动物体内肝胆管，引起肝肿大、肝硬化、腹水、胆管癌甚至死亡，是一种严重危害人类健康的人畜共患病[1,2]。据估计，目前我国华支睾吸虫感染人数约为598万；中国是全球华支睾吸虫危害最严重的国家之一[3]。广西华支睾吸虫感染率、感染度居全国首位[3,4,5]，主要分布在北纬24°以南。广西全州县位于北纬24°以北，为汉族地区，当地群众没有“食鱼生”习俗，既往人群调查华支睾吸虫感染率为0.00%，为华支睾吸虫病狭义非流行区[6]；但全州县尚未开展过动物华支睾吸虫感染情况的调查。华支睾吸虫病是人畜共患疾病，其传染源除人外，还有以猫、狗、鼠为主的30余种肉食哺乳动物[2,5]。猫和狗活动性较大，易食用被华支睾吸虫囊蚴感染的生鱼虾而受感染，其粪便污染水源，进一步增加螺类、鱼类等中间宿主感染的机会，进而增加人感染华支睾吸虫的风险[7]。本研究旨在了解全州县市售猫、狗华支睾吸虫感染现状，进一步探明华支睾吸虫病狭义非流行区是否存在流行，为华支睾吸虫病综合防控提供依据。
1、材料和方法
1.1 样本量计算
根据相关文献[7,8]，猫、狗华支睾吸虫感染率分别为64.76%和20.5%。由此计算得出需要的最低样本数量为猫88只、狗63只。采用分层随机抽样方法，按照地理位置，在全州县城东、南、西、北、中5个方位各选择1家农贸市场按季度开展调查，随机抽检所选择农贸市场市售猫、狗的完整肝脏、胆囊，采样总量为猫107只、狗84只。
1.2样本来源及数据
2022—2023年每个季度从全州县东、南、西、北、中5个方位各选择1家农贸市场，收集猫、狗的完整肝脏、胆囊。采样时询问摊主记录相关数据，包括每只猫、狗的收购来源、畜别、内脏处理方式以及猫、狗的购买人群、销售年限、日最大销售量和最小销售量、月平均销售量等。
1.3 虫体收集和处理
分别称量、记录猫、狗肝脏的重量，观察并记录肝脏表面黄染情况，胆管壁增厚、胆管扩张情况，分别解剖肝脏和胆囊收集虫体并记录。顺着胆管，在0.9%生理盐水中纵向依次剪开肝总管、次级胆管，不断挤压并洗涤直至上清液澄清，收集沉积物中可疑虫体。在显微镜下进行初步形态学鉴定、测量和分类[5]，记录每只猫、狗个体肝脏、胆囊中虫体数量，统计虫体数量中位数。感染度按照每只猫、狗的华支睾吸虫体数量分为5个等级[8]：阴性（0条）、轻度（1～10条）、中度（11～50条）、重度（51～100条）、超重度（>100条）。
1.4 分子生物学鉴定
用Qiagen公司组织基因DNA提取试剂盒提取不同形态虫体DNA。参照文献[9]方法，应用华支睾吸虫COX1基因序列FC1/RC1引物（FC1:5′-GCCTATAGTGAAAAGCACCA-3′；RC1:5′-GTTAATATTGCCGGGGTTTG-3′）进行PCR扩增。扩增产物送生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，获得的序列进行BLAST比对。
1.5统计学分析
所有调查数据采用WPS Office Excel 2023软件建立数据库，使用SPSS 25.0软件进行数据的处理及分析。采用χ2检验、t检验对华支睾吸虫感染情况进行单因素分析；检验水准α=0.05。
2、结果
2.1 猫、狗市场销售基本情况
5个市场一共有8个销售摊，猫、狗月平均销售量分别为116.58只/摊、9 5.1 7只/摊，最大日销售额分别为1 0 5只/摊、1 8只/摊。2020年开始，猫的销售量逐渐增加。41.12%的猫、57.14%的狗来源为本地收购，其余均为湖北省货运到当地。91.03%的猫、狗被当地大排档熏制成腊味或直接宰杀后售往周边省（市、县），其余为个人购买食用。猫内脏无处理直接扔无盖垃圾桶，狗的内脏随狗肉一起销售食用。5个市场距离河道50～300米。
2.2 猫、狗感染情况
共检查了107只猫的肝脏、胆囊，猫华支睾吸虫感染率为61.68%(66/107）。单只猫华支睾吸虫虫体数量最多达1 070条，1～10条有24只，11～50条有22只，51～100条有13只，>100条有7只，感染度中度及以上的占比为63.64%。单只猫感染虫体中位数为23条。本地猫感染率为54.55%(24/44），外地（湖北）猫感染率为66.67%(42/63）。共检查了84只狗的肝脏、胆囊，狗华支睾吸虫感染率为2.38%(2/84），均为本地感染，本地感染率为4.17%(2/48）。单只狗虫体感染度分别为6条和11条。猫与狗华支睾吸虫感染率的差异有统计学意义（χ2=72.179,P<0.001）。
2.3 虫体分布
感染猫、狗中，虫体主要分布在肝脏，占比高达89.71%，仅有少部分感染度重度及以上的猫、狗在肝脏和胆囊均发现虫体，虫体的分布位置在不同感染度猫、狗之间的差异有统计学意义（χ2=47.353,P<0.001）；随着感染度增加，虫体异位寄生在胆囊的概率也增加。
2.4 猫、狗华支睾吸虫感染相关因素分析
多个样本率和均数之间的比较显示，有大体病理改变（肝表面黄染或肝胆管壁增厚、扩张等）与无大体病理改变的猫、狗感染率间的差异均有统计学意义（χ猫2=49.509,P猫<0.001;P狗<0.001）。猫、狗华支睾吸虫阳性组的肝脏重量（g）与阴性组的肝脏重量（g）间差异均有统计学意义（t猫=3.537,P猫<0.01;t狗=4.185,P狗<0.001）。不同来源的猫、狗华支睾吸虫感染率差异无统计学意义（χ猫2=1.610,P猫>0.05;P狗>0.05）。见表1。
表1猫、狗华支睾吸虫感染相关因素分析
2.5 虫体、虫卵形态学
在肝脏中分离到3种不同来源的虫体。虫体均为雌雄同体，镜下3种虫体体形均较狭长、背腹扁平，前端稍窄，后端钝圆，呈葵花籽状，口腹吸盘前后排列，消化道简单。生殖系统较发达，子宫弯曲盘绕，2对睾丸分枝状排列于虫体后1/3处。3种虫体主要是大小和睾丸存在较大差异：（1）猫小型虫体平均大小约为7.67 mm×1.72 mm，未见睾丸或仅有1个睾丸为多数；猫大型虫体平均大小约为19.25 mm×4.25 mm，有两对睾丸。（2）狗虫体平均大小约为21.44 mm×4.78 mm，有两对睾丸。虫卵甚小，约（28.88～30.40）μm×（15.83～16.54）μm，呈淡黄褐色，似芝麻，一端较窄有盖，卵盖周围的卵壳增厚形成肩峰，另一端有小疣，卵内含有毛蚴。见图1。
图1华支睾吸虫成虫、虫卵与感染猫体肝脏
2.6 分子生物学鉴定
本地猫、狗，外地（湖北）猫华支睾吸虫COX1基因的PCR扩增均出现了长度约328 bp的目的片段。见图2。将测序获得的序列进行BLAST比对，结果显示，3种不同来源的虫体均为华支睾吸虫（Gen Bank登录号：AF096229），具有较高同源性，同源性分别为99.29%、98.95%、95.95%。
图2 3种不同来源华支睾吸虫COX1基因扩增结果
3、讨论
调查结果显示，广西全州县市售猫华支睾吸虫感染率较高（61.68%），接近广西华支睾吸虫重度流行区之一南宁市的调查结果（64.76%)[6,7]，高于广东省报道的调查结果（41.8%)[8]。市售猫的感染率高于狗，可能与猫喜生食鱼类，且活动性更大有关。猫、狗华支睾吸虫阳性组的肝脏重量（g）与阴性组的肝脏重量（g）间差异均有统计学意义，可能与其感染华支睾吸虫后引起的肝肿大有关[1,2,5]。相关研究显示，某些鼠类的肝脏重量与体重和年龄呈正相关[10]。动物年龄越大，其摄入生鱼虾的概率越高，与既往研究中人类年纪越大，华支睾吸虫感染率越高的结果类似[3,4,5]。华支睾吸虫感染的猫、狗肝脏中，有大体病理改变（肝表面黄染或肝胆管壁增厚、扩张等）与无大体病理改变的猫、狗感染率间的差异均有统计学意义，且随着感染度增加，虫体异位寄生在胆囊的概率也增加，与Brindley PJ等人、Na BK等人以及汤林华等人[1,2,5]的研究结果一致。长期、严重的华支睾吸虫感染可引起肝胆管组织纤维化、胆管壁扩增，导致胆管癌的发生，危害极大。据Cox J等人[11]报道，猫与人感染华支睾吸虫后肝胆管的病理变化相似，提示本研究中猫的病理表现具有一定参考价值。
本次调查发现，即使是在华支睾吸虫病狭义非流行县，来源为本地的猫华支睾吸虫感染率也较高（54.54%）；应用形态学和分子生物学技术对不同来源猫、狗的不同形态虫体进行了鉴定和分析，证实该地也是华支睾吸虫病自然疫源地，提示广西华支睾吸虫病流行区远比已知的分布要广。此外，来源为外地（湖北）的猫华支睾吸虫感染率高达66.67%，而当地的人群华支睾吸虫感染率仅为0.08‰[3]。2000年后黑龙江省、重庆市、江苏省、湖南省等多地的调查显示，猫华支睾吸虫感染率均超过60.00%，其中黑龙江省甚至高达100.00%，远超同期当地人群华支睾吸虫感染率（0.05%～1.18%)[4,5]。2021年的调查数据显示，中国家庭宠物猫、狗的数量已经超过了1亿只，并仍在飞速上升[12]。由于猫数量众多、分布广泛，且其华支睾吸虫感染率较高，因此相较于人，猫作为主要的动物传染源，是维持华支睾吸虫在自然环境中的生命周期的重要和关键因素，更值得关注。
全州县位于广西东北部，属岭南亚热带季风气候，雨量充沛，水系发达。本次调查显示，农贸市场距离本地河道最近的仅为50米，且猫、狗交易流动量大，其内脏、粪便处理不当，有污染河流、加速传播的风险；对此应予以重视。走访当地居民了解到，当地群众虽没有食用“鱼生”的习惯，但近年人口流动性较大，受“鱼生”饮食习惯影响的人不断增加。既往研究显示，很多非流行区报告华支睾吸虫病例也时有发生[13,14]。相对于高流行区，低流行区或非流行区人群的华支睾吸虫病防治意识薄弱，且容易出现漏诊。目前，华支睾吸虫病防控措施仅针对已知流行县的人群[3,4]，对动物传染源和中间宿主的防控尚未开展。此次调查结果提示，需加强对全州县以及类似非流行地区的华支睾吸虫调查并开展相关健康教育，结合“全健康”[15]的理念，建立包括动物、环境、中间宿主和人在内的监测防控体系，以阻断华支睾吸虫从自然到人类的传播。
综上，广西全州县虽为华支睾吸虫病狭义非流行区，但市售猫、狗均可检出华支睾吸虫，尤其是猫的感染率较高，今后应进一步加强非流行区动物华支睾吸虫病的调查和防控。
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基金资助:广西自然科学基金项目(2023GXNSFAA026255);
文章来源:唐雯茜,石云良,凌祎,等.广西全州县市售猫､狗华支睾吸虫感染调查分析[J].应用预防医学,2024,30(03):149-153+160.
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2024-07-19我要评论
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2024-07-07
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