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犊牛支原体混合感染巴氏杆菌、曼氏杆菌的诊断与防控

2024-07-19 7 上传者：管理员

摘要：新疆某规模化奶牛场犊牛呈现严重的呼吸道综合症，治疗后无果出现死亡，为查明发病原因，采用现场调查结合实验室PCR方法对病死牛病料进行确诊。结果表明，发病犊牛出现咳喘、呼吸急促、流黏脓性分泌物；剖检后观察到肺脏出现严重出血、充血、实变、纤维素性渗出，且胸腔积液；经牛支原体、巴氏杆菌、曼氏杆菌的特异性引物进行PCR检测可扩增出相应大小目的条带。针对检测结果，建议牧场通过改善环境、加强饲喂、免疫防控，采用中西医药物防治相结合的方式进行防控，取得了较好的防控效果。

关键词：
巴氏杆菌
支原体
曼氏杆菌
犊牛
防控
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牛呼吸道疾病又称牛肺炎，是由多种病原引起的牛呼吸道疾病的统称，常见于犊牛，是规模化养牛牧场的常见病之一。主要有多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌为主的细菌性病原，以传染性鼻气管炎、副流感3型病毒、呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻病毒为主的病毒性疾病，还有支原体等致病微生物[1,2,3]。犊牛肺炎治疗不当通常会导致生长发育极度缓慢的“僵牛”出现，犊牛呼吸道疾病不仅会增加犊牛的淘汰率，而且会严重影响后备牛的日增重，导致首次配种的推迟和受胎率降低，甚至影响奶牛泌乳期生产性能或肉牛的上市时间，给牧场造成巨大的经济损失[4,5,6]。

本次牧场犊牛肺炎病例发病初期，犊牛体温升高，精神沉郁，食欲不振，厌食，经过头孢噻呋钠、恩诺沙星和氟尼辛葡甲胺治疗3 d效果不佳，发病后期犊牛呼吸急促，呈腹式呼吸，流黏脓性鼻液等症状，后卧地不起后死亡。为查明病因，本试验通过现场剖检结合实验室PCR快速检测进行确诊。以给牧场提供一个科学有效的防控措施。

1、材料与方法

1.1 样品来源

某规模奶牛场1头严重肺炎病死犊牛的脏器组织。

1.2 试验仪器

移液器、PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪等。

1.3 试验试剂

DNA提取试剂盒、DNAMarker。

2、试验方法

2.1 现场调查和诊断

通过现场调查结合剖检观察病变组织脏器进行初步诊断。

2.2 实验室PCR检测

取病死犊牛的肺脏组织按照动物组织基因组DNA提取试剂盒说明书的步骤，提取肺脏的总DNA,-20℃储存备用。根据巴氏杆菌ecb J、溶血性曼氏杆菌A1型Hyp基因、支原体特异性引物进行PCR，引物序列参照表1。反应体系是20μL:2×Taq Plus Master mixⅡ为10μL，上下游引物分别为1μL,dd H2O为6μL,DNA模板为2μL。

表1 巴氏杆菌ecb J、溶血性曼氏杆菌A1型Hyp基因、支原体特异性引物

PCR扩增反应完成之后，进行凝胶电泳的试验，在凝胶成像系统仪底下进行观察，若出现与引物相应大小的条带则为目的条带。

3、结果

3.1 现场调查和诊断结果

犊牛发病后期倒地不起，有黏脓性鼻液，体温升高至42℃，呼吸困难，精神沉郁。剖检后观察到肺脏出现严重出血、充血、实变、纤维素性渗出，出现胸腔积液，见图1、2。

3.2 实验室PCR检测结果

取肺脏组织提取的总DNA使用巴氏杆菌ecb J、溶血性曼氏杆菌A1型Hyp、支原体特异性引物进行PCR检测。结果显示，本样品为巴氏杆菌、曼氏杆菌、支原体阳性。检测结果见图3。

图1 现场发病病牛

图2 现场剖检肺脏

图3 病料的PCR检测结果

4、讨论

4.1 肺炎主要致病菌及临床症状

牛巴氏杆菌病又称牛出血性败血症，是由巴氏杆菌引起、发生在牛身上的一种常见病害。病牛体温会明显上升，甚至会超过40℃，食欲不振、反刍能力也有所下降，并伴有呼吸困难、伸颈张嘴呼吸的情况，精神萎靡不振。牛巴氏杆菌病特征是败血症和组织器官的出血性炎症[7]。巴氏杆菌及曼氏杆菌均为革兰氏阴性短杆菌，曼氏杆菌较为特殊，作为一种条件致病菌常存在犊牛上呼吸道的鼻腔和扁桃体隐窝等部位，未发病时不易分离到，能产生白细胞毒素，损伤肺泡巨噬细胞，属于原发性病原。牛支原体感染临床表现为病初体温升高，42℃左右，持续3～4 d。牛群食欲差，被毛粗乱，消瘦。病牛咳嗽、喘，清晨及半夜咳嗽加剧，有清亮或脓性鼻汁。有些牛继发腹泻，粪水样带血，可出现关节炎和角膜结膜炎。所有牛均可发病，但犊牛病情更为严重[8]。现阶段牧场犊牛肺炎发生病因通常为混合感染存在，表现为2种甚至多种疾病混合感染，而统一的表现为犊牛发病前期体温升高，咳嗽，清水鼻涕。发病中期甚至后期，犊牛精神沉郁、食欲不振甚至废绝，咳嗽，腹式呼吸，流黏脓性鼻液等。剖检后均可观察到不同程度肺脏的病变，病变的形态与感染的主要致病菌有极大地关系。

4.2 呼吸道致病菌的流行现状

Pardon B等[9]对比利时部分牛场患呼吸系统疾病的病牛进行调查，巴氏杆菌分离率为26.0%。曼氏杆菌是一种对牛羊等反刍动物危害十分严重的呼吸道传染性疾病。国内研究表明对牛源溶血性曼氏杆菌分离鉴定，其发病率为9%～40%，致死率为25%～50%[10]。2020年，赵金玉[11]研究结果表明，新疆南疆规模化牛场犊牛牛支原体阳性率为28.57%(36/126）。现阶段这3种呼吸道主要致病菌在全国甚至全世界各地均有广泛流行。

4.3 呼吸道疾病混合感染的主要防控措施

4.3.1 治疗方案

采用大环内酯类药物（泰拉霉素、加米霉素等）和恩诺沙星、土霉素等抗生素，同时配合解热镇痛抗炎药物联合使用（美洛昔康、氟尼辛葡甲胺、双氯芬酸钠等），此方案对各种呼吸道综合征有较为明显的治疗效果。同时，患有呼吸道疾病犊牛务必做好前期提前揭发，早期进行有效的预防尤为重要。

4.3.2 保健方案

对于发病牛群，主要采取措施为有问题的牛及时隔离治疗，避免出现感染其他健康牛群，其他牛群饮水中添加中药预防疾病发生。在断奶牛群该情况较为明显，牧场实际治疗中，兽医无法将所有问题牛均全部挑出，隐性感染牛还有很大占比，不表现出临床症状，一旦受到应激等因素，症状会立刻表现出来，通常犊牛易感染病毒病，例如病毒性腹泻、传染性鼻气管炎及其他应激条件出现，造成犊牛免疫抑制，降低犊牛抵抗力，使犊牛变为易感动物，容易继发其他致病微生物的侵害，最终造成混合感染，难以治疗[12,13]。

4.3.3 加强饲养管理

犊牛肺炎应加强饲养管理，饲喂高品质初乳，巴氏消毒后的常乳，洁净的水源，提供舒适洁净，通风良好的饲养环境。保证牛每日摄入足够的能量。夏天做好热应激准备，搭建遮阴网等。冬天做好冷应激处理。保证圈舍环境干燥，密度较小。气候突变前给牛群饮水或常乳中添加电解多维等抗应激药物[14]。

4.3.4 疫苗免疫

现阶段国内已经有非常成熟的曼氏杆菌与巴氏杆菌疫苗产品，针对有过既往病史的牧场，免疫相应的疫苗。根据牧场牛只不同的发病阶段采取相应的免疫程序。保证牧场牛群整体较高的抗体水平，根据病因调查对牛只进行特异性免疫[15]。

该试验牧场犊牛哺乳期为巴氏杆菌、曼氏杆菌、支原体混合感染有发生，建议免疫程序为成母牛干奶期与围产期免疫曼氏杆菌和巴氏杆菌，新生犊牛在发病前对该病可获得较高的保护效果，1月龄后加强免疫为较为合理的免疫程序，后每间隔半年随大群普免。个别牧场犊牛在2月龄断奶后为本病高发阶段，可采用提前免疫。

5、小结

病死犊牛为支原体混合感染巴氏杆菌、曼氏杆菌所致，按照免疫防控、药物保健治疗、环境改善、加强营养等综合性防控措施，有效的防控了早期发病牛群，病程后期及预后不良的牛群及时隔离、淘汰，避免造成较大的经济损失。

参考文献:

[1]陈泽祥,李军,潘艳,等.危害养牛业发展的牛呼吸道病综合征的流行和防控技术进展[C]//广西兽医协会､广西畜牧兽医学会畜禽传染病学分会2017年学术年会.广西兽医协会广西畜牧兽医学会,2017.

[2]姜志刚,常继涛,王芳,等.我国牛呼吸道病细菌性病原的研究进展[C]//中国畜牧兽医学会动物传染病学分会学术研讨会,2015.

[3]李永霞.探究治疗牛呼吸道疾病的有效方法[J].当代畜禽养殖业,2019(2):49.

[4]杨铭伟,李迪,赵海龙,等.致犊牛肺炎牛支原体南疆株的分离鉴定及oppF基因序列分析[J].中国畜牧兽医,2014,41(12):25-29.