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Smo和Gli1蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达及临床意义

2024-06-04 25 上传者：管理员

摘要：目的探讨Smo和Gli1蛋白在眼睑基底细胞癌(EBCC)组织中的表达及临床意义。方法选取焦作市人民医院眼科收治的眼睑基底细胞癌患者40例为研究对象，采用免疫组织化学方法检测EBCC患者癌组织及癌旁组织细胞内Smo和Gli1蛋白的表达。设计资料调查表，详细统计所选患者的基本资料，分析不同病理特征EBCC患者组织中Smo和Gli1蛋白的表达情况，并分析组织中Smo和Gli1蛋白表达不同的眼睑基底细胞癌患者预后情况。结果 EBCC组织中Smo蛋白阳性表达率显著高于癌周正常黏膜组织(P<0.05);EBCC组织中Gli1蛋白阳性表达率显著高于癌周正常黏膜组织(P<0.05)。不同的性别、年龄、BMI、发病部位患者的癌组织中Smo与Gli1蛋白表达比较，差异无统计学意义(P>0.05);不同肿瘤分化程度患者癌组织中Smo与Gli1蛋白表达比较，差异有统计学意义(P<0.05)。经Log-rank检验，Smo和Gli1蛋白阴性表达患者1年内复发率均明显低于阳性患者(P<0.05)。经Kendall’s tau-b相关分析结果发现，组织中Smo蛋白表达与Gli1蛋白表达呈正相关(γ=0.350,P=0.010)。结论 Smo和Gli1蛋白在EBCC组织中的阳性表达率更高，可以作为EBCC早期诊断的标志物。Smo和Gli1蛋白的表达水平与分化程度有关，且与EBCC预后有密切关系，可以在临床上为眼睑基底细胞癌的发展与预后评估提供参考。

关键词：
Gli1蛋白
Smo蛋白
免疫组织化学
眼睑基底细胞癌
眼睑恶性肿瘤
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眼睑基底细胞癌(eyelid basal cell carcinoma, EBCC)是常见的眼睑恶性肿瘤之一，具有发病缓慢、病程较长、恶性程度较低等特点，但其侵袭能力较强，对患者的结构和功能影响较大。有研究指出，不同病理特征的EBCC患者治疗方案不同，且预后存在明显差异[1]。因此，寻找与EBBC患者病理特征有关的指标，对治疗方案的制定尤为重要。有研究指出，Sonic hedgehog(Shh)信号通路负责调节组织内稳态和干细胞行为，在成人组织中处于静止状态，是一种参与细胞生长、迁移、侵袭和组织模式形成的保守通路[2]。而Smo和Gli1蛋白是完成Sonic hedgehog信号通路转导的2个关键蛋白，相关研究发现，Smo和Gli1蛋白的异常表达与胃癌的发生发展有着密切关系[3]。但Smo与Gli1蛋白与EBCC的发生发展是否有密切关系，暂无研究。基于此，本研究通过免疫组织化学检测Smo与Gli1蛋白在EBCC组织中的表达情况，探讨Smo和Gli1蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达及临床意义，为临床诊治提供新的参考指标。具体如下。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取焦作市人民医院眼科于2016年6月至2021年6月拟行手术治疗的EBCC患者40例，其中男性21例，女性19例；年龄55～65岁，平均年龄(59.73±3.16)岁；分化程度：未分化型23例，分化型17例；发病部位：下眼睑14例，上眼睑9例，内眦部8例，外眦部9例。本研究符合医学伦理学规范且获得焦作市人民医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①符合《实用眼科学》[4]中EBCC诊断标准，且经病理组织活检确诊；②认知功能正常，可配合研究工作；③术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。排除标准：①合并患有肺癌、胃癌、结肠癌等其他恶性肿瘤疾病；②既往接受过抗肿瘤治疗；③伴有自身免疫系统疾病；④严重心肝功能不全；⑤合并精神疾病；⑥肿瘤已发生远处转移。

1.3 方法

所有癌组织及癌周正常黏膜组织采用免疫组织化学S-P法：所有标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。将4 μm厚切片微波高火5 min进行抗原修复，兔抗人Smo多克隆抗体购自Santa Cruiz Biotechnology(USA)公司、兔抗人Gli1多克隆抗体购自GeneTex公司。检测过程中的操作方法均按照试剂盒说明书进行。

1.4 染色结果判定

(1)采用双盲法：由具有丰富经验的病理科医师采用双盲法对免疫组织化学切片进行全面观察，并对染色结果进行判定。镜下观察准备好的切片，Smo阳性为细胞膜和细胞质内观察到棕黄色颗粒；Gli1阳性为细胞膜和细胞质或细胞核内观察到棕黄色颗粒。(2)阳性表达情况采用半定量积分法：根据着色强度与着色细胞所占百分比综合判断阳性程度。根据着色细胞所占百分比进行评分：0≤着色细胞所占百分比≤5%计为0分；5%<着色细胞所占百分比≤25%计为1分；25%<着色细胞所占百分比≤50%计为2分；50%<着色细胞所占百分比≤75%计为3分；75%<着色细胞所占百分比≤100%计为4分。对Smo、Gli1染色强度进行评分：未染色判定为阴性，计为0分；淡黄色者判定为弱染色，计为1分；棕黄色者判定为中度染色，计为2分；棕褐色者判定为强染色，计为3分。将着色强度与着色细胞百分比评分进行相乘：0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性(+++)。

1.5 随访

EBCC患者术后均通过电话及门诊复诊的方式进行随访1年，期间患者每3个月返院进行影像学检查及血液检查等，统计患者复发情况，以复发为终点事件，随访日期截止至2022年6月。

1.6 资料调查

由研究者设计基线资料调查表，并详细统计患者基线资料，包括性别(男、女)、年龄(≤60岁、>60岁)、体质量指数(body mass index, BMI)(<24 kg/m2、≥24 kg/m2)、分化程度(未分化型、分化型)、发病部位(下眼睑、上眼睑、内眦部、外眦部)、复发情况(复发、未复发)。

1.7 统计学处理

本次研究使用SPSS 25.0统计学软件处理数据，计数资料以n(%)表示，2组间比较采用χ2检验或连续校正χ2检验或Fisher确切概率法，多组间整体率的比较采用(2×C)卡方检验，存在2个及以上期望计数<5,采用Fisher精确检验；等级资料2组间比较用Mann-Whitney U秩和检验，Kendall's tau-b相关性分析EBCC病理组织中Smo与Gli1蛋白表达的相关性；复发情况分析采用Kaplan-Meier曲线，采用Log-rank检验，比较生存曲线。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2、结果

2.1 Smo蛋白在EBCC患者组织中表达水平

EBCC组织中Smo蛋白阳性表达34例(85.00%),明显高于癌周正常组织中Smo蛋白阳性表达14例(35.00%),差异有统计学意义(χ2=20.833,P<0.001);EBCC组织中Smo蛋白阳性表达程度显著高于癌周正常黏膜组织(P<0.05)。见表1。

表1 EBCC患者组织中Smo蛋白表达情况/例

2.2 Gli1蛋白在EBCC患者组织中表达水平

EBCC组织中Gli1蛋白阳性表达33例(82.50%),明显高于癌周正常组织的Gli1蛋白阳性表达12例(30.00%),差异有统计学意义(χ2=22.400,P<0.001);EBCC组织中Gli1蛋白阳性表达程度显著高于癌周正常黏膜组织(P<0.05)。见表2。

表2 EBCC患者组织中Gli1蛋白表达情况/例

不同性别、年龄、BMI、发病部位的患者组织中Smo、Gli1蛋白阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05);分化程度中未分化型的患者组织中Smo、Gli1蛋白阳性表达率明显高于分化型(P<0.05),见表3。

表3 不同特征的EBCC患者组织中Smo蛋白情况(例，%)

2.4 不同Smo与Gli1蛋白表达水平与EBCC患者术后复发的关系

对40例EBCC患者进行随访1年，其中复发25例(62.50%),未复发15例(37.50%)。Smo蛋白阴性复发率为16.67%(1/6),阳性复发率为70.59%(24/34),差异有统计学意义(χ2=4.155,P=0.042),见图1;Gli1蛋白阴性复发率为14.29%(1/7),阳性复发率为72.73%(24/33),差异有统计学意义(χ2=5.637,P=0.018),见图2。

图1 不同Smo蛋白表达EBCC患者术后复发曲线图

图2 不同Gli1蛋白表达EBCC患者术后复发曲线图

2.5 EBCC病理组织中Smo与Gli1蛋白表达的相关性分析

经Kendall's tau-b相关分析结果发现，组织中Smo蛋白表达与Gli1蛋白表达呈正相关(γ=0.350,P=0.010)。

3、讨论

有研究指出，Shh信号通路参与了人类胚胎发育过程中的各器官发育，是调控组织分化和细胞增殖的重要信号通路，与肿瘤的发生发展有密切关系[5]。该信号通路主要由分泌蛋白Shh配体、受体Ptc和G蛋白偶联受体Smo组成，共同调控细胞的生长、增殖与分化。目前已有研究证实，与子宫内膜癌、胃癌、食管癌、胰腺癌等恶性肿瘤的发生与Shh信号通路异常激活有关[6,7,8]。

本研究结果显示，Smo与Gli1蛋白在EBCC组织中有高度表达，癌周正常组织中不表达或是弱表达，表明Smo与Gli1蛋白与EBCC的发生密切相关，符合Shh通路在恶性肿瘤中呈异常激活状态，与国内研究结果一致[9,10,11]。而Smo与Gli1蛋白在癌周正常组织中不表达或是弱表达，表明两者高表达不是EBCC的早期事件，但在促进EBCC发展过程中有重要作用。分析原因在于，Smo和Gli1蛋白是Shh信号通路中的关键成员，Smo蛋白可以将细胞外的Shh信号转换为Gli1信号，Gli1具有激活Shh下游基因转录的功能，Smo与Gli1蛋白的高度表达激活Shh信号通路的活性，促进EBCC肿瘤细胞的发生与发展[12,13]。有研究发现，通过抑制剂阻断Shh/Gli1通路，可以导致体内肿瘤生长停滞，组织肿瘤细胞的增殖，因此，Shh/Gli1通路可以判断EBCC治疗目标及预后[14]。

此外，本次研究中发现，未分化型EBCC患者及EBCC复发患者中，Smo与Gli1蛋白均有高度表达，表明Smo与Gli1蛋白与EBCC恶化程度及预后有密切关系，两者的高度表达，预示肿瘤的侵袭能力更强，对EBCC患者的预后造成严重影响。Shh-Ptc-Smo-Gli是经典信号通路激活途径，共同作用下激活Shh信号通路，而非典型的Shh通路可以通过其他途径激活Smo蛋白，当Smo蛋白被激活后，会移动到初级纤毛的顶端并向融合抑制因子Sufu发出信号以释放 Gli激活剂(GliA),GliA 迁移到细胞核并激活靶基因的表达，Shh信号通路活化导致EBCC细胞分化增殖速度快，增强肿瘤细胞的侵袭与转移，致使其恶性程度高，从而增加EBCC患者的复发危险[15,16]。

同时，经Kendall's tau-b相关分析发现，组织中Smo蛋白表达与Gli1蛋白表达呈正相关，分析原因可能在于，高度表达的Smo蛋白可以通过上调转录因子Gli1蛋白的表达，只是Shh信号通路异常激活，最终促进EBCC的发生与发展。但本研究仅对Shh信号通路中的Smo与Gil1蛋白水平与EBCC发展及预后的关系，对于下游靶基因涉及的其他生物因子未进行全面分析，因此，后续还需要进行更深入的研究与探讨。

综上所述，EBCC患者组织中Smo和Gli1蛋白阳性表达率高，可以在临床上对眼睑基底细胞癌的发展与预后评估提供参考。

参考文献：

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[2]黄传钟，孙艳霞，于悦，等.分化抑制因子1和3通过Wnt/β联蛋白和Shh通路共同调节结直肠癌细胞的干性[J].中国药理学与毒理学杂志，2021,35(4):265-274.

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