复方参芪颗粒组方为9 g法半夏、10 g陈皮、15 g党参、30 g炙黄芪、15 g茯苓、10 g藿香、6 g砂仁(后加入)。本方为六君子汤加减而成，具有治疗脾胃气虚兼痰湿所致之胸脘痞闷等功效。本方为2020年初，国家颁布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第四版)》方案中针对新冠肺炎患者恢复期处方[1,2]。前期肺气严重消耗的新冠肺炎恢复期患者，又因寒湿之邪积留体内阻碍脾脏之水谷运化，肺气受损而引起肺脾气虚，出现气短倦怠等一系列临床症状。故扶正气、祛余邪为恢复期治疗的主要原则[1,2,3,4]。原处方为汤剂，因加工时间长、服用剂量大、口感差且不利于储存和携带，故本研究在汤剂的基础上，采用现代提取和制粒技术改剂型为颗粒剂，既保留汤剂原有性质又克服了以上缺点；方中炙黄芪具补肺固表作用，为君药，故选取其主要有效成分黄芪甲苷的含量为其质量控制指标，以期为新药开发和工业化生产提供依据。

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器

FA2004N电子分析天平(上海菁海仪器有限公司);XPE56百万分之一电子天平(梅特勒-托利多(常州)精密仪器有限公司);DNP-9272BS-Ⅲ电热恒温培养箱(上海新苗医疗器械制造有限公司);DL-1万用电炉(北京中兴伟业仪器有限公司);YK-60摇摆式制粒机(上海天祥药械制造厂);ZXFD-B5040恒温鼓风干燥机(上海智城分析仪器制造有限公司);KQ-500E超声波处理器(昆山市超声仪器有限公司);FS500Y-3中药材粉碎机(广州雷迈机械设备有限公司);HH-S2数显恒温水浴锅(常州普天仪器制造有限公司);U3000高效液相色谱仪(赛默飞世尔科技公司);SHZ-D(III)循环水式多用真空泵(巩义市英峪高科仪器厂);ALLTECH ELSD6000蒸发光散射检测器(上海米景科技有限公司)。

1.1.2饮片

炙黄芪饮片(批号：A210415,产地为甘肃定西)、党参饮片(批号：A210425,产地为甘肃定西)、砂仁饮片(批号：A210413,产地为广东阳江)、藿香饮片(批号：A210411,产地为广东湛江)、茯苓饮片(批号：A210412,产地为安徽岳西)、法半夏饮片(批号：DA210405,产地为甘肃陇南)、陈皮饮片(批号：A210422,产地为浙江台州)由亳州市永刚饮片厂有限公司提供，经安徽中医药大学金传山教授鉴定为正品，均符合2020年版《中国药典》一部药用标准。

1.1.3试剂

糊精(批号：01005,安徽山河药用辅料股份有限公司);可溶性淀粉(批号：0200401,天津市大茂化学试剂厂);甘露醇(批号：100533-202005,天津市科密欧化学试剂有限公司);乳糖(批号：100588-201905,南京高溯生物科技有限公司);阿司帕坦(批号：UST-100,深圳市唐正生物科技有限公司);黄芪甲苷对照品(批号：110781-201717,中国食品药品检定研究院);甲醇(批号：20210310,色谱纯)、乙腈(批号：20210223,色谱纯)、正丁醇(批号：20210227,分析纯)均购自国药集团化学试剂有限公司；氨水(批号：20210104,分析纯，天津市大茂化学试剂厂);试验用水为纯水。

1.2方法

1.2.1稠浸膏的制备

取30倍处方量饮片，炙黄芪、党参、茯苓、法半夏、藿香、陈皮加10倍水浸泡至透心，加热提取2次，每次1 h;含挥发性成分的砂仁在浸提40 min后加入，合并2次滤液，过滤除去杂质；滤液浓缩为稠浸膏，相对密度为1.30～1.35(25℃)。密封，置4℃冰箱内冷藏，备用。

1.2.2制粒方法的选择

预试验采用湿法、干法、流化制粒制备颗粒。由于浸膏吸湿性较强，黏性较大，且湿法制粒所得颗粒均匀，质量较好，易于控制。故本试验采用湿法制粒制备复方参芪颗粒。

1.2.3评价指标的确定

试验材料为水提稠浸膏，因干膏粉黏性较大、流动性差，因此需加入适宜的辅料进行制粒。本试验通过比较糊精、甘露醇、可溶性淀粉、乳糖的性能，以颗粒的成型性、吸湿性、流动性和口感进行综合分析[5,6,7,8,9]。评价指标：将稠浸膏与辅料按规定量配比，采用等量的4种赋形剂进行湿法制粒，分别加入同批次的处方量浸膏，制得颗粒。以吸湿率、成型率、休止角、口感为指标综合评分(权重系数为50%、30%、10%、10%)优选辅料。成型性的测定：将制备好的颗粒称重，先过1号筛，再过5号筛，收集能通过1号筛但不能通过5号筛的颗粒，称定质量，计算成型率(成型率=W/S×100%)。吸湿性的测定：将颗粒放入盛有干燥剂的干燥器内放至恒重，将玻璃干燥器的底部加入氯化钠过饱和溶液(250 mL)至恒温，相对湿度为75%。恒重称量瓶中放入已恒重的10 g颗粒，去瓶盖，置于25℃恒温培养箱中，在3、12、24、36、48 h称定质量，计算吸湿率。流动性的测定[10]:休止角是衡量微粉或颗粒流动性的指标。采用漏斗法测定。串联3只漏斗，并固定在水平放置的坐标纸上，将颗粒缓缓从最上方倒入，颗粒锥体顶端接触漏斗口停止，形成圆锥体堆。h为锥体最大高度，r为锥体底部半径，观察坐标纸上颗粒圆锥体有最大高度h时圆锥半径r,计算休止角(tga=h/r)。

1.2.4辅料的综合考察

将制得的稠浸膏与可溶性淀粉、甘露醇、糊精、乳糖均按1∶3、1∶4、1∶5的比例混匀制成软材，通过10目筛挤出制粒，置于60℃烘箱中干燥10 min,过筛整粒，即得。以成型率、吸湿率、休止角为指标综合考察从而优选辅料。

1.2.5矫味剂的选择

本方汤剂口感较苦，且新冠肺炎易感人群多为中老年人，其中相当一部分人为糖尿病和肥胖患者，故选择阿司帕坦作为矫味剂[11,12]。以20名健康受试者人工评价所得平均值为标准，进行口感评分，口感评价标准见表1。

表1口感评分标准

1.2.6响应面法优选

选择混合稀释剂与稠浸膏比例(A)、乳糖与甘露醇比例(B)、矫味剂用量(C)作为影响因素，以吸湿率、成型率、流动性、口感分值作为评价标准。因素水平见表2。计算综合指标为(吸湿率值/最大吸湿率值)×50%+(成型率值/最大成型率值)×30%+(休止角)×10%+(口感)×10%。

表2因素水平

1.2.7成型工艺验证

取3组相对密度为1.33(25℃)的稠浸膏，按1.2.6节的优选处方和工艺进行验证试验。

1.2.8黄芪甲苷的高效液相色谱法[13,14,15]

色谱条件为填充剂C18(5μm, 250×4.6 mm);乙腈-水(32∶68)为流动相；柱温30℃,流动相在1.0 mL/min流速的蒸发光散射检测器下检测。供试品溶液制备：取适量该颗粒，研磨成粉末状后，精密称定12.0 g,然后量取40 mL甲醇置于250 mL锥形瓶内，经过1 h超声处理，用定性滤膜滤过，取滤液蒸干，并向剩余残渣中加入20 mL水，微热使其充分溶解后，置于分液漏斗内，加入20 mL用水饱和的正丁醇溶液(正丁醇中加入足量的娃哈哈纯净水混合，比例为1∶1,超声处理10 min,取上层水饱和的正丁醇溶液)萃取，收集上层的正丁醇，重复此操作1次，将2次正丁醇液合并，用30 mL氨水溶液(取400 mL浓氨水溶液，加入纯净水定容至1 000 mL)洗涤，取上层正丁醇溶液，加入30 mL氨水溶液进行再次洗涤，取上层正丁醇液蒸干，剩余残渣加一定量的甲醇至5 mL容量瓶中定容，摇匀，装瓶前需要用0.45μm的微孔滤膜过滤，取滤液备用。对照品溶液制备：25 mL容量瓶中加入精密称定的12.860 mg黄芪甲苷对照品，用80%甲醇使其充分溶解，配制0.498 5 mg/mL对照品溶液，备用。阴性样品溶液制备：按处方比例，称取除黄芪以外其余药材粉末，研细，按照上述供试品溶液制备方法，取滤液备用。精密度试验：取适量上述黄芪甲苷对照品溶液，根据上述色谱条件，不间断进行6次平行试验，进样10μL,测定黄芪甲苷的峰面积。含量测定：取2批复方参芪颗粒样品(12.0 g/份),精密称定，供试品溶液制备重复上述操作，进样10μL,测定黄芪甲苷的峰面积，计算其含量时采用外标两点法。线性范围考察：取上述黄芪甲苷对照品溶液，分别进样4、6、8、12、16μL,横坐标是对照品进样质量lg值，纵坐标是峰面积lg值，绘制标准曲线。专属性试验：精密吸取上述3种溶液15μL进样，记录色谱图。重复性试验：取6份同一批复方参芪颗粒样品，每份12.0 g,精密称定，制备供试品溶液，进样量均为15μL,计算黄芪甲苷峰面积的相对标准偏差。稳定性试验：取同一样品溶液，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h后进样，进样体积均为15μL,测定黄芪甲苷的峰面积，计算不同进样时间峰面积的相对标准偏差。加样回收率试验：精密称取6份已知黄芪甲苷含量(0.321 6 mg/g)的同一批复方参芪颗粒，每份6 g,每份均加入4 mL等量的黄芪甲苷对照品溶液，制备供试品溶液，进样量均为15μL,计算每个样品的回收率及相对标准偏差。

2、结果与分析

2.1浸膏密度考察

由表3可知，稠浸膏的相对密度为1.30～1.33(25℃)时，颗粒的成型性及外观性状较好，因此稠浸膏的相对密度定为1.30～1.33(25℃)。

表3浸膏密度考察

2.2辅料的种类及用量

2.2.1吸湿率测定

由图1可知，放置36 h后吸湿率没有明显变化，趋于平稳，故选择36 h吸湿率。

图1吸湿率的测定结果 

2.2.2辅料用量考察

由表4可知，药辅比例为1∶4和1∶5时，颗粒的外观性状良好，在制剂性能稳定的情况下，辅料用量应越少，相同质量颗粒中的含药量越高。故将稠浸膏分别与甘露醇、乳糖、糊精、可溶性淀粉等4种辅料的最佳比例定为1∶4。

2.2.3辅料的综合分析

由表4～5可知，糊精、可溶性淀粉、甘露醇、乳糖等4种辅料制成的颗粒成型率、吸湿率及流动性均符合相关规定。成型率方面，甘露醇>乳糖>糊精>可溶性淀粉。吸湿率方面，乳糖<甘露醇<糊精<可溶性淀粉。流动性方面，乳糖<甘露醇<糊精<可溶性淀粉。综合分析可知，乳糖为最佳辅料，但乳糖价格较高，且乳糖颗粒一旦吸湿，其颗粒则易粘连、结块，且颜色变深，故综合考虑成本及颗粒性状，最终选择甘露醇与乳糖的混合辅料。

表4辅料用量考察

表5辅料的考察结果

2.3响应面法优选

通过Design-Expert 11.0软件进行拟合，所得多元二次回归方程为Y=98.32+0.31A-0.25B-0.48C+1.10AB+0.56AC-0.03BC-4.99A2-3.72B2-6.30C2,结果见表6,方差分析见表7。由表7可知，因素A2、B2、C2具有显著影响(P<0.05),各因素影响程度依次为C>A>B;回归模型P<0.000 1,表明该模型具有显著性，同时R2=0.983 6,失拟项P>0.05,表明拟合度良好，可用于预测分析。

采用Design-Expert 11.0软件绘制3D响应面图和二次回归模型，进行综合分析[16,17,18,19,20,21,22,23],由图2可知，确定混合稀释剂与稠浸膏比例为4.05∶1,甘露醇与乳糖比例为2∶1.52,矫味剂用量为0.20%。为制备操作方便，最终将数值矫正为混合稀释剂与稠浸膏比例为4∶1,甘露醇与乳糖比例为4∶3,矫味剂用量为0.20%。

表6试验设计及结果

表7方差分析

2.4成型工艺验证

由表8可知，此制备工艺重现性较好。该颗粒剂所选辅料合理，成型制备工艺可行。

表8验证试验结果

2.5最佳配方和制备工艺的确定

将法半夏、陈皮、党参、炙黄芪、茯苓、藿香加水浸泡至透心，10倍量水提取2次，每次1 h。含挥发性成分的砂仁在每次煎煮40 min后加入，合并滤液，过滤除杂；浓缩为稠浸膏，相对密度为1.32～1.35(25℃);按1∶4比例加入稠浸膏与混合稀释剂，甘露醇与乳糖比例为4∶3,阿司帕坦为0.20%,制粒，烘干，整粒，即得复方参芪颗粒。

2.6黄芪甲苷的高效液相色谱法测定

2.6.1精密度试验

精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10μL,连续进样，测定6次，记录其峰面积，其峰面积的RSD为0.86%,结果表明仪器精密度良好。

2.6.2含量测定

本试验测得黄芪甲苷的平均含量为0.321 6 mg/g。由于考虑各方面的原因，如原药材的产地、生产、储存等因素会造成其含量的差异，所以含量最低要求依据两批均值下调10%。本品以干燥品计，含黄芪甲苷不得少于0.25 mg/g。

2.6.3线性范围考察

如图3所示，根据线性回归方程y=1.321 9x+1.113 3,R2=0.999 6,表明黄芪甲苷在1.994～7.976μg范围内具有良好的线性关系。

2.6.4专属性试验结果

由图4可知，阴性无干扰，该方法专属性良好。

2.6.5重复性试验

取复方参芪颗粒样品6份，每份12.0 g,精密称定，制备供试品溶液，进样量为15μL,计算黄芪甲苷峰面积的RSD为1.02%,表明该方法重复性良好。

2.6.6稳定性试验

取供试品溶液，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h后进样，进样体积均为15μL,测定黄芪甲苷的峰面积，计算其峰面积的RSD为1.76%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.6.7加样回收率试验

由表9可知，黄芪甲苷的平均加样回收率为98.96%,RSD为1.35%,表明该方法回收率良好。

图2各因素响应面  

图3黄芪甲苷线性关系  

图4专属性试验色谱图  

表9复方参芪颗粒中黄芪甲苷加样回收率

3、结论与讨论

稠浸膏相对密度的选择：稠浸膏相对密度过小时，软材缺乏黏性，不易制粒，需增加辅料比例和使用量；其相对密度过大时，软材黏度过大，亦不易制粒成型。因此，将其控制在1.32～1.35(25℃)范围内较为适宜。

辅料的选择：复方参芪颗粒是水溶性颗粒，故在考察稀释剂时选择有较好溶解度的糖粉、甘露醇、乳糖、可溶性淀粉等，但糖粉不适合肥胖人群和糖尿病患者，故将其舍去；而乳糖价格较高，且乳糖颗粒一旦吸湿，其颗粒则易黏连、结块，颜色变深，故综合考虑成本及颗粒性状，最终确定甘露醇与乳糖混合辅料作为稀释剂。另外，由于本方汤剂具一定的苦味，故选用阿司帕坦作为矫味剂，其体内代谢不会引起血糖变化，适合肥胖人群和糖尿病患者。

质量评价指标的选择：选择颗粒剂质量评价指标时，由于甘露醇和乳糖均为水溶性较好的辅料，制成颗粒的溶化性较好，故未将溶化性纳入质量评价指标。

优化方法的选择：中药制剂的制备工艺以往常采用单因素或正交设计优选最佳的制备工艺参数，虽然这种方法操作简便、试验次数较少，但缺乏连续性和完整性。响应面法虽然试验次数相对较多，但能把各因素与响应值之间的关系函数化，可以连续对试验的各个水平进行分析，精密度高，且考察了混合稀释剂与稠浸膏的比例、矫味剂用量的影响，能较为全面地反映制剂制备过程中各因素的交互影响，结果可信度高，预测值更精确。

质量控制指标的选择：本次试验只针对复方参芪颗粒中君药炙黄芪进行含量测定，参照2020年版《中国药典》第一部以及相关文献对黄芪甲苷进行含量测定，后期试验可以针对处方中党参、茯苓、陈皮等进行综合指标的一测多评法、指纹图谱法等研究，为其质量控制提供更为科学依据。

综上所述，以颗粒的吸湿率、成型率、流动性和口感为评价指标，按不同权重综合评分，以综合得分为响应值，采用响应面法分析，优选辅料种类和用量，优选制备工艺。浸膏与辅料比例为1∶4,甘露醇与乳糖比例为4∶3,阿司帕坦用量为0.20%,成型率、吸湿率、休止角分别为96.86%、2.52%、27.60°,颗粒微甜，可接受；黄芪甲苷的线性回归方程为y=1.321 9x+1.113 3,R2=0.999 6。黄芪甲苷在1.994～7.976μg范围内具有良好的线性关系。此方法重现性好，优选的复方参芪颗粒制备工艺切实可行；黄芪甲苷含量测定方法线性关系良好，可用于其质量控制。

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基金资助:安徽省高校优秀青年人才支持计划项目(gxyq2020136);安徽省高校自然科学研究项目(KJ2021ZD0163);安徽省质量工程项目(2022cjrh034);

文章来源:吴飞,李月侠,李昊,等.复方参芪颗粒的制备工艺及其质量控制[J].安徽科技学院学报,2024,38(04):53-61.