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Vasorin在非小细胞肺癌中的表达及与临床特征的关系

2024-11-15 39 上传者：管理员

摘要：目的探讨Vasorin在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法收集2020年1—10月川北医学院附属医院收治的40例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本，应用免疫组织化学染色对所有标本进行Vasorin和CD34检测，分析Vasorin与NSCLC血管生成[微血管密度（MVD）]之间的关系及临床意义。结果 NSCLC组织Vasorin的表达评分和MVD明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P<0.05）。不同肿瘤最大径、TNM分期患者Vasorin表达评分比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。不同肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移情况患者MVD比较，差异均有统计学意义（P<0.05）,但二者在NSCLC中的表达无相关性（rs=0.246,P>0.05）。结论 Vasorin在NSCLC中过表达，与肿瘤最大径、TNM分期关系密切，可能是判断NSCLC分期、预测预后的重要参考指标。但Vasorin与NSCLC血管生成无明显相关性，尚不能作为评估NSCLC血管生成的重要指标。

关键词：
CD34
Vasorin
恶性肿瘤
血管生成
非小细胞肺癌
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肺癌是全球发病率和病死率最高的恶性肿瘤，是癌症死亡的主要原因[1],严重威胁人类生命健康。近年来，尽管肺癌的诊治水平得到了极大的提高，但由于诊断不及时、受益人群有限、患者耐药及复发等因素，肺癌患者的生存情况仍不理想。因此，进一步探寻肺癌潜在的分子标志物及治疗靶点至关重要。

Vasorin是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，相对分子质量约为110×103,2004年在人血管平滑肌中被发现[2]。Vasorin在主动脉中表达最高，在肾脏和胎盘组织中呈中等表达，在脑、心脏、肝脏、肺和骨骼肌组织中表达最低，可能参与调控血管内皮细胞迁移、血管生成、上皮间质转化、低氧应激、氧化应激等多种生理活动[2-6]。CD34是血管内皮细胞的特异性标志物，可用于微血管密度(MVD)的测定，是目前公认较敏感的血管标志物[7],可以定量反映新生毛细血管的生长情况。目前已有研究表明Vasorin在一些癌症中可呈过表达，如神经胶质瘤[8]、肝癌[9-10]、乳腺癌[11]、喉癌[12]、结直肠癌[13]、肺癌[14]等，其可能在肿瘤细胞生长、存活、转移和血管生成等肿瘤发病机制中发挥作用，可能是一种潜在的肿瘤生物学标志物。本研究通过免疫组织化学技术检测Vasorin和CD34在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及癌旁组织中的表达，探讨Vasorin与血管生成之间的关系，以期为NSCLC寻找一种新的分子标志物。

1、资料与方法

1.1 一般资料

收集2020年1—10月川北医学院附属医院收治的40例NSCLC患者癌组织及癌旁组织标本。所有患者术前均未进行化疗、放疗、靶向治疗、免疫治疗及其他抗肿瘤治疗，临床资料完整。40例NSCLC患者中肺腺癌21例，肺鳞癌19例；男 29例，女11例；年龄41～84岁，平均(62.4±10.8)岁；有吸烟史30例，无吸烟史10例；淋巴结转移16例，无淋巴结转移24例；肺膜侵犯16例，无肺膜侵犯24例。根据肿瘤最大径分为3组，其中肿瘤最大径<3 cm者17例，3～5 cm者15例，>5 cm者8例。肺癌TNM分期参照第9版国际肺癌TNM分期修订指南[15],其中Ⅰ+Ⅱ期30例，Ⅲ期10例。本研究通过川北医学院附属医院医学伦理委员会审核批准[伦理编号2021ER(A)014]。所有纳入研究的患者均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂

主要仪器：显微镜及成像系统购自日本奥林巴斯公司，免疫组织化学抗原修复盒、温育盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。主要试剂：Vasorin抗体(ab233181)、CD34抗体(ab81289)均购自英国Abcam公司；即用型免疫组织化学试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒、枸橼酸组织抗原修复液均购自福州迈新生物技术开发有限公司；磷酸盐缓冲液(PBS)购自中国Biosharp公司。

1.3 方法

应用免疫组织化学SP法对组织标本的Vasorin和CD34进行检测。选取患者癌组织及距此2 cm以上的癌旁组织石蜡标本，切4 μm左右的厚度。应用Vasorin和CD34抗体对组织切片进行处理。Vasorin抗体水平为20 μg/mL,CD34抗体的稀释比例为1∶3 000。组织切片均使用经微波修复的抗原，严格依照试剂盒说明书实施操作，使用DAB溶液进行显色，使用苏木精进行复染。将PBS代替一抗作为阴性对照，以排除假阳性结果。染色结果由2名专业医师通过双盲阅片进行判断，对染色范围及强度进行观察、记录。

1.4 评价标准

1.4.1 Vasorin免疫组织化学结果判读

Vasorin免疫组织化学结果判读采用半定量计数法[16]。(1)染色强度：无着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别记为0、1、2、3分。(2)染色范围：阳性细胞所占百分比<5%为0分；5%～25%为1分；>25%～50%为2分；>50%～75%为3分；>75%为4分。(1)×(2)作为总评分，<2分为阴性(-);2～4分为弱阳性(+);>4～8分为中等阳性(++);>8分为强阳性(+++)。每张切片随机观察具有代表性的5个高倍镜视野，计算总评分，取平均值作为Vasorin表达评分。

1.4.2 MVD

参照文献[17]的方法，选取CD34标记的，与邻近血管、肿瘤细胞或其他组织界限清楚的单个棕色血管内皮细胞或细胞簇作为一个微血管进行计数。先在低倍镜(100×)下于肿瘤间质内寻找5个血管内皮细胞染色最多的区域即“热点”,继而在高倍镜(400×)下计数5个视野的微血管数，取其平均值作为MVD。

1.5 统计学处理

采用SPSS25.0统计软件对资料进行统计分析。对数据进行正态性检验，呈非正态分布的计量资料以M(P25～P75)表示，配对资料比较采用配对样本Wilcoxon符号秩检验，组间比较采用Mann-WhitneyU检验或Kruskal-WallisH检验。Vasorin和CD34表达的相关性采用Spearman相关进行分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 Vasorin和CD34在NSCLC组织及癌旁组织中的表达情况

Vasorin在癌旁组织中均为阴性表达(图1A、图1B)。Vasorin在NSCLC组织中呈不同程度的阳性表达，其阳性表达率为97.5%,其中阴性1例，弱阳性23例，中等阳性10例，强阳性6例。Vasorin在NSCLC细胞质、细胞膜中着色，阳性着色呈淡黄色、棕黄色或棕褐色(图1C、图1D)。经正态性检验，Vasorin表达评分、MVD不满足正态分布。在NSCLC组织中Vasorin表达评分为4(4～8)分，明显高于癌旁组织的0(0～0)分，差异有统计学意义(Z=5.547,P<0.001)。CD34阳性表达为血管内皮细胞质呈棕黄色或棕褐色(图2)。CD34在癌灶的实质及间质中均有表达，部分呈灶状或管状。MVD在NSCLC组织中为23.5(20.8～27.6)条，明显高于癌旁正常组织中的5.6(4.4～6.0)条，差异有统计学意义(Z=5.511,P<0.001)。

2.2 不同临床病理参数NSCLC患者Vasorin表达评分和MVD比较

不同肿瘤最大径、TNM分期患者Vasorin表达评分比较，差异均有统计学意义(P<0.05),不同性别、年龄、吸烟史、组织学类型、淋巴结转移、肺膜侵犯情况患者Vasorin表达评分比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移情况患者MVD比较，差异均有统计学意义(P<0.05),不同性别、年龄、吸烟史、组织学类型、肺膜侵犯情况患者MVD比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

图1 Vasorin在NSCLC组织及癌旁组织中的表达(SP法,200×)

图2 CD34在NSCLC组织及癌旁组织中的表达情况

表1不同临床病理参数NSCLC患者Vasorin表达评分和MVD比较[M(P25～P75)]

2.3 NSCLC组织Vasorin表达评分和MVD之间的相关性分析

Spearman相关分析结果显示，在NSCLC中Vasorin表达评分与MVD无相关性(rs=0.246,P>0.05)。

3、讨论

肺癌的发生、发展是一个多因素、多步骤和多基因参与的复杂过程。在我国，由于人口老龄化、工业化、城市化进程的加剧，生活方式的转变等原因，肺癌的发病率和病死率呈不断上升趋势，且中青年患者的比例逐渐增加[18],肺癌疾病负担日益加重。尽管目前肺癌的研究层出不穷，但肺癌的早期诊断、早期治疗依旧存在不足，肺癌预后仍不理想。Vasorin通过激活STAT3和抑制Notch通路促进神经胶质瘤的进展和血管生成[8],通过调控STAT3磷酸化及下游基因CCND1和MMP2的表达促进肝细胞癌的增殖和迁移[10],通过影响YAP/TAZ的表达促进喉癌的发展[12],Vasorin与YAP相互作用，通过激活YAP/TAZ-TEAD靶基因CTGF和PTEN/PI3K/AKT通路抑制YAP磷酸化并刺激结直肠癌增殖、迁移和侵袭[13]。Vasorin参与了多种肿瘤的信号通路，可能在肿瘤细胞生长、存活、转移和血管生成等肿瘤发病机制中发挥作用，可能是一种潜在的肿瘤生物学标志物。目前，Vasorin在NSCLC血管生成方面的研究较缺乏，基于此，本研究通过对Vasorin和CD34进行免疫组织化学研究，探讨Vasorin与NSCLC血管生成之间的关系，以期为NSCLC寻找一种新的分子标志物。

本研究结果显示，Vasorin在NSCLC组织中的表达评分明显高于癌旁组织，并且不同肿瘤最大径、TNM分期NSCLC患者Vasorin表达评分比较，差异有统计学意义(P<0.05),研究结果与以下结果相似：LIANG等[8]研究结果表明，Vasorin过表达导致胶质瘤肿瘤增大，并且Vasorin的表达评分与MVD呈正相关，Vasorin促进胶质瘤的进展和血管生成，被确定为胶质瘤不良进展的预测因子。CHEN等[14]研究结果表明，Vasorin在人肺癌组织和细胞系中的表达增加，Vasorin过表达在肺腺癌(52.7%)中显著高于肺鳞癌(21.0%),与肺腺癌患者的生存率呈负相关，但与肺鳞癌患者生存率的关系尚不明确，Vasorin可能参与了肺腺癌、肺鳞癌的发病机制。本研究结果显示，Vasorin表达评分在肺腺癌和肺鳞癌中比较，差异无统计学意义(P>0.05)。上述研究结果的差异可能与肺腺癌、肺鳞癌中TNM分期的分布不同，以及与Vasorin的评估方法不同有关，未来需要更深入地研究肺腺癌、肺鳞癌患者Vasorin表达与生存率的关系及可能作用机制。

肿瘤的生长、侵袭、转移与微血管的形成密不可分[19]。本研究结果发现不同肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移情况NSCLC患者MVD比较，差异有统计学意义(P<0.05),与其他研究结果一致[20-21]。但本研究发现，Vasorin评分与MVD无相关性(P>0.05),提示Vasorin在NSCLC血管生成方面可能不具有关键性作用。

Vasorin/活性氧(ROS)/自噬/凋亡通路是肺癌的发病机制，涉及肺癌发展的早期阶段[14]。Vasorin在NSCLC中过表达，是一种潜在的肺癌促癌因子，通过抑制ROS介导的自噬和凋亡，促进香烟烟雾诱导的支气管上皮细胞转化。本研究结果发现Vasorin表达评分与肿瘤大小、TNM分期密切有关，可能参与了NSCLC发生、发展过程，临床可将Vasorin作为评估NSCLC进展和预后的重要指标进行检测，为临床治疗提供参考。Vasorin在NSCLC的作用机制及其是否可作为预测预后的指标仍有待后期多中心、大样本研究进一步探讨和阐明。

参考文献:

[7] 程继荣,徐虓,王淑琴,等.肺癌组织CD31､CD34及CD105标记的微血管密度的临床意义[J].中国癌症杂志,2010,20(8):638-640.

[16] 《免疫组织化学检测技术共识》编写组.免疫组织化学检测技术共识[J].中华病理学杂志,2019,48(2):87-91.

[18] 金美华,唐娟,秦家丽,等.2002—2020年间的肺癌流行病学分析[J].华夏医学,2021,34(6):34-38.

[20] 姚传山,马磊,赵旭林,等.CD34､VEGF在非小细胞肺癌中的表达及意义[J].中国实用医药,2014,9(35):28-29.

[21] 赵天源,常延河,张艳敏,等.非小细胞肺癌中KiSS-1､MMP-2和MVD的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2020,36(2):199-202.

基金资助:四川省南充市市级科技计划项目(23JCYJPT0035);川北医学院校级科研发展基金项目(CBY23-QNA47);

文章来源:何芳,谭皓,黄语嫣,等.Vasorin在非小细胞肺癌中的表达及与临床特征的关系[J].检验医学与临床,2024,21(21):3117-3120+3125.