microRNA(miRNA)是一类长19～25个核苷酸的非编码RNA,是重要的转录后调控因子,通过靶向mRNA抑制基因翻译或促进RNA降解。研究发现,miRNA在癌症的发生发展过程中起到了重要的调控作用,能够通过靶向调控下游基因的表达影响癌细胞的增殖、凋亡、分化及迁移等[1]。因此,本文就卵巢癌组织中miRNA表达及临床意义的相关研究进展做一综述。

1、miRNA与肿瘤的发生发展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,通过调控基因的表达进而调节多种重要的生物过程,包括细胞发育、增殖、分化、凋亡、信号转导及肿瘤的发生和发展。miRNA表达异常常见于人类恶性肿瘤中,有报道其促进癌症的进展。在卵巢癌细胞系中检测到的致癌基因和抑癌基因的表达异常是肿瘤细胞生长所必需的。miRNA具有高度保守性,一个miRNA可以调控不同的靶基因,一个基因可能受多个miRNA调控。miRNA参与调节胚胎发育、器官分化、细胞增殖、细胞凋亡、细胞代谢等多个生理过程。研究发现miRNA在疾病,尤其是肿瘤的发生和发展过程中具有重要的调控作用。许多miRNA可调节细胞的增殖、分化等功能,若这类miRNA表达异常,则可能导致肿瘤的发生。

2、卵巢癌与miRNA

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一,其发病率高居全球女性恶性肿瘤第二位,死亡率排名第四。据统计,全球每年约有53万例卵巢癌新发病例,死亡病例约为27.5万例。卵巢癌的发病机制较为复杂,与病毒感染、性行为及分娩、癌基因激活和抑癌基因失活等多种因素有关。目前大多数卵巢癌患者确诊时已是中晚期,因此寻找可靠的肿瘤标志物对卵巢癌早期预防、诊断以及治疗具有十分重要的意义。事实上,在卵巢癌中均存在各种miRNA表达异常,大量研究证实miRNA与卵巢癌的发生和发展存在必然联系[2,3,4]。因此就miRNA对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响进行综述研究,有益于卵巢癌的临床诊断和预后判断。根据卵巢癌miRNA作用靶基因的不同,可以将卵巢癌miRNA大致分为具有抑癌基因样功能的抑癌miRNA(TumorsuppressormiRNA),即卵巢癌中表达上调的miRNA,和具有癌基因样功能的促癌miRNA(OncogenemiRNA),即卵巢癌中表达下调的miRNA。

2.1卵巢癌中表达上调的miRNA

2.1.1miRNA-7、miRNA-21、miRNA-184:

巨少龙等[1]探讨miRNA-7(miR-7)过表达对上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。成功构建了pIRES-miR-7重组质粒,将其转染SKOV3细胞后筛选出稳定转染pIRES-miR-7的SKOV3细胞克隆,其表达的miR-7水平显著高于pIRESSKOV3组及野生型SKOV3组。孙连碧等[2]探讨miR-7过表达对上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。成功构建了pIRES-miR-7重组质粒,将其转染SKOV3细胞后筛选出稳定转染pIRES-miR-7的SKOV3细胞克隆,其表达的miR-7水平显著高于pIRESSKOV3组(P<0.01)及野生型SKOV3组,且细胞增殖及侵袭能力pIRES-miR-7SKOV3组比pIRESSKOV3组下降。周兵[3]应用microarray芯片技术检测了CD133/1+和CD133/1-细胞的miRNA表达谱,与CD133/1-细胞相比,miR-21在CD133/1+细胞中的表达下降,选取miR-21表达下降的CD133/1+细胞为研究对象,在卵巢癌OVCAR3细胞系中存在少数的CD133/1+卵巢癌干细胞,成熟型miR-21在CD133/1+卵巢癌干细胞中的表达下降。王立群[4]观察了miR-21在卵巢癌组织中的表达及意义,分析miR-21表达变化对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响,结论显示,miR-21和TLR4mRNA在卵巢癌组织中呈高表达,且与患者的卵巢癌组织学分级和淋巴结转移密切相关。汤锶锶等[5]探讨miR-184通过JNK信号通路对卵巢癌增殖与凋亡的影响。收集卵巢癌患者的癌组织与癌旁组织标本,荧光定量PCR检测miR-184表达;采用Lipofectamine2000将miR-184inhibitor和miR-184mimic分别转入卵巢癌细胞株OVCAR3,qPCR检测其转染效率。结果表明,卵巢癌组织中miR-184表达较癌旁组织明显升高。

2.1.2miRNA-199a、miRNA-200b:

张丽娟等[6]探讨miR-199a-3p对卵巢癌SK0V3细胞增殖、侵袭能力的影响及其作用机制。以卵巢癌SK0V3细胞系为研究对象,将进入对数生长期的细胞按照生长情况分为miR-199a-3p过表达组、miR-199a-3p抑制组和对照组,观察miR-199a-3p过表达和抑制效率及其对卵巢癌SK0V3细胞增殖、侵袭及c-Met、MMP-2和CD44蛋白表达的影响。结果与对照组比较,miR-199a-3p过表达组SK0V3细胞中miR-199a-3p呈高表达状态,且SKOV3细胞与细胞克隆数量、侵袭细胞数量、c-Met及其下游蛋白MMP-2和CD44的表达水平均降低。王景胜等[7]分析上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中微小RNA-200b(miR-200b)的表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性。结果显示,上皮性卵巢癌组血浆中miR-200bmRNA的表达水平较对照组明显升高。相比空白对照组、阴性对照组,干扰miR-200b基因表达后实验组SKOV3细胞中MMP-9蛋白和mRNA的表达水平均显著下降。

2.2卵巢癌中表达下调的miRNA

2.2.1miRNA-26a、miRNA-93、miRNA-99、miRNA-101:

孙连碧等[8]探讨miR-26a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-26a抑制剂组、miR-26a模拟物组和对照组,分别将miR-26a抑制剂或miR-26a模拟物转染至miR-26a抑制剂组或miR-26a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-timePCR法检测各组细胞miR-26a表达水平。结果表明,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞miR-26a表达水平显著降低。崔彦芬等[9]研究miR-93对卵巢癌细胞系OVCAR3侵袭及迁移能力的影响。用miR-93的成熟模拟物过表达miR-93,用化学合成的特异性抑制物下调miR-93的表达。结果表明,miR-93过表达后,OVCAR3细胞的侵袭和迁移能力显著增强。降低内源性miR-93的表达后,OVCAR3细胞的侵袭和迁移能力均下降。因此miR-93能明显促进卵巢癌OVCAR3细胞的侵袭和迁移。陈雨龙[10]检测TGF-β1诱导卵巢癌细胞上皮—间质转化过程中miR-99家族表达水平的变化及其对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭的影响,探讨miR-99家族作为判断卵巢癌恶性程度评价指标及其作为治疗靶点的可能性。孙连碧等[11]探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响及可能机制。结果表明,miR-101模拟物组SKOV3细胞miR-101表达水平显著升高。结果表明,miR-101可能通过下调Girdin的表达抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移。

2.2.2miRNA-125b、miRNA-204、miRNA-320:

何小茜[12]构建并鉴定miR-125b慢病毒过表达载体,研究miR-125b对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及其可能机制。该研究成功构建miR-125b慢病毒过表达载体,感染卵巢癌SKOV3细胞后,能够过表达miR-125b,并抑制SKOV3细胞的增殖及迁移,降低潜在靶基因HER-2的表达。该研究证明,miR-125b能够抑制SKOV3细胞的增殖及迁移,并可能通过降低潜在靶基因HER-2的表达而实现。张青冬等[13]探讨miR-204在卵巢癌组织中的表达情况及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。实验组与空白组和对照组之间都有显著性差异;而空白对照组与载体对照组之间都没有显著性差异,说明过表达miR-204能够抑制细胞的增殖能力,促进细胞凋亡并且影响细胞侵袭能力。过表达miR-204能够抑制细胞的增殖能力,促进细胞凋亡并且影响细胞侵袭能力。余俊等[14]miR-320a作为miRNA类型之一,在多种恶性肿瘤组织中表达异常,与肿瘤发生、进展及预后关系密切。本研究分析卵巢上皮性癌组织中miR-320a表达,并探讨上调人卵巢癌SKOV3细胞中miR-320a表达对癌细胞增殖和侵袭力的影响。结论表明,miR-320a在上皮性卵巢癌组织中呈低表达,且与肿瘤发生及恶性化进展有关。上调SKOV3细胞中miR-320a表达可抑制细胞增殖及细胞侵袭力,其机制可能与抑制上皮-间质转化有关。

2.2.3miRNA-451、miRNA-551、miRNA-761、miRNA-1285:

蔡智慧等[15]研究卵巢癌病灶内miR-451表达量与增殖、凋亡基因表达的相关性。结果表明,卵巢癌灶内miR-451与MMP9的mRNA表达量呈负相关,与CHOP的mRNA表达量呈正相关。卵巢癌病灶内miR-451的低表达与细胞周期正性调控蛋白及增殖基因的高表达、细胞周期负性调控蛋白及凋亡基因的低表达密切相关,可能是促进卵巢癌病灶生长的关键因素。聂金霞等[16]探讨长链非编码RNAPVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。结论表明,PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。李经纬等[17]探讨miR-761对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响以及相关机制。结果表明,miR-761过表达显著抑制了卵巢癌SKOV3细胞的增殖,极大降低了CRKL在SKOV3细胞中的mRNA和蛋白水平;miR-761和CRKL存在靶向结合,并明确了其结合位点;CRKL过表达显著增强了卵巢癌SKOV3细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-761抑制SKOV3细胞增殖的作用。miR-761能够通过靶向下调CRKL,抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖。李娜等[18]探索人体卵巢癌细胞微miR-1285的表达及其在卵巢癌病变细胞增殖与凋亡过程中的作用。荧光定量PCR检测结果表明,miR-1285在患者卵巢癌组织细胞中的表达水平低于其对应癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在卵巢癌患者的癌细胞中,miR-1285的表达明显降低,其可能参与卵巢癌的发生、发展,并且与卵巢癌细胞的增殖和凋亡密切相关。

3、小结与展望

综上所述,在卵巢癌组织中高表达的miRNA有miRNA-7、miRNA-21、miRNA-184、miRNA-199a、miRNA-200b等,这些miRNA可能作为癌基因调控卵巢癌的发生及发展。在卵巢癌组织中表达下调的miRNA有miRNA-26a、miRNA-93、miRNA-99、miRNA-125b、miRNA-204、miRNA-320、miRNA-451、miRNA-551、miRNA-761、miRNA-1285等发挥抑癌基因的作用。这些miRNA与卵巢癌的增殖、迁移、侵袭及凋亡等生物学过程有关,同时还与卵巢癌的发生、发展、诊断治疗、药物耐药以及复发监测、预后评估等密切相关。相信在不久将来,随着miRNA在卵巢癌研究中地不断深入,将开辟出一条卵巢癌的临床诊断、预后判断、疗效评价的新途径。

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基金:长沙市科技局项目(ZD1801008);湖南省教育厅项目(18C1856);湖南省普通高校青年骨干教师培养项目(2019100).