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多发性骨髓瘤中相关自噬蛋白LC3的表达及意义

2024-11-15 26 上传者：管理员

摘要：目的：探讨多发性骨髓瘤(MM)微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达，进一步探讨其与MM疾病的关系。方法：通过前瞻性分析福建医科大学附属南平第一医院初诊的MM患者自噬蛋白LC3含量，通过与正常人群LC3蛋白表达量相比较进而分析MM患者蛋白表达量水平差异。结果：在MM瘤患者中LC3 I、LC3Ⅱ蛋白的表达量显著低于对正常人群，差异有统计学意义(P<0.05),且LC3 I、LC3Ⅱ表达呈正相关(r=0.777,P=0.000)。结论：自噬蛋白LC3可能与MM的发生及发展有一定相关性。

关键词：
MM
多发性骨髓瘤
微管相关蛋白1轻链3
浆细胞恶性疾病
自噬
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血液系统的第二大恶性肿瘤仍是多发性骨髓瘤(MM)[1],MM是一种起源于浆细胞的克隆性增殖的恶性疾病，骨痛、贫血、肾脏损伤以及免疫系统功能的损伤等临床表现与预后情况具有明显差异性。现阶段MM患者仍无法完全治愈，临床工作上多采用联合化疗以便达到可以延长该人群的生存期[1-2]。近年来，在对MM疾病的认识及治疗上已经取得了明显的进步。但是，迄今为止，MM目前面临的一个非常现实问题就是复发，绝大多数的MM患者最终的结局都是复发。作为一种具有异质性的浆细胞恶性疾病，该异质性不仅是存在临床特征方面，同时在生存上也存在异质性。大量研究表明异质性与患者具有不同的生物学特征相关[3-4]。自噬是一种细胞死亡机制，其可通过抵御细胞内外的压力进而维持细胞的稳态。自噬如果一旦出现缺陷就可诱导细胞内的DNA损伤、从而导致染色体不稳定。诸多研究发现，自噬不仅可以很好地抑制肿瘤的发生，同时也可以促进大量肿瘤疾病的发生。微管相关蛋白1轻链3(LC3)是其中一种编码自噬相关蛋白的重要基因[5]。本研究旨在探讨MM中LC3蛋白的表达及意义。

1、材料与方法

1.1 研究对象：

研究对象为2022年12月～2023年12月就诊于福建医科大学附属南平第一医院的48例初诊MM患者。纳入标准：①所有确诊病例均通过骨髓细胞形态学、活组织及血清单克隆免疫球蛋白等检测确诊，且诊断及治疗指证均遵循《中国多发性骨髓瘤诊治指南(2022年修订)》;②所有病历资料均完整；③患者均具有正常语言沟通能力，同时可配合完成相关调查。排除标准：①临床相关资料不完整；②合并其他恶性肿瘤。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法：

将新鲜的MM患者血液标本采用液氮冷冻，经RIPA裂解，离心后取上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度定量，样品煮沸变性后上样、电泳。TBST洗涤5 min×3次，5%的脱脂牛奶室温摇床封闭1 h; 加入一抗LC3:1∶1 000于4 ℃孵育过夜；TBST洗涤5 min×3次；二抗室温孵育1 h; TBST洗涤5 min×3次，ECL曝光，分析目的蛋白和β-actin的吸光度值，以目的蛋白和β-actin吸光度值的比值作为目的蛋白的相对表达量。

1.3 统计学方法：

采用SPSS26.0统计学软件进行非参数检验。运用Graph pad8.0及Image J进行图像和数据处理，相关性采用Spearman相关分析。

2、结果

LC3Ⅰ、LC3Ⅱ在MM组及对照组的表达情况及相关性分析：LCI在两组样本比较后差异有统计学意义(t=2.515、P=0.019);LCⅡ在两组样本比较后差异有统计学意义(t=9.712、P=0.000);同时进行LC3I与LC3Ⅱ相关性分析显示：两者呈正相关性(r=0.777,P=0.000)。见表1。

表1两组中自噬蛋白LC3I、LC3Ⅱ的表达比较

3、讨论

伴随着越来越多新的治疗方法[如：蛋白酶体抑制剂伊莎佐米及卡菲佐米、免疫调节剂来那度胺及泊马度胺、单克隆抗体(CD38单抗等)、嵌合抗原受体T细胞免疫疗法造血干细胞移植等]的临床应用，MM患者的总体生存与预后相较既往虽已得到了相对良好的改善，但现阶段国内外仍无办法达到根治的理想治疗目标，每一个患者随着时间的推移都面临着原发病复发的极大风险[5-6]。现有多项研究表明，MM的病因是多种因素综合作用在一起导致的，如与遗传易感性、电离辐射、感染、接触有害的化学物质、长期反复的炎性反应刺激、既往是否存在着自身免疫性相关疾病等[7-12]。目前MM 无法完全治愈，且具有高度异质性，因此分析及了解与MM相关的因素对临床有重要意义。

LC3蛋白作为自噬过程中的重要蛋白，LC3在细胞内主要存在两种亚型LC3-Ⅰ型和LC3-Ⅱ 型。LC3常被作为自噬起始的标志物，同时也被作为检测细胞自噬相关程度的分子标志，当细胞自噬发生时，细胞内定位于自噬体膜的LC3,其主要的作用是参与自噬相关蛋白的募集，进而使自噬体的双层膜不断延长。其中LC3-Ⅰ是一个需要Atg7和Atg3(分别对应E1和E2样酶)参与的泛素样反应，结合到磷脂酰乙醇胺(PE)。同时脂质化形式的 LC3被称作LC3Ⅱ,附着到自噬体的膜上[13-15],本试验中检测的LC3蛋白为LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ蛋白两种，此次研究中发现，MM研究组中自噬蛋白LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ的表达量较对照组明显下降，且该研究Spearman相关性分析显示发现LC3 Ⅰ与LC3 Ⅱ呈正相关。

本研究分别检测细胞自噬相关蛋白及其表达水平，可以认为MM患者中自噬水平较非MM中自噬水平升高，这可能是由于恶性肿瘤细胞由于其本身的“永生性”及高代谢状态使得细胞内本身处于营养物质及血供相对不足的状态，正是由于这种状态可以激活细胞的相关自噬信号通路，从而使其自噬活性增强。因为某种因素使得细胞的自噬活性增强后，细胞从而处于营养供应充足、微环境平衡的理想状态，细胞的需求得到了大大的满足，为细胞提供了无限繁殖，但细胞自噬水平的升高与MM的因果关系尚不明了，需进一步研究证实，为MM的治疗提供更可靠的依据[16]。同时多项研究发现，肿瘤患者中LC3呈现高表达，同时恶性肿瘤细胞活性也相对较强，最终病情进展也非常迅速[13-18]。

综上，在MM患者中LC3 I、LC3 Ⅱ蛋白的表达量显著低于对正常人群，且LC3 I、LC3 Ⅱ表达呈正相关，因此自噬蛋白LC3可能与MM的发生及发展有一定相关性。

参考文献:

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[14]程建超,童佳兵,朱洁,等.芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(9):29-35.

[15]魏姗姗,严卿文,闫璐,等.mTOR､Beclin1和LC3在非黑色素瘤性皮肤肿瘤中的表达[J].中国老年学杂志,2021,41(11):2279-2283.

[16]田亚.自噬相关蛋白及基因LC3-Ⅱ､P62在儿童急性白血病中的表达及临床意义[D].石家庄:河北医科大学,2017.

[17]袁冬冬,温艳艳,何慧丽,等.胃癌组织中LC3､ATG5和SATB2-AS1在不同部位表达与临床病理特征及预后的相关性[J].实用癌症杂志,2023,38(2):207-212.

[18]王小文,谢金龙,朱晓芸,等.胃癌组织中自噬相关蛋白与上皮间质转化的关系及意义[J].肿瘤药学,2023,13(4):475-479.